Pneumococii și structura lor. Pneumococ

03.03.2020

MINISTERUL SĂNĂTĂȚII AL FEDERATIEI RUSE UNIVERSITATEA MEDICALĂ DE STAT KAZAN DEPARTAMENTUL DE MICROBIOLOGIE

PNEUMOCOC

KAZAN 1999

UDC 576.851.21(07)

Publicat prin decizie a Consiliului Central de Coordonare și Metodologie al Universității de Stat de Medicină din Kazan.

Compilat de:

(Șeful Departamentului de Microbiologie, Doctor în Științe Medicale, Profesor O.K. Pozdeev, Asistent al Departamentului de Microbiologie, Candidat la Științe Medicale, E.R. Fedorova.

Recenzători:

Șef al Departamentului de Epidemiologie, Universitatea de Medicină de Stat din Kazan, doctor în științe medicale, profesor asociat M.Sh. Shafeev, șeful Departamentului de Epidemiologie, Academia Medicală de Stat Kazan, doctor în științe medicale, profesorul V.E. Grigoriev.

Pneumococi /O.K. Pozdeev, E.R. Fedorov - Kazan: KSMU, 1999. - 14 s.

Universitatea Medicală de Stat din Kazan, 1999

Pneumococul (Streptococcus pneumoniae) a fost izolat pentru prima dată de Pasteur (1881) în timp ce lucra la un vaccin antirabic și a fost considerat inițial agentul cauzal al rabiei. Rolul etiologic al microorganismului în dezvoltarea pneumoniei la om a fost dovedit de Frenkel și Weichselbaum (1884). Bacteriile colonizează organismele umane și animale și aparțin grupului de așa-numitele streptococi „orale”. Sunt principalii agenți cauzali ai pneumoniei și pot provoca, de asemenea, pleurezie, meningită, ulcere corneene târâtoare, inflamație purulentă a urechii medii, afecțiuni septice și alte boli. În ediția a IX-a a Ghidului lui Bergey pentru bacterii (1994), pneumococii sunt incluși în grupul 17, „Coci gram-pozitivi”.

Epidemiologia leziunilor. Pneumococul este unul dintre principalii agenți cauzali ai pneumoniei bacteriene înregistrate în afara spitalelor (2-4 cazuri la 1000 de persoane); În fiecare an, în lume se observă cel puțin 500.000 de cazuri de pneumonie pneumococică (valoarea reală este mult mai mare). Copiii și bătrânii sunt cei mai susceptibili la infecție. Rezervorul infecției sunt pacienții și purtătorii (20-50% dintre copiii preșcolari și 20-25% dintre adulți); principala cale de transmisie este contactul; în timpul focarelor este și în aer. Incidenta maxima apare in sezonul rece. În marea majoritate a cazurilor forme clinice infecțiile se dezvoltă atunci când rezistența organismului este afectată (inclusiv din cauza stresului la rece), precum și pe fondul altor patologii (anemie falciformă, boala Hodgkin, infecția cu HIV, mielom, diabetul zaharat, afecțiuni după splenectomie etc.) sau cu alcoolism. Opțiunile 1, 2 și 3 joacă cea mai mare semnificație epidemiologică în patologia la adulți; pentru copii - 1, 2, 3 și 14 opțiuni. Virulența serovarilor în ordine descrescătoare este variantele 3, 1, 2, 5, 7 și 8. Șoarecii albi (dacă sunt infectați, mor din cauza septicemiei în 24 de ore), vițeii, mieii, purceii, câinii și maimuțele sunt sensibili la pneumococi.

Morfologie. Pneumococii sunt imobili, nu formează spori și au o formă ușor alungită, care amintește de contururile flăcării unei lumânări. În frotiuri de material clinic, acestea sunt aranjate în perechi, fiecare dintre acestea fiind înconjurat de o capsulă groasă. În frotiurile din mediile de cultură, acestea pot fi localizate în lanțuri scurte și pot fi mai rotunjite. Pe medii simple formează o capsulă subțire; dezvoltarea sa este stimulată prin introducerea de sânge, ser sau lichid ascitic. Formarea capsulelor este cea mai pronunțată la bacteriile de tip III. Când este aranjată în lanțuri, capsula poate fi comună.

Proprietăți culturale. Pneumococii sunt aerobi sau anaerobi facultativi; La cultivare se preferă condițiile capnofile (5-10% CO2). Sunt chemoorganogrofi și cresc bine pe medii de sânge sau ser suplimentate cu 0,1% glucoză. Pot crește în intervalul de temperatură de 28-42 °C, optim - 37 °C. pH optim -7,6-7,8. Pe medii dense formează colonii delicate, translucide, clar definite, cu un diametru de aproximativ 1 mm. Uneori pot fi plate cu o depresiune centrală; ca și alți streptococi, coloniile nu fuzionează niciodată

între ei. Pe agar-sânge formează mici colonii translucide de culoare gri-verzuie. Centrul coloniilor este mai întunecat, periferia este mai deschisă. Sub colonie și de-a lungul periferiei acesteia, o zonă de a-hemoliză este vizibilă sub forma unei zone decolorate verzui (care se datorează tranziției hemoglobinei la methemoglobină). Coloniile de pneumococ de tip III au adesea o consistență mucoasă și au o dimensiune de până la 2 mm. Sunt puțin tulburi și se pot contopi unul cu celălalt. Ele formează forme S și R de colonii. La trecerea de la forma S la forma R, ei își pierd capacitatea de a sintetiza capsula. Pe medii lichide cu ser si glucoza 0,2% dau turbiditate uniforma si un sediment mic floculant. Cu cultivarea prelungită, sedimentul crește.

Durabilitate. Pneumococii aparțin grupului de microorganisme instabile. Ele persistă în spută uscată până la două luni. Poate fi depozitat o lungă perioadă de timp la temperaturi scăzute; la o temperatură de 60 °C mor în 3-5 minute. O soluție de 3% de acid carbolic îi ucide în 1-2 minute. Optochina (la concentrație de 1:100.000) și bila au un efect dăunător asupra pneumococilor, care este folosit pentru a identifica bacteriile.

Pneumococii diferă de alte microorganisme printr-o serie de proprietăți (Tabelul 1).

Tabelul 1 Proprietățile biochimice ale pneumococilor

Substratul de testare	Rezultat	Substratul de testare	Rezultat
Creștere la 100°C

		Rafinoza
Miercuri cu 6,5% Nad

a-hemoliza
B-hemoliza		Trehaloză
		Fosfatază
Hipurat		β-galactozidaza


Glicerol

Denumiri: „+” - 90% sau mai multe tulpini sunt pozitive; (+) - 80-89% dintre tulpini sunt pozitive; d - 21-79% dintre tulpini sunt pozitive; (-) - 11-20% dintre tulpini sunt pozitive; „- - 90% sau mai multe dintre tulpini sunt negative.

Structura antigenică. La pneumococi s-au găsit mai multe tipuri de antigene: polizaharidă, antigen 0-somatic, situat în peretele celular; antigenele K capsulare polizaharide și proteina M. Antigenul somatic polizaharidic este similar cu substanța C a altor streptococi. Relația determină asemănarea în structura chimică a acizilor ribitteicoici asociați cu fosfatul de colină. Antigenii capsulei au si natura polizaharidica, formata din monozaharide repetate in diverse combinatii: D-glucoza, D-galactoza si L-ramnoza. Pe baza structurii antigenelor capsulare, pneumococii sunt împărțiți în 84 de serovari. Trebuie amintit că antigenele capsulare reacționează încrucișat cu antiserurile la antigenele streptococilor de grup A și B, precum și cu serurile la antigenele Klebsiella și Escherichia. În timpul trecerii de la forma S la R, antigenele capsulare se pierd. Pentru serotipizarea pneumococilor se produc seruri de grup, desemnate cu litere latine (A, B, C, D etc.) si seruri serovariante, desemnate cu cifre romane. Serul aglutinant III nu este inclus în amestecurile de ser. Este eliberat separat și nu poate fi crescut. La om, pneumococii serovarianților I, II și III sunt cel mai adesea izolați. Sunt cele mai virulente pentru om, astfel încât testul de aglutinare se efectuează inițial folosind antiseruri la aceste variante. Dacă rezultatul este negativ, reacția de aglutinare se realizează cu un amestec de seruri A, B, C etc. (până se obține un rezultat pozitiv), apoi cu antiseruri separate. Pentru o identificare mai rapidă a serovariilor, se utilizează reacția Neufeld (umflarea capsulei imune). Metoda se bazează pe capacitatea capsulelor pneumococice de a crește în volum în prezența antiserului omolog, care este înregistrat prin microscopie optică ușoară. Polizaharidele capsulare au proprietăți sensibilizante, manifestate prin dezvoltarea unei reacții de hipersensibilitate de tip întârziat, detectată cu ajutorul testelor cutanate.

Factori de patogenitate. Factorul principal este capsula, care protejează bacteriile de potențialul microbicid al fagocitelor și le abate de la acțiunea opsoninelor. Tulpinile neîncapsulate sunt practic avirulente și sunt rare. Majoritatea grupului de AT antipneumococice constă din AT la capsule Ag. O funcție importantă a capsulei și a proteinei M este, de asemenea, de a asigura aderența la mucoasă. Substanța-C are o importanță semnificativă, în special interacționând cu proteina C-reactiva. Consecința unei astfel de reacții este activarea cascadei complementare și eliberarea mediatorilor faza acută inflamaţie; acumularea lor în țesut pulmonar stimulează migrarea fagocitelor polimorfonucleare. Formarea de infiltrate inflamatorii puternice este însoțită de o întrerupere a homeostaziei țesutului pulmonar și de hepatizarea acestuia. Pneumococii produc endotoxină, a- și beta-hemolisine (pneumolizine) și leucocidină. α-pneumolysin este o proteină termolabilă capabilă să neutralizeze O-streptolizina,

substanță eritrogenă, neuraminidaza. De asemenea, pneumococii sintetizează o serie de enzime care contribuie la patogeneza leziunilor - muramidaza, hialuronidaza (promovează răspândirea microorganismelor în țesuturi), peptidaza (descompune IgA).

Patogenia leziunilor. Biotopul pneumococilor este tractul respirator superior. Patogenia majorității pneumoniilor implică aspirarea salivei care conține S. pneumoniae și pătrunderea bacteriilor în secțiuni inferioare căilor respiratorii. Încălcarea mecanismelor de drenaj protector - impulsul tusei și clearance-ul mucociliar - este esențială. La adulți se observă mai des leziunile pulmonare lobare la copii și vârstnici, predomină leziunile peribronșice sau focale; Formarea de infiltrate inflamatorii puternice este însoțită de o întrerupere a homeostaziei țesutului pulmonar și de hepatizarea acestuia. Infecțiile cu serovarul 3 cel mai virulent pot fi însoțite de formarea de cavități în parenchimul pulmonar. Din focarul primar, agentul patogen poate pătrunde în cavitatea pleurală și pericard sau poate disemina pe cale hematogenă și poate provoca meningită, endocardită și leziuni articulare.

Manifestari clinice. Pneumonia pneumococică clasică începe brusc; Ei observă o creștere a temperaturii corpului, o tuse productivă și dureri în piept. La persoanele slăbite și la vârstnici, boala se dezvoltă lent, cu febră ușoară, tulburări de conștiență și semne de insuficiență cardiacă pulmonară. Meningita streptococică este înregistrată în toate grupe de vârstă; se caracterizează printr-un debut violent cu creșterea temperaturii corpului, rigiditate a mușchilor gâtului, dureri de cap, greață și vărsături. Leziunile vaselor de meninge sunt adesea însoțite de pierderea conștienței; în rândul copiilor și vârstnicilor, mortalitatea poate ajunge la 80%. Destul de des, leziunile pneumococice hematogene, precum și sinuzita, mastoidita, otita medie, endocardita și peritonita, sunt observate la persoanele cu imunodeficiențe (de exemplu, infectate cu HIV) sau la pacienții cu splenectomie. După boală trecută se dezvoltă o imunitate instabilă, care este specifică tipului și este cauzată de apariția anticorpilor împotriva polizaharidei capsulare tipice.

Tratament. Baza tratamentului pentru infecția pneumococică este antibioticele - penicilină, tetraciclină, cloramfenicol, vancomicina, rifampicină, ceftriaxonă.

Prevenirea. Prevenție nespecifică infecții pneumococice are ca scop identificarea pacienților și purtătorilor cu tratamentul ulterior. Pentru prevenirea specifică a infecției, copiii cu vârsta peste doi ani, adulții cu risc, precum și persoanele sănătoase în timpul unui focar de boală sunt vaccinați cu vaccinul polizaharidic polivalent „Pneumovex 23”. Medicamentul conține 23 de antigene polizaharide capsulare ale pneumococilor (1, 2, 3, 4, 5, 6B 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 1-9F, 209). , 22F, 23F, 33F). Antigene

pneumococii au fost obținuți din 90% dintre tulpinile izolate din sângele pacienților cu infecție pneumococică invazivă din SUA și corespunzătoare tulpinilor găsite în Rusia. Imunizarea se efectuează de două ori cu un interval de 5-8 ani.

După vaccinare, se creează imunitatea artificială, activă, specifică tipului.

Diagnosticul de laborator. „Standardul de aur” este izolarea agenților patogeni. Trebuie amintit că materialul trebuie examinat rapid, deoarece bacteriile sunt predispuse la autoliză rapidă datorită activității enzimelor intracelulare. Materialul pentru studiu este spută, revărsare pleurală și alte exsudate, lichid cefalorahidian, sânge, mucus din nas și faringe, secreții din ulcerații oculare, scurgeri din ureche, urină, bucăți de organe (în caz de deces al pacientului) . Un răspuns semnal la infecția pneumococică poate fi emis atunci când neutrofile și diplococi lanceolați gram-pozitivi (cel puțin 10 pe câmp vizual) sunt detectați în frotiurile de spută. În caz contrar, recurg la izolarea agentului patogen.

Prima etapă a studiului. Materialul patologic este supus unei bacterioscopii preliminare (cu excepția sângelui). Sputa se pune într-o cutie Petri sterilă, se spală, se captează cu o buclă un nod mucos purulent, se măcina pe o lamă de sticlă, se usucă și se colorează cu o colorație Gram. Frotiul evidențiază coci gram-pozitivi în formă de lancetă sau ovale, înconjurați de o capsulă (formarea capsulei se observă numai la pneumococii izolați de la animalele bolnave și infectate). Detectarea capsulelor pneumococice poate fi efectuată folosind metoda Burri-Gins. Inocularea materialului patologic se efectuează pe 5-10% agar sânge sau ser și pe mediu de îmbogățire (8-10% bulion de zer). Dacă se suspectează sepsis de natură pneumococică, se inoculează 5-10 ml din sângele pacientului în 45-90 ml bulion de zer. Lichidul cefalorahidian, dacă este limpede, este centrifugat și câteva picături din sediment sunt inoculate pe medii nutritive. Ca mediu de îmbogățire se utilizează agar semisolid din zer. Culturile sunt incubate la 37 °C timp de 24 de ore. Cea mai bună metodă pentru izolarea unei culturi pure de pneumococi este de a infecta șoarecii albi cu material patologic. Sputa, spălată într-o cutie Petri cu soluție salină sterilă, este măcinată într-un mojar steril cu un pistil steril sau sticlă spartă atunci când se adaugă soluție salină în raport de 1:2-1:5. Suspensia este decantată, lichidul supernatant în cantitate de 0,5-1 ml este administrat intraperitoneal la șoareci albi. Dacă pneumococii sunt prezenți în material, șoarecii mor în 72 de ore. Pneumococii tipici se găsesc în frotiurile din organe și sânge. Organele și sângele sunt cultivate și pe bulion de zer și pe vase Petri cu agar sânge sau ser.

A doua etapă a studiului. Se studiază modelul de creștere pe mediile nutritive. Pe agar-sânge, coloniile de pneumococi sunt mici, rotunde, cu netede

margini, fragede, înconjurate de o zonă de înverzire a mediului (care amintește foarte mult de creșterea streptococilor viridans). Pe agar seric, coloniile sunt delicate, translucide și transparente. În timpul bacterioscopiei frotiurilor colorate cu Gram. Se detectează diplococi gram-pozitivi fără capsule. După bacterioscopie, coloniile suspectate de pneumococi sunt subcultivate pe ser oblic sau agar sânge sau în bulion de zer. La microscopia frotiurilor din mediul de îmbogățire, împreună cu diverse microflore, se pot detecta coci gram-pozitivi, dispuși în perechi sau în lanțuri scurte. Materialul din mediul de îmbogățire este transferat în medii nutritive solide. Culturile sunt incubate la 37°C timp de 24 de ore.

A treia etapă a studiului. Pe înclinații de agar cu sânge, pneumococii formează un strat delicat, subțire, translucid. În bulionul de zer, pneumococii provoacă turbiditate și un ușor sediment. În frotiurile din medii de cultură solide, pneumococii pot avea diferite aspecte. Alături de diplococii de formă alungită cu capete exterioare ascuțite, care amintesc de flacăra unei lumânări, există celule de formă ovală și rotundă obișnuită. În cultura bulionului, pneumococii sunt adesea aranjați în lanțuri. Pe baza proprietăților morfologice și culturale ale pneumococilor, este dificil de diferențiat de streptococii viridans, prin urmare a fost propus un set de teste speciale pentru diferențierea lor:

Solubilitate în bilă (testul dezoxicolat);

Capacitatea de a descompune inulina;

Sensibilitate la optochin;

Reacție de aglutinare cu seruri antipneumococice specifice;

Capacitatea de a descompune glucoza, maltoza, zaharoza, lactoza, manitolul, sorbitolul si salicina.

Cele mai accesibile metode de diferențiere a pneumococilor de alți streptococi sunt un test cu optochin (inhibă creșterea acestora); Se deosebesc de streptococii viridans prin capacitatea lor de a fermenta inulina, precum și prin sensibilitatea la bilă.

Testul dezoxicolat. După bacterioscopie preliminară, într-o eprubetă se adaugă 10 picături de cultură pură izolată (de preferință bulion) cu 5 picături de bilă bovină sterilă. Martorul este o cultură adăugată într-o eprubetă cu 5 picături de soluție salină. După 30-60 de minute de incubare la 37 °C, se observă liza completă a culturii sub formă de limpezire în eprubetă cu bilă în tubul de control amestecul rămâne tulbure; Trebuie amintit că culturile pneumococice avirulente sunt rezistente la bilă.

Rezistența biliară poate fi testată și prin cultură în bulion de bilă 10%. Materialul de testat este adăugat în mediu, iar bulionul devine tulbure. După 24 de ore de incubare la 37 °C, prezența pneumococilor va fi indicată prin curățarea bulionului ca urmare a lizei bacteriilor.

Puteți folosi și discuri înmuiate într-o soluție de bilă 20%. Discurile sunt plasate pe cultura crescută într-un vas și incubate timp de 1-2 ore la 37 °C. În prezența pneumococilor, coloniile sunt lizate în jurul discului la o distanță de 1-2 mm.

Test pentru inulină. Cultura pneumococică se inoculează pe mediu cu inulină. Pentru a face acest lucru, adăugați 200 ml de apă distilată sterilă, 18 ml de tinctură de turnesol și 3 g de inulină la 100 ml de ser bovin încălzit la 56 °C timp de 30 de minute și sterilizați cu abur curent timp de 30 de minute. Culturile sunt incubate la 37 °C timp de 24 de ore. Pneumococul descompune inulina, determinând mediul să devină roșu. Streptococul Viridans nu provoacă roșeață a mediului.

Testați cu optochin. Cultura de test pneumococic se inoculează pe bulion de zer cu optochin la o diluție de 1:100.000 sau 1:200.000. Pneumococul nu crește pe un astfel de mediu. De asemenea, puteți determina sensibilitatea la optochin prin placare pe agar sânge 10% care conține optochin la o diluție de 1:50.000. Controlul este inocularea culturii pe agar cu sânge. Pneumococii nu cresc pe mediu cu optochină se observă creșterea pneumococilor pe mediul de control. Puteți folosi discuri înmuiate în 6 μg de optochin, care se aplică pe suprafața mediului după inoculare. La pneumococi, în jurul discului se formează o zonă de inhibare a creșterii de cel puțin 18 mm în diametru.

Test de virulență. O cultură zilnică de pneumococ crescută în bulion de zer este diluată cu 1% apă peptonă sterilă (pH - 7,6) sau bulion ușor alcalin până la 1:10. Cultura diluată se administrează intraperitoneal la șoareci albi cu o greutate de 16-20 g într-un volum de 0,5 ml și se observă timp de 72 de ore. Organele unui șoarece mort sunt inoculate pe medii nutritive și frotiurile de amprentă sunt examinate la microscop. Culturile foarte virulente includ pneumococii, care provoacă moartea șoarecilor după introducerea unei culturi la o diluție de 1:10. Culturile avirulente nu provoacă moartea la șoareci.

Serotiparea pneumococilor. Cultura de 18 ore este testată în reacția de microaglutinare Sabin. Pe o lamă de sticlă se aplică 4 picături de cultură pneumococică. La 1 picătură se adaugă o picătură de ser antipneumococic tip 1, la al 2-lea - ser de tip II, la a 3-a - ser - 111, la a 4-a - o picătură de ser normal. Amestecuri pe sticlă sunt amestecate cu o buclă și examinate la lupă sau la microscop la mărire mică. ÎN caz pozitiv aglutinarea se observă într-una din primele trei picături. Tipul de pneumococ este determinat de o reacție de aglutinare cu seruri de aglutinare specifice din primele trei tipuri fixe. Culturile care nu sunt aglutinate de aceste tipuri de seruri sunt clasificate ca grup X. Reacția este configurată după cum urmează. Se toarnă 0,5 ml de cultură în bulion de 18 ore în eprubete. Apoi se adaugă un volum egal de ser, diluat cu ser fiziologic într-un raport de 1:5. Martorii sunt 2 eprubete, dintre care una conține cultura de testare amestecată cu

ser normal de iepure, iar celălalt - doar cultura de testare. Conținutul tuburilor este agitat bine și plasat într-un termostat la 37 °C timp de 2 ore, după care se efectuează un calcul preliminar al reacției. Rezultatele finale se notează după păstrare suplimentară la temperatura camerei timp de 20 de ore. Aglutinarea este evaluată ca patru plusuri dacă conținutul tuburilor este complet curățat și cultura de aglutinare este o peliculă densă care nu se rupe la agitare; trei plusuri dacă, atunci când conținutul tubului este complet curățat, cultura aglutinantă se sparge ușor în părți; două plusuri - dacă nu are loc curățarea, particulele culturii aglutinate sunt clar vizibile cu ochiul liber în conținutul tulbure al eprubetei; cu aglutinare pentru un plus, în eprubetă se găsește un amestec cu granulație fină de pneumococi lipiți. În cazul unei reacții negative vizibile pentru ochi nu se observă aglutinare;

Conținutul eprubetelor după agitare este uniform tulbure.

Tiparea pneumococilor din grupul X se realizează folosind grupul

seruri care conțin un amestec de seruri aglutinante tipice luate

în volume egale. Pregătiți următoarele seruri de grup prin

amestecând volume egale de diagnostic standard nediluat

seruri (Lund, 1960):

serovarii A -1, II, IV, V, XVIII;

serovariile B - VI, VIII, XIX;

C - VII, XX. serovare XXIV, XXXI, XL;

D - IX, XI, XVI, XXXVI. XXXVII serovare;

E - X, XXI. XXXIII, XXXIX serovare;

F - XII. XVII. serovare XXII, XXXVII, XXXII, XLI;

G - XIII, XXV. serovare XXIX, XXXIV, XXXV, XXXVIII, XLII, XLVII;

J - XLIII. Serovarii XLIV, XLV, XLVI.

Serul aglutinant de tip III se foloseste per se (fara amestecare cu alte seruri standard) datorita dificultatii de a-l obtine intr-un titru suficient de mare. Tiparea se realizează în două etape: mai întâi cu ajutorul serurilor de grup și apoi cu serurile individuale ale grupului cu care s-a obținut o reacție pozitivă. Serotiparea pneumococilor este utilizată în primul rând pentru studii epidemiologice ale rezultatelor seroterapiei specifice și seroprofilaxiei.

Microaglutinarea pneumococilor folosind metoda Sabin poate fi obținută prin amestecarea serurilor antipneumococice cu exudatul din cavitatea abdominală a unui șoarece contaminat cu sputa unui pacient. Deja la patru ore după infecție, o cultură pură de pneumococi este detectată în exudat, dând o aglutinare Sabin pozitivă.

Metode accelerate de detectare și tipizare a pneumococilor. 1. Metoda Neufeld sau fenomenul de umflare a capsulei pneumococice. Un bulgăre de sputa proaspăt secretată a pacientului este aplicat la trei

lamele, la fiecare dintre ele se adaugă o picătură de ser antipneumococic specific nediluat (tipurile 1, II, III) și o picătură de albastru Loeffler. Picăturile se amestecă bine și se acoperă cu o lamă de sticlă cu un puț uns pe margini cu vaselină. După două minute, picăturile suspendate sunt examinate la microscop cu sistem de imersie. Într-un caz pozitiv, este vizibilă o creștere bruscă a capsulelor pneumococice. Dacă rezultatul este negativ, capsulele sunt cu greu prețuite. Reacția de umflare este specifică și nu dă un rezultat pozitiv cu alte bacterii capsulare. Nu o folosesc pentru examinarea sputei de la pacientii tratati cu sulfonamide si antibiotice, deoarece în acest caz se pot izola pneumococii non-capsulari.

2. Metoda precipitațiilor. 5-10 ml de spută se fierb într-o baie de apă până se obține un cheag dens. Cheagul este măcinat și se adaugă o cantitate mică de ser fiziologic și se fierbe din nou câteva minute pentru a extrage polizaharida specifică din pneumococi. Suspensia este centrifugată, cu rezultatul lichid limpede iar cu seruri standard specifice în tuburi de precipitare se realizează o reacție de precipitare inelară. Apariția unui inel la interfața dintre lichide indică un rezultat pozitiv.

3. Determinarea capsulelor pneumococice după Burri. O picătură de material de testat și o picătură de cerneală sunt aplicate la capătul lamei. Amestecul se amestecă și se face un frotiu, se usucă la aer și, fără fixare, se examinează la microscop. Fondul preparatului este întuneric fumurii, iar capsulele lor nu sunt pătate. Preparatul preparat conform Burri poate fi fixat cu amestecul lui Nikiforov, clătit cu apă și colorat cu Ziel fuchsin diluat 1:3 timp de 3-5 minute. Pe fundalul întunecat al frotiului ies în evidență capsule nevopsite, în interiorul cărora se află bacterii de culoare purpurie strălucitoare (metoda Hins).

Infecțiile pneumococice (A40.3) sunt un grup de boli de etiologie bacteriană, manifestate clinic prin modificări purulent-inflamatorii la nivelul diferitelor organe și sisteme, dar mai ales la plămâni ca pneumonie lobară și la nivelul sistemului nervos central ca meningita purulenta.

Ponderea infecțiilor pneumococice în structură patologie infecțioasă copilărie nu tocmai stabilit. Boala este mai frecventă la copiii cu vârsta cuprinsă între 6 luni și 7 ani cu deficiență a imunitații umorale.

Infecția cu pneumococi poate apărea atât exogen, cât și endogen. La infecție exogenă cel mai adesea se dezvoltă pneumonie lobară. Infecția endogenă apare din cauza unei slăbiri accentuate a apărării imune datorită activării pneumococilor saprofiti pe membranele mucoase ale tractului respirator. În aceste condiții, pneumococul poate provoca meningită, septicemie, endocardită, otita medie, pericardita, peritonita, sinuzita si alte boli purulent-septice.

Etiologie. Pneumococul a fost numit inițial Diplococcus pneumoniae. Acest nume a fost acum înlocuit cu Streptococcus pneumoniae. De clasificare modernă, pneumococii sunt clasificați în familie Streptococcaceae, familie Streptococ.

Pneumococii sunt coci gram-pozitivi de formă ovală sau sferică, de 0,5-1,25 microni, dispuși în perechi, uneori sub formă de lanțuri scurte. Deoarece capătul distal al fiecărei perechi este ascuțit, cocii au formă de lancet, pentru care au fost numiți anterior diplococi lanceolați. Pneumococii au o capsulă bine organizată. Pe baza compoziției sale polizaharide, se disting peste 85 de serotipuri (serovari) de pneumococi. Numai tulpinile de capsule netede, predominant din primele 8 tipuri, sunt patogene pentru oameni, restul serovariilor sunt slab virulente pentru om.

Pe lângă antigenele capsulare, pneumococii au 3 antigene somatice: antigenul specific tip proteinei M și doi antigeni specifici speciei C și R. Antigenele somatice nu determină specificitatea și virulența agentului patogen. În timpul procesului patologic, se produc anticorpi la toate antigenele pneumococice, dar cea mai mare valoare Pentru a proteja organismul, au anticorpi la antigenele capsulare.

Când pneumococii sunt distruși, se eliberează endotoxina și β-hemolizină. În plus, pneumococii produc o anumită cantitate de agemolizină și neuraminidază, care au proprietăți slabe hemotoxice, fibrinolitice și capacitatea de a distruge leucocitele.

Pneumococii cresc slab pe medii nutritive obișnuite, dar se dezvoltă bine pe ser sau pe agar ascitic, creând colonii rotunde mici, cu o colorație verde a mediului. Bulionul de zahăr formează tulburări și sedimente.

Pneumococii sunt relativ stabili în mediul extern. În sputa uscată persistă 1-2 luni, pe scutece infectate - 1-2 săptămâni, când sunt fierte mor instantaneu, iar la o temperatură de 50-60 ° C - în 10 minute. Pneumococii sunt foarte sensibili la soluțiile dezinfectante convenționale.

Epidemiologie. Pneumococii sunt locuitori aproape permanenți ai căilor respiratorii superioare umane și în acest sens pot fi clasificați drept microorganisme oportuniste.

Ele pot fi detectate în culturi de mucus din orofaringe la majoritatea copiilor sănătoși. Cel mai mare număr purtători de pneumococi sunt detectați în rândul copiilor vârstă fragedă, precum și persoanele în vârstă. Predomină purtarea serovariilor care nu au proprietăți virulente pronunțate. În timpul transportului, imunitatea este cel mai probabil dezvoltată. Cu toate acestea, nu poate fi numit timp și, în plus, este specific tipului. Dezvoltarea bolii în aceste cazuri este posibilă numai cu o scădere bruscă a reactivității imune a organismului (forme severe de gripă și ARVI, utilizare pe termen lung hormoni corticosteroizi, citostatice, radioterapie etc.).

Din punct de vedere epidemiologic, clonele pneumococice cu virulență și invazive mai mari sunt de cea mai mare importanță. Se formează la copiii slăbiți în condiții de mediu nefavorabile (sezon rece, supraaglomerare, incidență crescută a gripei, ARVI etc.).

Sursa de infecție este întotdeauna o persoană - un pacient sau un purtător de pneumococi. Agentul patogen este transmis prin picături în aer și contactul cu gospodăria.

Sensibilitatea la pneumococi nu a fost clar stabilită. Boala se dezvoltă de obicei la copiii cu o deficiență de anticorpi specifici tipului și este deosebit de severă la copiii cu anemie falciformă, alte forme de hemoglobinopatie și deficit de C 3. Se crede că în aceste cazuri boala se dezvoltă pe fondul opsonizării defectuoase a pneumococilor, ceea ce face imposibilă eliminarea lor prin fagocitoză.

Patogeneza. Pneumococii pot afecta orice organe și sisteme, dar plămânii și tractul respirator ar trebui considerate organul tropical. Motivele care determină tropismul pneumococilor la sistemul bronhopulmonar, nu au fost stabilite cu certitudine. Este probabil ca antigenele capsulare pneumococice să aibă o afinitate pentru țesutul pulmonar și epiteliul tractului respirator. Introducerea agentului patogen în țesutul pulmonar este facilitată de infecțiile respiratorii acute care elimină functie de protectie epiteliul tractului respirator și reducerea imunoreactivității generale. De asemenea, sunt importante diverse defecte congenitale și dobândite ale sistemului de eliminare a antigenelor bacteriene: defecte ale sistemului surfactant al plămânului, activitate fagocitară insuficientă a neutrofilelor și macrofagelor alveolare, permeabilitate bronșică afectată, scăderea reflex de tuse etc.Loc deosebit în patogeneză leziuni pulmonareîn cazul infecției pneumococice, aceasta este atribuită disfuncției epiteliului ciliat al bronhiilor, precum și modificărilor compoziției chimice și proprietăților reologice ale secrețiilor bronșice.

Ca urmare a interacțiunii micro- și macroorganismelor din sistemul bronhopulmonar, se formează un focar de inflamație cu un substrat morfologic caracteristic anumitor forme clinice ale bolii (bronșită, pneumonie, pleurezie etc.).

De la leziunea primară, pneumococii încep să se răspândească prin limfă și sânge, formând bacteriemie prelungită. Din punct de vedere clinic, acesta se poate manifesta ca un sindrom infecțios-toxic, dar este posibilă și bacteriemie asimptomatică.

La copiii slăbiți, pneumococii depășesc uneori bariera hematoencefalică și provoacă meningită purulentă sau meningoencefalită.

Răspândirea infecției prin cale bronhogenică de contact poate duce la pleurezie purulentă, sinuzita, otita medie, mastoidita, pericardita, abcesul epidural, empiem. Bacteremia pneumococică se termină uneori cu dezvoltarea osteomielitei, artritei purulente și abcesului cerebral.

Formele severe de infecție pneumococică apar aproape exclusiv la copiii mici, în timp ce severitatea formelor clinice este determinată nu numai de reactivitatea microorganismului, ci și de virulența agentului patogen. Infecția este deosebit de gravă cu bacteriemie masivă și concentrație mare antigenul capsular din sânge.

ÎN cazuri severe infecția pneumococică este însoțită de dezvoltarea tulburărilor reologice și hemodinamice până la apariția coagulării intravasculare diseminate, insuficiență suprarenală acută, edem și umflarea substanței cerebrale.

Tabloul clinic.În funcție de leziune, se disting pneumonia lobară, meningita pneumococică, otita medie, osteomielita, endocardita și peritonita.

Croupous pneumonia (în engleză croup - to croak) - inflamație acută plămâni, caracterizați prin implicarea rapidă a lobului plămânului și a zonei adiacente a pleurei în proces.

Boala apare mai ales la copiii mai mari. La sugari și copii mici, pneumonia lobară este extrem de rară, ceea ce se explică prin reactivitate insuficientă și particularitățile structurii anatomice și fiziologice a plămânilor (straturi de țesut conjunctiv intersegmentar relativ largi care împiedică răspândirea prin contact). proces inflamator). Pneumonia lobară este cauzată cel mai adesea de serotipurile I, III și mai ales IV ale pneumococilor alte serotipuri o cauzează rar.

Cu pneumonia lobară, există un model în etape de modificări morfologice. De obicei, procesul patologic începe în părțile posterioare și posterolaterale ale plămânului drept, sub forma unui mic focar de edem inflamator, care crește rapid, formând o fază de hiperemie și exsudație seroasă (etapa de flush) cu proliferarea pneumococilor în exudat; Ulterior, procesul patologic intră în faza de migrare a leucocitelor și de pierdere a fibrinei (etapa de hepatizare), urmată de resorbția treptată a elementelor exsudate - leucocite și fibrină (etapa de rezoluție). La copii, procesul patologic se răspândește mai des în întregul lob, doar câteva segmente sunt afectate.

Boala începe acut, adesea cu frisoane și dureri în lateral, agravate de respirație adâncă. Din primele ore apare o tuse uscată, durere de cap, slăbiciune, oboseală, febră mare (până la 39-40 ° C). Copiii sunt entuziasmați și uneori delirează. Simptomele pneumoniei lobare apar rapid: o tuse scurtă și dureroasă cu o cantitate mică de spută vâscoasă sticloasă, înroșirea obrajilor, erupția aripilor nasului, respirație rapidă și superficială, erupții cutanate herpetice pe buzele și aripile nasului, uneori cianoză a buzelor și a vârfurilor degetelor; pe partea afectată, puteți vedea întârzierea toracelui în timpul respirației și mobilitatea limitată a marginii inferioare a plămânului. Când procesul este localizat în lobul inferior al plămânului drept din cauza leziunii pleurei, durerea este resimțită nu numai în cufăr, dar și în stomac, simulând boala de organ cavitate abdominală(apendicita, peritonita, pancreatita etc.). În același timp, copiii pot prezenta vărsături repetate, scaune moale frecvente și balonare, ceea ce face dificilă diagnostic diferentiat cu acută infecție intestinală. Când procesul este localizat în lobul superior al plămânului drept, copiii pot prezenta simptome meningeale (rigiditatea mușchilor gâtului, convulsii, vărsături frecvente, dureri de cap severe, delir),

Modificările plămânilor suferă o evoluție foarte caracteristică. În prima zi de boală, în cazuri tipice, se poate observa un ton timpan al sunetului de percuție pe partea afectată, apoi pe parcursul mai multor ore, acest sunet cedează treptat loc la tonalitate. Până la sfârșitul primei zile, la vârful inspirației încep să se audă crepitus și zgomote fine, umede și uscate.

La inaltime manifestari clinice(2-3 zile de boală) matitatea în zona afectată devine pronunțată și respirația bronșică, uneori zgomot de frecare pleurală, precum și tremor vocal și bronhofonie, încep să se audă peste zona afectată. În același timp, tusea se intensifică, devine mai puțin dureroasă și mai umedă, uneori sputa devine maro-roșiatică, dificultățile de respirație crește, iar cianoza buzelor și feței crește.

ÎN sânge periferic la apogeul bolii, se observă leucocitoza neutrofilă, conținutul de celule de bandă crește la 10-30%, uneori există o schimbare a formulei către tineri și mielocite, este adesea detectată granularitatea toxică a neutrofilelor, aneozinofilia și monocitoza moderată sunt tipic; VSH este crescut.

Etapa de rezoluție începe de obicei în a 5-a-7 zi de boală. Simptomele intoxicației slăbesc, temperatura corpului scade critic sau litic. În plămâni, respirația bronșică slăbește, tremorul vocal și bronhofonia dispar, iar crepitul abundent reapare. În procesul de resorbție a exudatului, respirația bronșică devine aspră și apoi veziculoasă, iar sunetul de percuție scurtat dispare.

Pe radiografie puteți vedea principalele etape de dezvoltare a pneumoniei lobare. În timpul etapei de maree înaltă, există o ușoară scădere a transparenței în zona zonei afectate și o creștere a modelului pulmonar din cauza congestiei vaselor. În stadiul de hepatizare, se evidențiază o scădere pronunțată a transparenței zonei pulmonare afectate, care amintește de tabloul atelectaziei.

Etapa de rezoluție se manifestă prin restabilirea lentă a transparenței zonei afectate a plămânului. În unele cazuri, lichidul este detectat în cavitatea pleurală (pleuropneumonie). Durata totală a bolii este de aproximativ 3-4 săptămâni, durata perioadei febrile este în medie de 7-10 zile, recuperare totală structura și funcția plămânilor apare în 1-1,5 luni.

Meningita pneumococică este cea mai gravă formă de meningită purulentă la copii. Boala apare de obicei la copii în a doua jumătate a vieții. La copii în primele 5 luni de viață, meningita pneumococică este rar observată. La vârste înaintate, meningita pneumococică este adesea precedată de traumatisme la nivelul craniului sau apare la copiii cu boli cronice sinusuri paranazale nas, precum și la copiii cu tulburări imunitare congenitale sau dobândite. Copiii cu anemie falciforme sunt deosebit de susceptibili la boli. boli oncologice care au suferit splenectomie.

Afectarea meningelor apare de obicei secundar, în urma altor manifestări ale infecției pneumococice. În cazuri rare, focalizarea principală nu poate fi identificată. Agentul patogen pătrunde în meningele ca urmare a bacteriemiei. S-a sugerat că serovarul agentului patogen cu care copilul este infectat este important în dezvoltarea bacteriemiei pneumococice și a meningitei. Majoritatea pacienților cu meningită pneumococică au serotipurile 1-7, precum și 14, 18, 23 și mai rar altele.

Boala începe de obicei acut, cu o creștere a temperaturii corpului până la valori mari, dar la copiii slăbiți temperatura poate rămâne subfebrilă și chiar normală. Copiii devin neliniștiți, țipă și adesea eructează. Adesea, primele simptome sunt convulsii, tremor, hiperestezie, bombarea fontanelei mari și pierderea conștienței. Sindromul meningian este adesea incomplet și ușor exprimat. În cazuri severe, poate fi complet absent. La majoritatea pacienților, boala începe imediat ca meningoencefalită. În aceste cazuri, din prima zi, conștiința este afectată, apar tremurături ale membrelor, convulsii și agitație psihomotorie severă, transformându-se în stupoare și comă. Apare devreme simptome focaleînfrângeri nervi cranieni, cel mai adesea sunt posibile abducens, oculomotor și facial, mono- și hemipareza. Copiii mai mari experimentează adesea tablou clinic edem și umflarea creierului cu încastrarea acestuia în foramen magnum.

Lichidul cefalorahidian este tulbure, purulent, de culoare gri-verzuie. La decantare se formează rapid un precipitat și se observă pleocitoză neutrofilă (500-1200 celule la 1 μl). Conținutul de proteine este de obicei ridicat, cantitatea de zahăr și cloruri este redusă.

În sângele periferic, sunt detectate leucocitoză cu o deplasare bruscă spre stânga, aneozinofilie, monocitoză, este posibilă anemie moderată și trombocitopenie; VSH este crescut.

Pneumococii sunt relativ des agenții cauzatori ai otitei medii, artritei purulente, osteomielitei, pericarditei, endocarditei, peritonitei primare etc. Toate aceste afecțiuni pot fi prezente la pacienții cu pneumonie, bronșită, traheită sau pot apărea independent ca o consecință a bacteriemiei. Ele sunt de obicei observate la copiii mici, în special la prematuri și în prima lună de viață. Din punct de vedere clinic, nu se pot distinge de bolile cauzate de alte bacterii piogene.

Diagnosticare. Este posibil să se diagnosticheze cu precizie infecția pneumococică numai după izolarea agentului patogen de leziune sau sânge. Pentru cercetare, ei iau spută pentru pneumonia lobară, sânge pentru sepsis suspectat, secreții purulente sau exudat inflamator pentru alte boli. Materialul patologic este supus microscopiei. Identificarea diplococilor gram-pozitivi de formă lanceolată, înconjurați de o capsulă, oferă baza pentru diagnosticul preliminar al infecției pneumococice. Pentru a determina dacă diplococii izolați sunt pneumococi, se folosesc seruri combinate specifice tipului, care conțin titruri mari de anticorpi la toate serotipurile pneumococice. În primele zile ale meningitei pneumococice, agentul patogen poate fi detectat în lichidul cefalorahidian, unde este localizat atât extracelular, cât și intracelular. Pentru a izola o cultură pură, materialul de testat este inoculat pe sânge, ser sau agar ascitic. Pe medii nutritive, pneumococul produce creșterea unor mici colonii transparente. O probă biologică poate fi utilizată pentru a izola o cultură pură. În acest scop, șoarecii albi sunt infectați intraperitoneal cu materialul de testat. Dacă în material sunt prezenți pneumococi patogeni, șoarecii mor în 24-48 de ore Pentru a detecta antigenele pneumococice, poate fi utilizată metoda imunoelectroforezei în fază solidă.

Tratament. Terapia pentru infecția pneumococică ar trebui să fie cuprinzătoare. În formele severe, trebuie prescrise antibiotice.

Pentru ușoare până la moderate forme severe(nazofaringită, bronșită, otită etc.) se poate prescrie fenoximetilpenicilină (vepicombină) la 50.000-100.000 unități/(kg. zi) în 4 prize oral sau penicilină în aceeași doză de 3 ori pe zi intramuscular, sau 5-7 zile , azitromicină (sumamed) în doză de 10 mg/kg pe zi timp de 3 zile. Pacienților cu pneumonie lobară sau meningită li se prescrie un antibiotic cefalosporin de generația a 3-a și a 4-a. Pe măsură ce tratamentul cu antibiotice progresează, este recomandabil să se verifice sensibilitatea pneumococilor izolați la medicamentul prescris și, dacă este necesar, să-l înlocuiască. În ultimii 2 ani, tulpinile de pneumococi rezistente la multe antibiotice au devenit din ce în ce mai izolate.

În formele severe de infecție pneumococică, pe lângă antibiotice, se prescrie perfuzie, terapie patogenetică, reparatoare și simptomatică, ale cărei principii sunt aceleași ca și pentru alte boli infecțioase.

Prognoza. Cu meningita pneumococică, rata mortalității este de aproximativ 10-20% (în era pre-antibiotică - 100%). Pentru alte forme de boală decese rar. Ele apar, de regulă, la copiii cu imunodeficiență congenitală sau dobândită, tratament pe termen lung cu medicamente imunosupresoare și la copiii cu deformări congenitale.

Prevenirea. Pentru prevenirea infecției cu pneumococ, se propune administrarea vaccinului polizaharidic polivalent „PNEUMO 23” de la Sanofi Pasteur (Franța), care este un amestec de polizaharide capsulare purificate din cele 23 de serotipuri pneumococice cele mai comune. 1 doză din acest vaccin conține 25 mcg din fiecare tip de polizaharidă, precum și o soluție izotonă de clorură de sodiu și 1,25 mg de fenol ca conservant. Vaccinul nu conține alte impurități. Se recomandă administrarea copiilor cu vârsta peste 2 ani cu risc de infecție pneumococică, care includ copii cu imunodeficiențe, asplenie, anemie falciforme, patologie cronică rinichi, inimă și, de asemenea, pentru persoanele peste 60 de ani. Vaccinul se administrează o dată în doză de 0,5 ml subcutanat sau intramuscular. Acest vaccin este foarte imunogen și cauzează rareori reactii adverse. Durata imunității post-vaccinare nu a fost stabilită cu precizie, dar anticorpii din sânge după vaccinare rămân până la 5 ani. O contraindicație la administrarea vaccinului pneumococic este hipersensibilitatea la componentele vaccinului.

Copiilor cu stare de imunodeficiență în cazul contactului cu un pacient cu infecție pneumococică li se poate administra intramuscular gamma globulină 0,2 ml/kg.

Cuprinsul subiectului "Streptococi. Streptococi hemolitici. Pneumococi. Streptococi nehemolitici.":

În cele mai multe cazuri pneumonie pneumococică se dezvoltă după aspirarea salivei care conţine S. pneumoniae. Apoi bacterii pneumococ pătrunde în tractul respirator inferior. Încălcarea mecanismelor de drenaj protector - impulsul tusei și clearance-ul mucociliar - este esențială. Formarea de infiltrate inflamatorii puternice este însoțită de o întrerupere a homeostaziei țesutului pulmonar. Infecțiile cu serovarul 3 cel mai virulent pot fi însoțite de formarea de cavități în parenchimul pulmonar.

Din focarul primar pneumococ poate pătrunde în cavitatea pleurală și pericard sau poate disemina pe cale hematogenă și poate provoca meningită, endocardită și leziuni articulare.

Factorii de patogenitate ai pneumococului

Principalii factori patogenitatea pneumococului luați în considerare capsula și substanța C.

Capsula de pneumococ- principalul factor de virulenţă. Protejează bacteriile de potențialul microbicid al fagocitelor și de acțiunea opsoninelor. Tulpinile de pneumococ necapsulate sunt practic avirulente și sunt rar întâlnite. Majoritatea grupului de AT antipneumococice constă din AT la capsule Ag.

Substanța C a pneumococului- acid teicoic perete celular, care conține colină și interacționează în mod specific cu proteina C reactivă. Consecința unei astfel de reacții este activarea cascadei complementare și eliberarea de mediatori ai fazei acute a inflamației. Acumularea lor în țesutul pulmonar stimulează migrarea fagocitelor polimorfonucleare.

Pneumococii au fost descriși pentru prima dată de R. Koch (1871).

Morfologie. Pneumococii sunt diplococi în care laturile celulelor aflate în față sunt turtite, iar părțile opuse sunt alungite, deci au o formă lanceolă, care amintește de flacăra unei lumânări (vezi Fig. 4). Dimensiunea pneumococilor este de 0,75-0,5 × 0,5-1 microni, sunt situate în perechi. În mediile nutritive lichide formează adesea lanțuri scurte, devenind asemănătoare cu streptococii. Preumococii sunt imobili, nu au spori, iar în corp formează o capsulă înconjurând ambii coci. Capsula contine o substanta rezistenta la caldura antifagin (protejeaza pneumococul de fagocitoza si actiunea anticorpilor). Când cresc pe medii nutritive artificiale, pneumococii își pierd capsula. Pneumococii sunt gram-pozitivi. Bacteriile Gram-negative se găsesc în culturi mai vechi.

Cultivare. Pneumococii sunt anaerobi facultativi. Ele cresc la o temperatură de 36-37° C și un pH de 7,2-7,4. Sunt pretențioși pe medii, deoarece nu pot sintetiza mulți aminoacizi, așa că cresc numai pe medii cu adaos de proteine native (sânge sau ser). Pe agar seric formează colonii mici, delicate, destul de transparente. Pe agar-sânge cresc colonii umede gri verzui, înconjurate de o zonă verde, care este rezultatul conversiei hemoglobinei în methemoglobină. Pneumococii cresc bine în bulion cu adaos de glucoză 0,2% și în bulion cu zer. Creșterea în medii lichide se caracterizează prin turbiditate difuză și sedimente prăfuite la fund.

Proprietăți enzimatice. Pneumococii au activitate zaharolitică destul de pronunțată. Ele descompun: lactoza, glucoza, zaharoza, maltoza, inulina pentru a forma acid. Manitolul nu este fermentat. Proprietățile lor proteolitice sunt slab exprimate: coagulează laptele, nu lichefiază gelatina și nu formează indol. Pneumococii se dizolvă în bilă. Descompunerea inulinei și dizolvarea în bilă este o caracteristică importantă de diagnostic care distinge Streptococcus pneumoniae de Streptococcus pyogenes.

Factori de patogenitate. Pneumococii produc hialuronidază, fibrinolizină etc.

Formarea toxinelor. Pneumococii produc endotoxină, hemolizină și leucocidină. Virulența pneumococilor este, de asemenea, asociată cu prezența antifaginei în capsulă.

Structura și clasificarea antigenică. În citoplasma pneumococilor există un antigen proteic comun întregului grup, iar în capsulă există un antigen polizaharidic. Pe baza antigenului polizaharidic, toți pneumococii sunt împărțiți în 84 de serovari. Dintre cele patogene pentru om, serovarele I, II și III sunt cele mai frecvente.

Pneumococii aparțin grupului de microorganisme instabile. O temperatură de 60° C îi ucide în 3-5 minute. Sunt destul de rezistente la temperaturi scăzute și uscare. În sputa uscată rămân viabile până la 2 luni. Ele pot fi păstrate pe un mediu nutritiv nu mai mult de 5-6 zile. Prin urmare, la cultivare, este necesar să se reînsămânțeze la fiecare 2-3 zile. Solutii conventionale de dezinfectanti: 3% fenol, sublimati in dilutie de 1:1000 le distrug in cateva minute.

Pneumococii sunt deosebit de sensibili la optochin, care îi omoară la o diluție de 1:100.000.

Susceptibilitatea animalelor. Gazda naturală a pneumococilor este oamenii. Cu toate acestea, pneumococii pot provoca boli la viței, miei, purcei, câini și maimuțe. Dintre animalele experimentale, șoarecii albi sunt foarte sensibili la pneumococ.

Surse de infecție

Căile de transmisie. Picături din aer, poate praf din aer.

Poartă de intrare. Membrană mucoasă a tractului respirator superior, ochi și urechi.

Boli la oameni. Pneumococii pot provoca boli purulent-inflamatorii de diferite localizări. Specific pneumococilor sunt:

1) pneumonie lobară; 2) ulcer corneean târâtor;

Cel mai boală frecventă este pneumonia lobară, care afectează unul, mai rar doi sau trei lobi ai plămânului. Boala este acută și este însoțită de temperatura ridicata, tuse. De obicei se termină critic.

Imunitate. După boală, rămâne imunitatea instabilă, deoarece pneumonia se caracterizează prin recidive.

Prevenirea. Se reduce la măsuri sanitare și preventive. Prevenția specifică nu a fost dezvoltată.

Tratament. Se folosesc antibiotice - penicilina, tetraciclina etc.

Întrebări de control 1. Morfologia pneumococilor. Cultivare și proprietăți enzimatice.

2. Ce factori determină patogenitatea pneumococilor și ce protejează pneumococii de fagocitoză?

3. Care sunt principalele porți ale infecției pneumococice. Ce boli provoacă pneumococii?

Examen microbiologic

Scopul studiului: identificarea pneumococului.

Material pentru cercetare

1. Sputa (pneumonie).

2. Mucus din gat (durere in gat).

3. Secreție dintr-un ulcer (ulcer corneean târâtor).

4. Secreții din ureche (otita medie).

5. Pus (abces).

6. punctat pleural (pleurezie).

7. Sânge (suspiciune de sepsis).

Metode de colectare a materialului

Metode de colectare a materialului

1 (Este mai bine să luați spută de dimineață (cu pneumonie specifică, sputa are o culoare ruginită).)

Metode de cercetare de bază

1. Microscopic.

2. Microbiologic.

3. Biologic.

Progresul studiului

Prima zi de studiu

Prima zi de studiu

Probă biologică. Se emulsionează puțin (3-5 ml spută) într-un bulion steril, 0,5 ml din acest amestec se injectează intraperitoneal într-un șoarece alb. După 6-8 ore, șoarecele prezintă semne de boală. În acest moment, pneumococul poate fi deja detectat în exudatul cavității abdominale. Exudatul se ia cu o seringă sterilă. Din el se fac frotiuri, se colorează cu Gram și se examinează la microscop. Pentru a izola o cultură pură, exudatul este inoculat pe agar seric. Dacă șoarecele moare sau se îmbolnăvește, sângele din inimă este cultivat pe agar seric pentru a izola o cultură pură. Culturile sunt plasate într-un termostat.

Metodă accelerată pentru determinarea tipului de pneumococ(reacție de microaglutinare). 4 picături de exudat din cavitatea abdominală a unui șoarece infectat sunt aplicate pe o lamă de sticlă. La prima picătură se adaugă ser aglutinant de tip I, la a doua se adaugă ser de tip II, la a treia se adaugă ser de tip III și la a patra soluție izotonică de clorură de sodiu (martor).

Serurile de tip I și II sunt prediluate într-un raport de 1:10, iar serurile de tip III - 1:5. Toate picăturile sunt agitate, uscate, fixate și colorate cu fucsin diluat. La rezultat pozitivîntr-una dintre picături există o aglomerare de microbi (aglutinare).

A doua zi de studiu

Culturile sunt îndepărtate din termostat, examinate, iar frotiurile sunt făcute din colonii suspecte. Dacă în frotiuri sunt prezenți diplococi lanceolați gram-pozitivi, 2-3 colonii sunt izolate pe o înclinație de agar seric pentru a obține o cultură pură. Culturile sunt plasate într-un termostat. Frotiurile se fac din bulion, se colorează cu Gram și se examinează la microscop.

A treia zi de studiu Culturile sunt scoase din termostat. Ei verifică puritatea culturii - fac frotiuri, colorație Gram și microscop. Dacă în cultura izolată există diplococi lanceolați gram-pozitivi, cultura izolată este identificată prin cultivare:

1) inocularea se efectuează pe medii Hiss (lactoză, glucoză, zaharoză, maltoză) în mod obișnuit- injectare miercuri;

2) pe mediu cu inulină; 3) pe un mediu cu optochin;

4) efectuați un test biliar.

Testul la inulină. Cultura studiată se seamănă pe un mediu nutritiv care conține inulină și tinctură de turnesol și se pune într-un termostat. După 1824 de ore, recoltele sunt îndepărtate din termostat. În prezența pneumococilor, mediul devine roșu (streptococii nu schimbă consistența și culoarea mediului).

Determinarea sensibilității la optochin. Cultura izolată se inoculează pe agar sânge 10% care conține optochină 1:50000. Pneumococii, spre deosebire de streptococi, nu cresc pe medii care conțin optochin.

Test biliar. 1 ml din cultura bulionului de testat se toarna in tuburi de aglutinare. La unul dintre ele se adaugă o picătură de bilă de iepure, al doilea tub servește drept control. Ambele eprubete sunt plasate într-un termostat. După 18-24 de ore, apare liza pneumococilor, care se exprimă în curățarea unui bulion tulbure. În control, suspensia rămâne tulbure.

O probă de bilă poate fi efectuată pe un mediu nutritiv solid. Pentru a face acest lucru, se aplică un grăunte de bilă uscată pe o colonie de pneumococi cultivate în vase cu agar și ser - colonia se dizolvă și dispare.

A patra zi a studiului Rezultatele sunt înregistrate (Tabelul 26).

Tabelul 26. Diferențierea pneumococului de streptococul viridans

Notă. j - descompunerea carbohidraților cu formarea acidului.

În prezent, metodele de cercetare serologică (RSK și RIGA) sunt utilizate pe scară largă pentru determinarea anticorpilor streptococici. Determinarea grupului și a serovarului culturii izolate se realizează folosind anticorpi fluorescenți.

Determinarea virulenței pneumococice. O cultură zilnică în bulion de pneumococ este diluată cu 1% apă peptonă de la 10 -2 la 10 -8, se administrează 0,5 ml din fiecare diluție la doi șoareci albi. Cultura care a provocat moartea șoarecilor la o diluție de 10 -7 este evaluată ca virulentă, la o diluție de 10 -4 -10 -

6 este considerat moderat virulent. O cultură care nu provoacă moartea șoarecilor este avirulentă.

Întrebări de control

1. Ce metode de izolare a unei culturi pure de pneumococi cunoașteți?

2. Care animal este cel mai sensibil la pneumococ?

3. Ce reacții se efectuează cu exudatul unui șoarece infectat și în ce scop?

4. Din ce reprezentanți ai cocilor piogeni ar trebui diferențiat pneumococul și folosind ce test?

5. Cum se determină virulența pneumococilor? Exercițiu

Realizați o diagramă a examinării sputei, indicându-i etapele pe zi.

Medii de cultură

Agar seric(vezi capitolul 7).

Bulion cu zer(vezi capitolul 7).

Agar cu sânge(vezi capitolul 7).

Şuierat media(uscat).

Mediu de probă cu inulină. La 200 ml apă distilată se adaugă 10 ml ser bovin inactivat, 18 ml tinctură de turnesol și 3 g inulină. Sterilizați cu abur curgător la 100° C timp de 3 zile la rând. Bulion de bilă (vezi capitolul 7).

Capitolul 16. Meningococi

Genul Neisseria include două specii de microbi care sunt patogeni pentru oameni: N. meningitidis și N. gonorrhoeae. Neisseria meningitidis au fost izolate din lichidul cefalorahidian al unui pacient de către Wekselbaum (1887).

Morfologie. Meningococii sunt coci perechi, formați din doi coci în formă de fasole, așezați cu laturile concave unul față de celălalt, pereții lor exteriori sunt convexi (vezi Fig. 4). Dimensiunea fiecărui coc este de 0,6-0,8 × 1,2-1,5 microni. Sunt polimorfe. Meningococii sunt imobili, nu au spori și formează o capsulă. Gram negativ. În culturile pure ele sunt localizate în tetrade și sub formă de coci individuali fără o anumită ordine, iar în frotiurile preparate din lichidul cefalorahidian sunt adesea localizate în perechi. În material purulent, acestea sunt localizate în interiorul unui leucocit.

Cultivare. Meningococii sunt aerobi. Sunt pretențioși cu mediile nutritive și se reproduc numai pe medii care conțin proteine native (ser, sânge). Ele cresc la o temperatură de 36-37° C (la 25° C, creșterea se oprește), pH-ul mediului este de 7,4-7,6. Pentru reproducerea lor este nevoie de un mediu umed și o cantitate crescută de dioxid de carbon (un factor care stimulează creșterea lor). Semănatul trebuie făcut pe mediu proaspăt pregătit.

Pe medii nutritive solide, meningococii formează colonii mici, de 2-3 mm în diametru, fragede, translucide, albăstrui, vâscoase. În bulion cu zer, meningococii produc o ușoară turbiditate și un mic sediment. Tulpini proaspăt izolate în formă S. Culturile vechi se pot disocia și forma colonii rugoase în formă de R.

Proprietăți enzimatice. Biochimic, meningococii sunt puțin activi. Ele descompun glucoza și maltoza pentru a forma acid. Nu au proprietăți proteolitice pronunțate (nu coagulează laptele, nu lichefiază gelatina).

Patogenitatea meningococilor este determinată de prezența unei capsule care previne fagocitoza, pili care favorizează atașarea microbilor la suprafață. celule epiteliale, și formarea enzimelor: hialuronidază și neuraminidază.

Formarea toxinelor. Când celulele bacteriene sunt distruse, este eliberată o endotoxină puternică, stabilă la căldură, care este o lipopolizaharidă a peretelui celular. Când apare boala, se găsește în sângele și lichidul cefalorahidian al pacienților. Severitatea bolii depinde adesea de cantitatea de toxină acumulată.

Structura antigenică. Pe baza antigenului polizaharidic (capsular), meningococii sunt împărțiți în serogrupe: A, B, C, D, X, Y U-135 29E (un total de nouă serogrupe).

Conform clasificare internationala principalele grupe sunt A, B și C. Meningococii din grupa A provoacă adesea procese generalizate și au cea mai mare importanță epidemiologică. Meningococii din grupele B și C provoacă boli sporadice. Serogrupurile rămase au fost slab studiate.

Rezistența la factorii de mediu. Meningococii nu sunt rezistenți. O temperatură de 70°C îi omoară în 2-3 minute, 55°C în 5 minute. Spre deosebire de alți coci din acest grup, ei nu tolerează temperatura scazuta, sunt deosebit de sensibile la fluctuațiile de temperatură.

Concentrații uzuale solutii dezinfectante sunt distruse rapid.

Susceptibilitatea animalelor. ÎN conditii naturale animalele nu sunt sensibile la meningococi. Dar injectarea subdurală a meningococilor la maimuțe poate provoca boli la acestea.

Infecție intraperitoneală porcușori de Guineea iar soarecii albi isi provoaca moartea datorita actiunii endotoxinei.

Surse de infecție. O persoană bolnavă și un purtător de bacterii.

Căile de transmisie. Ruta principală este aeropurtată.

Boli la oameni:

1) rinofaringită;

2) meningococemie;

3) meningita epidemică cefalorahidiană.

Patogeneza. Odată ajuns pe membrana mucoasă a nazofaringelui, meningococii pot fi localizați acolo, provocând transport sau provocând rinofaringită acută. Dacă pătrund vase limfatice, sange si sunt generalizate, produc modificari profunde la nivelul organelor parenchimatoase datorita actiunii endotoxinei. Se dezvoltă meningococemia. Când meningococul pătrunde în meninge, apare o inflamație purulentă - meningită. La Meningita meningococică lichidul cefalorahidian este tulbure (spre deosebire de meningita tuberculoasă). În timpul unei puncție a coloanei vertebrale, fluidul curge într-un flux din cauza creșterii presiune intracraniană. Fenomenele meningeale se caracterizează prin dureri de cap, rigiditate a gâtului, vărsături etc. Meningita afectează cel mai adesea copiii. La adulți, infecția se limitează cel mai adesea la transport sau rinofaringită.

Imunitate. Imunitatea postinfecțioasă este intensă, este cauzată de opsonine, anticorpi fixatori de complement și bactericide. Evoluția bolii depinde de intensitatea formării de anticorpi la antigenele polizaharide și proteice.

Prevenirea. Se reduce la identificarea precoce a purtătorilor, izolarea celor bolnavi de rinofaringită. Pacienții sunt supuși spitalizării.

Prevenirea specifică. S-a dezvoltat un vaccin chimic, format din polizaharide din serogrupele A și C. Pentru prevenirea urgentelor se utilizează imunoglobulina.

Tratament. Medicamente antibacteriene- penicilina, cloramfenicol, ampicilina.

Întrebări de control

1. Care sunt proprietățile morfologice ale meningococilor?

2. Pe ce medii se cultivă meningococii și ce condiții sunt necesare pentru reproducerea lor?

3. Care este activitatea biochimică a meningococilor și stabilitatea acestora în mediul extern?

4. Ce boli sunt cauzate de meningococi?

5. După ce antigen se împart meningococii în serogrupuri?

MINISTERUL SĂNĂTĂȚII AL FEDERATIEI RUSE UNIVERSITATEA MEDICALĂ DE STAT KAZAN DEPARTAMENTUL DE MICROBIOLOGIE

PNEUMOCOC

KAZAN 1999

UDC 576.851.21(07)

Publicat prin decizie a Consiliului Central de Coordonare și Metodologie al Universității de Stat de Medicină din Kazan.

Compilat de:

(Șeful Departamentului de Microbiologie, Doctor în Științe Medicale, Profesor O.K. Pozdeev, Asistent al Departamentului de Microbiologie, Candidat la Științe Medicale, E.R. Fedorova.

Recenzători:

Pneumococi /O.K. Pozdeev, E.R. Fedorov - Kazan: KSMU, 1999. - 14 s.

Prin copierea, distribuirea, publicarea textului sau a unei părți din acesta pe resursele dumneavoastră, vă asumați responsabilitatea în conformitate cu legislația în vigoare.

Exclusiv pentru utilizarea operei în scopuri personale (articolul 18, articolul 26 din Legea Federației Ruse „Cu privire la drepturile de autor și drepturile conexe”). Reproducerea comercială este interzisă.

Universitatea Medicală de Stat din Kazan, 1999

Epidemiologia leziunilor. Pneumococul este unul dintre principalii agenți cauzali ai pneumoniei bacteriene înregistrate în afara spitalelor (2-4 cazuri la 1000 de persoane); În fiecare an, în lume se observă cel puțin 500.000 de cazuri de pneumonie pneumococică (valoarea reală este mult mai mare). Copiii și bătrânii sunt cei mai susceptibili la infecție. Rezervorul infecției sunt pacienții și purtătorii (20-50% dintre copiii preșcolari și 20-25% dintre adulți); principala cale de transmisie este contactul; în timpul focarelor este și în aer. Incidenta maxima apare in sezonul rece. În marea majoritate a cazurilor, formele clinice de infecție se dezvoltă atunci când rezistența organismului este afectată (inclusiv din cauza stresului la frig), precum și pe fondul altor patologii (anemie falciformă, boala Hodgkin, infecția cu HIV, mielom, diabet zaharat). , afecțiuni după splenectomie etc.) sau cu alcoolism. Opțiunile 1, 2 și 3 joacă cea mai mare semnificație epidemiologică în patologia la adulți; pentru copii - 1, 2, 3 și 14 opțiuni. Virulența serovarilor în ordine descrescătoare este variantele 3, 1, 2, 5, 7 și 8. Șoarecii albi (dacă sunt infectați, mor din cauza septicemiei în 24 de ore), vițeii, mieii, purceii, câinii și maimuțele sunt sensibili la pneumococi.

Pneumococii diferă de alte microorganisme printr-o serie de proprietăți (Tabelul 1).

Tabelul 1 Proprietățile biochimice ale pneumococilor

Substratul de testare	Rezultat	Substratul de testare	Rezultat
Creștere la 100°C

		Rafinoza
Miercuri cu 6,5% Nad

a-hemoliza
B-hemoliza		Trehaloză
		Fosfatază
Hipurat		β-galactozidaza


Glicerol

Denumiri: „+” - 90% sau mai multe tulpini sunt pozitive; (+) - 80-89% dintre tulpini sunt pozitive; d - 21-79% dintre tulpini sunt pozitive; (-) - 11-20% dintre tulpini sunt pozitive; „- - 90% sau mai multe dintre tulpini sunt negative.

Factori de patogenitate. Factorul principal este capsula, care protejează bacteriile de potențialul microbicid al fagocitelor și le abate de la acțiunea opsoninelor. Tulpinile neîncapsulate sunt practic avirulente și sunt rare. Majoritatea grupului de AT antipneumococice constă din AT la capsule Ag. O funcție importantă a capsulei și a proteinei M este, de asemenea, de a asigura aderența la mucoasă. Substanța C este esențială, deoarece interacționează în mod specific cu proteina C reactivă. Consecința unei astfel de reacții este activarea cascadei complementare și eliberarea de mediatori ai fazei acute a inflamației; acumularea lor în ţesutul pulmonar stimulează migrarea fagocitelor polimorfonucleare. Formarea de infiltrate inflamatorii puternice este însoțită de o întrerupere a homeostaziei țesutului pulmonar și de hepatizarea acestuia. Pneumococii produc endotoxină, a- și beta-hemolisine (pneumolizine) și leucocidină. α-pneumolysin este o proteină termolabilă capabilă să neutralizeze O-streptolizina,

Patogenia leziunilor. Biotopul pneumococilor este tractul respirator superior. Patogenia majorității pneumoniilor implică aspirarea salivei care conține S. pneumoniae și pătrunderea bacteriilor în căile respiratorii inferioare. Încălcarea mecanismelor de drenaj protector - impulsul tusei și clearance-ul mucociliar - este esențială. La adulți se observă mai des leziunile pulmonare lobare la copii și vârstnici, predomină leziunile peribronșice sau focale; Formarea de infiltrate inflamatorii puternice este însoțită de o întrerupere a homeostaziei țesutului pulmonar și de hepatizarea acestuia. Infecțiile cu serovarul 3 cel mai virulent pot fi însoțite de formarea de cavități în parenchimul pulmonar. Din focarul primar, agentul patogen poate pătrunde în cavitatea pleurală și pericard sau poate disemina pe cale hematogenă și poate provoca meningită, endocardită și leziuni articulare.

Manifestari clinice. Pneumonia pneumococică clasică începe brusc; Ei observă o creștere a temperaturii corpului, o tuse productivă și dureri în piept. La persoanele slăbite și la vârstnici, boala se dezvoltă lent, cu febră ușoară, tulburări de conștiență și semne de insuficiență cardiacă pulmonară. Meningita streptococică este înregistrată la toate grupele de vârstă; se caracterizează printr-un debut violent cu creșterea temperaturii corpului, rigiditate a mușchilor gâtului, dureri de cap, greață și vărsături. Leziunile vaselor de meninge sunt adesea însoțite de pierderea conștienței; în rândul copiilor și vârstnicilor, mortalitatea poate ajunge la 80%. Destul de des, leziunile pneumococice hematogene, precum și sinuzita, mastoidita, otita medie, endocardita și peritonita, sunt observate la persoanele cu imunodeficiențe (de exemplu, infectate cu HIV) sau la pacienții cu splenectomie. După o boală, se dezvoltă o imunitate instabilă, care este specifică tipului și este cauzată de apariția anticorpilor împotriva polizaharidei capsulare tipice.

Tratament. Baza tratamentului pentru infecția pneumococică este antibioticele - penicilină, tetraciclină, cloramfenicol, vancomicina, rifampicină, ceftriaxonă.

Prevenirea. Prevenirea nespecifică a infecțiilor pneumococice are ca scop identificarea pacienților și purtătorilor cu tratamentul ulterior. Pentru prevenirea specifică a infecției, copiii cu vârsta peste doi ani, adulții cu risc, precum și persoanele sănătoase în timpul unui focar de boală sunt vaccinați cu vaccinul polizaharidic polivalent „Pneumovex 23”. Medicamentul conține 23 de antigene polizaharide capsulare ale pneumococilor (1, 2, 3, 4, 5, 6B 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 1-9F, 209). , 22F, 23F, 33F). Antigene

După vaccinare, se creează imunitatea artificială, activă, specifică tipului.

Prima etapă a studiului. Materialul patologic este supus unei bacterioscopii preliminare (cu excepția sângelui). Sputa se pune într-o cutie Petri sterilă, se spală, se captează cu o buclă un nod mucos purulent, se măcina pe o lamă de sticlă, se usucă și se colorează cu o colorație Gram. Frotiul evidențiază coci gram-pozitivi în formă de lancetă sau ovale, înconjurați de o capsulă (formarea capsulei se observă numai la pneumococii izolați de la animalele bolnave și infectate). Detectarea capsulelor pneumococice poate fi efectuată folosind metoda Burri-Gins. Inocularea materialului patologic se efectuează pe 5-10% agar sânge sau ser și pe mediu de îmbogățire (8-10% bulion de zer). Dacă se suspectează sepsis de natură pneumococică, se inoculează 5-10 ml din sângele pacientului în 45-90 ml bulion de zer. Lichidul cefalorahidian, dacă este limpede, este centrifugat și câteva picături din sediment sunt inoculate pe medii nutritive. Ca mediu de îmbogățire se utilizează agar semisolid din zer. Culturile sunt incubate la 37 °C timp de 24 de ore. Cea mai bună metodă pentru izolarea unei culturi pure de pneumococi este de a infecta șoarecii albi cu material patologic. Sputa, spălată într-o cutie Petri cu soluție salină sterilă, este măcinată într-un mojar steril cu un pistil steril sau sticlă spartă în timp ce se adaugă soluție salină într-un raport de 1:2-1:5. Suspensia este decantată, lichidul supernatant în cantitate de 0,5-1 ml este administrat intraperitoneal la șoareci albi. Dacă pneumococii sunt prezenți în material, șoarecii mor în 72 de ore. Pneumococii tipici se găsesc în frotiurile din organe și sânge. Organele și sângele sunt cultivate și pe bulion de zer și pe vase Petri cu agar sânge sau ser.

A doua etapă a studiului. Se studiază modelul de creștere pe mediile nutritive. Pe agar-sânge, coloniile de pneumococi sunt mici, rotunde, cu netede

Solubilitate în bilă (testul dezoxicolat);

Capacitatea de a descompune inulina;

Sensibilitate la optochin;

Reacție de aglutinare cu seruri antipneumococice specifice;

Capacitatea de a descompune glucoza, maltoza, zaharoza, lactoza, manitolul, sorbitolul si salicina.

Serotiparea pneumococilor. Cultura de 18 ore este testată în reacția de microaglutinare Sabin. Pe o lamă de sticlă se aplică 4 picături de cultură pneumococică. La 1 picătură se adaugă o picătură de ser antipneumococic tip 1, la al 2-lea - ser de tip II, la a 3-a - ser - 111, la a 4-a - o picătură de ser normal. Amestecuri pe sticlă sunt amestecate cu o buclă și examinate la lupă sau la microscop la mărire mică. Într-un caz pozitiv, se observă aglutinarea într-una dintre primele trei picături. Tipul de pneumococ este determinat de o reacție de aglutinare cu seruri de aglutinare specifice din primele trei tipuri fixe. Culturile care nu sunt aglutinate de aceste tipuri de seruri sunt clasificate ca grup X. Reacția este configurată după cum urmează. Se toarnă 0,5 ml de cultură în bulion de 18 ore în eprubete. Apoi se adaugă un volum egal de ser, diluat cu ser fiziologic într-un raport de 1:5. Martorii sunt 2 eprubete, dintre care una conține cultura de testare amestecată cu

Conținutul eprubetelor după agitare este uniform tulbure.

Tiparea pneumococilor din grupul X se realizează folosind grupul

seruri care conțin un amestec de seruri aglutinante tipice luate

în volume egale. Pregătiți următoarele seruri de grup prin

amestecând volume egale de diagnostic standard nediluat

seruri (Lund, 1960):

serovarii A -1, II, IV, V, XVIII;

serovariile B - VI, VIII, XIX;

C - VII, XX. serovare XXIV, XXXI, XL;

D - IX, XI, XVI, XXXVI. XXXVII serovare;

E - X, XXI. XXXIII, XXXIX serovare;

F - XII. XVII. serovare XXII, XXXVII, XXXII, XLI;

G - XIII, XXV. serovare XXIX, XXXIV, XXXV, XXXVIII, XLII, XLVII;

J - XLIII. Serovarii XLIV, XLV, XLVI.

2. Metoda precipitațiilor. 5-10 ml de spută se fierb într-o baie de apă până se obține un cheag dens. Cheagul este măcinat și se adaugă o cantitate mică de ser fiziologic și se fierbe din nou câteva minute pentru a extrage polizaharida specifică din pneumococi. Suspensia este centrifugată și se efectuează o reacție de precipitare inelară cu lichidul limpede rezultat și serul standard specific în tuburi de precipitare. Apariția unui inel la interfața dintre lichide indică un rezultat pozitiv.

Articole similare: