Anti HIV 1 2 mi. Modern módszerek a HIV-fertőzés diagnosztizálására

Az RU 2283497 számú szabadalom tulajdonosai:

A találmány a biotechnológia és az orvostudomány területére vonatkozik. Az első és második típusú humán immundeficiencia vírus (HIV), az első típusú O csoport elleni antitestek spektrumának azonosítására szolgáló enzimhez kötött immunszorbens tesztrendszer, valamint a p24 első típusú humán immundeficiencia vírus antigénjének azonosítása magában foglal egy gp41 (env HIV-1 és HIV-2 O csoport), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV-2), HIV antigén 1 elleni antitesteken alapuló immunszorbens p24-et és kimutatási reagenseket, a fenti HIV-antigéneket és a lemezek különböző üregeiben szorbeált HIV-antitesteket az enzimkapcsolt immunszorbens vizsgálathoz, valamint a 96-lyukú polisztirol összenyomható vagy nem szeparálható lemezeket használjuk a szorpcióhoz. A találmány megnövelt érzékenységet, egyszerűsítést és a szubjektivitás kiküszöbölését biztosítja az eredmények értékelésében. 1 fizetés akták, 10 táblázat, 1 ill.

A találmány a biotechnológia és az orvostudomány területére vonatkozik. Felhasználás: a humán immundeficiencia vírus 1. és 2. fehérje, HIV 1 O csoport és HIV 1 p24 antigén elleni specifikus antitestek minden osztályának differenciált kimutatása.

Lényege: enzimhez kötött immunszorbens tesztrendszer beszerzése az egyes fehérjék, valamint a HIV 1 és 2, HIV 1 O csoport és HIV 1 p24 antigének minden osztályába tartozó antitestek spektrumának azonosítására vérszérumban (plazmában), immunglobulinokban és emberi vérkészítményekben a HIV 1 és 2, HIV 1 O csoport elleni antitestek spektrumának azonosítása, a HIV 1 p24 antigén kimutatása, valamint a HIV 1 és 2, HIV 1 O csoport és HIV 1 p24 antigén elleni antitestek pozitív vagy megkérdőjelezhető szűrési eredményeinek megerősítése.

A TALÁLMÁNY LEÍRÁSA

A HIV-fertőzés laboratóriumi diagnosztikája három területre épül: a) a HIV és összetevőinek kimutatása; b) HIV elleni antitestek kimutatása; c) az immunrendszer változásainak meghatározása. A meglévő laboratóriumi diagnosztikai módszerek közül a leggyakoribbak a szerológiaiak - a vírusantigénekkel szembeni antitestek kimutatása.

Az antitestek kimutatására HIV-fertőzésben elsősorban az enzimhez kötött immunszorbens vizsgálatot (ELISA) és az immunoblotot (IB) alkalmazzák. Az ELISA a vírusantigének rögzítésén alapul olyan lemezeken, amelyekhez a páciens antitestjei kötődnek, és az antigén-antitest komplexet torma-peroxidázzal konjugált egér monoklonális antitestek segítségével mutatják ki humán immunglobulin G és M ellen. A módszer meglehetősen specifikus és érzékeny, és lehetővé teszi a vírusspecifikus antitestek kimutatását a betegek 95% -ánál. Az esetek fennmaradó 5%-a a fertőzés korai szakaszában fordul elő, amikor még kevés antitest van a vérszérumban, vagy a betegség végstádiumában, amikor a szervezet már nem képes antitesteket szintetizálni az erős kimerülés miatt. az immunrendszert. Hamis pozitív ELISA eredmények is lehetségesek, főként autoimmun és onkológiai betegségekben, valamint Eshptain-Barr vírus okozta fertőzések esetén. Ebben az esetben a rheumatoid faktorral, az Epstein-Barr vírussal vagy a fő hisztokompatibilitási komplex 1. és 2. osztályába tartozó (HLA-4 és DQW3) fehérjékhez hasonló antigéndeterminánsokkal szembeni antitestek keresztreakciója, amelyek képesek kötődni a HIV antigénekhez. bekövetkezik. A hamis pozitív eredmények gyakoriak terhes nőknél és időseknél. A hemolízis, a lipémia és a szérum bakteriális szennyeződése szintén megbízhatatlan eredményeket okozhat.

Ebben a tekintetben számos módszert javasoltak és alkalmaztak az antitest-detektálási eredmények specifitásának tesztelésére. Ezen módszerek közül a leggyakrabban használt reakció az „immunblot” a „Western Blot” módosításban. A módszer lényege a következő: az első szakaszban a HIV fehérjéket molekulatömeg alapján választják el poliakrilamid gélelektroforézissel. Ezt követően elektroforetikus átvitelt hajtanak végre a poliakrilamid gélből a nitrocellulóz membrán felületére. Az így átvitt antigéneket a membránon indirekt analízissel detektáljuk: a membránt a vizsgált anyaggal inkubáljuk; a benne lévő antitestek nitrocellulóz membránra átvitt HIV antigénekhez kötődnek, majd a membráncsíkokat a konjugátummal inkubálják; Amikor antigén-antitest komplex képződik, a konjugátum hozzátapad, a konjugátumról való lemosás és a szubsztráttal való inkubálás után a nitrocellulóz azon területein festődés következik be, ahol az antigén-antitest-konjugátum komplex képződése megtörtént. A rajz példákat mutat pozitív, gyengén pozitív és negatív immunblot eredményekre.

A HIV-1 és HIV-2 vírussal fertőzött személyek szérumában a következő fehérjék (p) és glikoproteinek (gp) elleni antitestek mutathatók ki: A táblázat.

A B. táblázat bemutatja a WHO és az Orosz AIDS Megelőzési és Ellenőrzési Központ által javasolt immunblot-vizsgálat eredményeinek értékelési kritériumait.

A WHO-kritériumok alapján azok a szérumok tekinthetők pozitívnak, amelyekben bármely két HIV-1 burokfehérje elleni antitest kimutatható IB módszerrel. Ha a burokfehérjék közül csak az egyikkel (gp160, gp120, gp41) van reakció más fehérjékkel való reakcióval kombinálva vagy anélkül, az eredmény kétségesnek tekinthető. Az Orosz Föderáció Egészségügyi Minisztériumának az AIDS megelőzésével és ellenőrzésével foglalkozó Szövetségi Tudományos és Módszertani Központja szerint lehetséges a szérum pozitívként értelmezni, még akkor is, ha csak egy membránfehérjére van antitest.

A p24 antigén elleni antitestek kimutatása jelezheti a szerokonverzió kezdeti időszakát, mivel az e fehérje elleni antitestek jelennek meg először. A gag és pol fehérjékkel végzett pozitív reakciók env fehérjékkel való reakció nélkül a korai szerokonverzió stádiumát tükrözhetik, és HIV-2 fertőzés vagy nem specifikus reakció jelenlétét is jelezhetik.

Az immunoblot-reakciónak, mint szakértői módszernek a HIV diagnosztizálására, számos jelentős hátránya van:

1. A HIV 1 p24 antigén kimutatásának igazolásának lehetetlensége olyan tesztek alkalmazása esetén, amelyek egyszerre mutatják ki a HIV antigént és antitesteket, ami miatt nem megfelelő (értelmetlen) a szűrővizsgálatok alkalmazása a HIV antigén és antitestek egyidejű kimutatására ( Az Orosz Föderáció Egészségügyi Minisztériumának 292. számú, 2001. július 30-i rendelete: „A donorok vérátömlesztő állomásokon történő vizsgálatához olyan tesztrendszereket kell alkalmazni, amelyek egyidejűleg mutatják ki a HIV antigént és antitesteket”.

2. Csak az IgG osztályba tartozó antitestek kimutatása. A 3. és 4. generációs tesztekkel (IgG és IgM antitestek kimutatása) lehetetlen teljes mértékben megerősíteni a kapott pozitív eredményeket.

3. Szubjektivitás a tesztértékelés értelmezésében, különösen „kétes” és „bizonytalan” eredmények esetén, valamint a szerokonverzió kezdeti szakaszában (a nitrocellulóz membránokon észlelt sávok ezekben az esetekben tisztázatlanok, szabad szemmel alig láthatóak, és gyakran vannak nézeteltérések, amikor különböző személyek értékelik).

4. Az elemzési eredmények automatizált kvantitatív értékelésének lehetetlensége.

5. Alacsonyabb érzékenység az ELISA-hoz képest.

6. Rövid eltarthatósági idő (a tárolás során a nitrocellulóz membráncsíkok kifakulnak, és nem lehet objektív megerősítése a HIV kimutatásának vagy nem észlelésének ellentmondásos esetekben).

7. A reakció beállításának és tárolásának nehézségei (a nitrocellulóz membráncsíkok nagyon törékenyek és gyakran eltörnek).

8. Az információbiztonsági készletek magas költsége.

Egy ismert reagens egy készlet ugyanazon kórokozó elleni antigének és antitestek egyidejű meghatározására, beleértve a HIV-t is (DE 4236189 F1, 1994.04.28.). Olyan tesztrendszert azonban nem hoztak nyilvánosságra, amely lehetővé teszi a HIV-fertőzés különböző szakaszaiban történő diagnosztizálását.

A jelen találmány célja egy olyan tesztrendszer előállítása, amellyel a HIV 1 és 2, HIV 1 O csoport és HIV 1 p24 antigén elleni antitestek szűrővizsgálatainak pozitív vagy megkérdőjelezhető eredményei megerősíthetők, ha teszteket használunk egyidejű kimutatásra. antigének és antitestek.

A javasolt műszaki megoldást egy enzimhez kötött immunszorbens tesztrendszer valósítja meg, amely az első és második típusú humán immundeficiencia vírus (HIV) antitestek spektrumát azonosítja, az O csoport első típusát, és azonosítja a humán immunhiányos betegség p24 antigénjét. az első típusú p24 vírus, azzal jellemezve, hogy a gp41 (env HIV-1 és HIV-2 O csoport), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol) antigéneken alapuló immunszorbenst tartalmaz. , gp36 (env HIV-2), a HIV 1 p24 antigén elleni antitestek és kimutatási reagensek, míg a fent említett HIV antigének és HIV antitestek az enzimkapcsolt immunszorbens vizsgálati lemezek különböző üregeiben adszorbeálódnak.

Ezenkívül a szorpcióhoz 96 lyukú polisztirol összecsukható vagy nem szétszerelhető lemezeket használnak az enzim immunológiai vizsgálathoz.

A jelen találmánnyal elért technikai eredmény a HIV 1 és 2, HIV 1 O csoport és HIV 1 p24 antigén elleni antitestek pozitív eredményeinek megerősítésének lehetősége, nagy érzékenység, az eredmények automatizált értelmezésének lehetősége, amely kiküszöböli a vizsgálat szubjektivitását. értékelés, a teszt elvégzésének egyszerűsége, kevesebb, mint a meglévő költséginformációs biztonsági készleteknél.

Ez a műszaki megoldás eltér az ismertektől:

1. Lemez alkalmazása immunológiai reakciókhoz szilárd fázisú hordozóként.

2. HIV p 24 elleni antitestek és HIV antigének egyidejű alkalmazása szorbensként.

A találmányt a következő példa szemlélteti.

A kifejlesztett "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + AG p24 HIV 1" tesztrendszer hatóanyagai a következők:

Immunszorbens - a HIV-1 szerkezeti fehérjéihez hasonló rekombináns antigének: gp41 (env HIV-1 és HIV 1 O csoport), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), HIV-2: gp36 (env) és a HIV 1(p24) antigén elleni monoklonális egér antitestek, külön-külön adszorbeálva egy polisztirol összenyomható lemez csíkjain.

Az immunszorbens felhasználás előkészítése:

1. A HIV-1 gp41 az AHIV 103 számú E. Coli törzs által termelt fehérje.

2. A HIV-1 gp120 az AHIV 109 számú E. Coli törzs által termelt fehérje.

3. A HIV-1 p24 az AHIV 105 számú E. Coli törzs által termelt fehérje.

4. A HIV-1 p31 az AHIV 108 számú E. Coli törzs által termelt fehérje.

5. A HIV-2 p36 az AHIV 106 számú E. Coli törzs által termelt fehérje.

Az 1. konjugátum, liofilizált vagy folyékony, egy egér monoklonális antitest a HIV1 p24 antigénnel szemben, biotinnal konjugálva.

1. A 2. konjugátum, liofilizált vagy folyékony, a HIV-1 szerkezeti fehérjéihez hasonló rekombináns antigének keveréke: gp41 (env HIV-1 és HIV 1 O csoport), gp120 (env), p24 (gag), p31( po1); HIV-2: gp36 (env), biotinhoz konjugálva;

2. 3, 4 konjugátumok - liofilizált vagy folyékony - sztreptavidin, torma-peroxidázzal jelölt;

Az előtanulmányok során kiválasztották a tesztrendszer kialakítását, kidolgozták a komponenseinek elkészítési technológiáját, optimalizálták az enzim immunoassay reakció lefolytatásának feltételeit.

Amikor ELISA-t végeznek a "DS - ELISA - ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + Ag p24 HIV 1" tesztrendszerben, 25 μl konjugátum-1-et adnak a lemez lyukaiba a p24 elleni szorbeált antitestekkel és 25 μl-t. 25 µl konjugátum-2-t adunk a lyukakhoz szorbeált antigénekkel. A reakcióvázlat az alábbiakban látható. Ezután minden lyukba 25 μl vizsgálati mintát adunk. Ugyanakkor az antigéneket tartalmazó lyukakban a szín narancssárgáról rózsaszínre változik, az antitestekkel rendelkező lyukakban pedig zöldről szürkére. Az elegyet 45 percig 37 °C-on rázógépen (vagy 1 órán át 37 °C-on termosztátban) inkubáljuk. Ezután mosás nélkül adjon 50 μl konjugátum-3-at a lemez üregeibe a p24 antigén meghatározásához, és 50 μl konjugátum-4-et az antitestek meghatározásához. 20 percig 37 °C-on rázógépen (vagy 30 percig 37 °C-on termosztátban) végzett inkubálás után a lemezt mossuk és szubsztrátumkeverékkel előhívjuk. A teljes reakcióidő 1 óra 25 perc (vagy 1 óra 50 perc). A tesztmintában jelenlévő p24 antigén a p24 elleni monoklonális antitestekhez kötődik, és a specifikus antitestek komplexet képeznek a lemezen lévő rekombináns antigénekkel. Az így létrejövő anti-p24 és p24 immunkomplexet anti-p24-biotin konjugátumokkal, majd sztreptavidin-peroxidázzal, az At-HIV-vel alkotott Ag-HIV immunkomplexeket pedig Ag-biotin konjugátummal, majd sztreptavidin-konjugátummal detektáljuk. peroxidáz.

A reakció beállításának sémája.

Az eredményeket spektrofotometriásan vesszük figyelembe két hullámhosszon: 450/620-680 nm, a készülék „levegővel” konfigurálásával. Vegyük figyelembe az eredményeket egy 450 nm-es hullámhosszon.

Az elemzés eredményeit figyelembe veszik, ha az optikai sűrűség (OD) átlagos értéke a K- lyukakban nem haladja meg a 0,2-t, a K+-os lyukakban pedig nem kevesebb, mint 1,0. OP krit. képlettel számolva:

OP krit. gp41 = átl. jelentése OP K-(gp41)+0,15

OP krit. gp120 = átl. jelentése OP K-(gp120)+0,15

OP krit. p24 = átl. jelentése OP K-(р24)+0,15

OP krit. p31 = átl. jelentése OP K-(р31)+0,15

OP krit. gp36 = átl. jelentése OP K-(gp36)+0,15

OP krit. Ag p24 = átl. jelentése OP k- (Ag p24)+0,04

ahol 0,15 és 0,04 a gyártó statisztikai feldolgozásával megállapított együtthatók. A tesztrendszer fejlesztése során a következőket használtuk:

1. Egészséges donorok vérszérummintái (n=610).

2. Vérszérumminták különböző HIV-vel nem összefüggő fertőző betegségekben szenvedő betegektől (akut légúti fertőzések, tüdőgyulladás, mandulagyulladás, herpeszes és citomegalovírus fertőzések, szifilisz, chlamydia, vírusos hepatitis A, B és C (n=224)).

3. Vérszérum minták különböző nem fertőző betegségekben - trauma, szív- és érrendszeri betegségek, onkológia - szenvedő betegektől (n=35).

4. Vérszérum minták terhes nőktől (n=40).

5. ELISA-ban szeropozitív és immunoblottal igazolt vérszérumminták (n=428).

6. A HIV 1.2 antitestek és a p24 antigén egyidejű meghatározására szolgáló enzim immunoassay tesztrendszerekben kapott pozitív eredményű szérumminták, immunoblottal pedig határozatlan eredmény (n=123).

7. HIV 1,2 elleni antitesteket tartalmazó és nem tartalmazó szérumok belső panelje, enzim immunoassay tesztrendszereken és az Orosz Föderáció Egészségügyi Minisztériuma által regisztrált immunbloton tesztelve (n=21).

8. Szabvány "HIV 1 ANTIGEN STANDARD", "BIO RAD", Franciaország, kat. No. 72217, amely egy víruslizátumból nyert antigén.

9. A vállalkozás belső színvonala. 200 pg/ml koncentrációban p 24 antigént tartalmazó minta, amelyet a víruslizátumból nyertünk ki és a "HIV 1 ANTIGEN STANDARD" cég "BIO RAD", Franciaország, kat. 72217 sz.

10. Az 1-es típusú humán immundeficiencia vírus (HIV 1) elleni antitesteket tartalmazó szérumok standard panelje – OSO 42-28-212-93-02P, "Medical and Biological Union", Novoszibirszk.

11. A 2-es típusú humán immundeficiencia vírus (HIV 2) elleni antitesteket tartalmazó szérumok standard panelje - OSO-42-28-216-02P, "Medical and Biological Union", Novoszibirszk.

12. Az 1. és 2. típusú humán immundeficiencia vírus (HIV 1, 2) elleni antitesteket nem tartalmazó szabványos szérum panel - OSO-42-28-214-94-02P, "Orvosi és Biológiai Unió", Novoszibirszk.

A p24 antigén kimutatására szolgáló tesztrendszer érzékenységét a „HIV I ANTIGEN STANDARD”, „BIO RAD” és a vállalat belső standardja segítségével értékelték. A belső standardot használva 4 sorozat, 40 pg/ml-től 5 pg/ml-ig terjedő, kétszeres hígítást készítettünk normál donor plazmával, amely nem tartalmazta az 1., 2. HIV antitesteket, mint hígítószert. A legkisebb kimutatható antigén mennyiségét vettük érzékenységi kritériumnak. A kapott adatokat az 1. táblázat tartalmazza.

A tesztrendszer specifikus antitestek kimutatásában való érzékenységének felmérésére a humán immundeficiencia vírus (HIV 1, 2) elleni antitesteket tartalmazó standard mintapaneleket használtuk (OSO 42-28-212-93-02P p.012, OSO 42-). 28-216- 02P (HIV 2) 003. o.).

A kapott adatokat a 3., 4. táblázat tartalmazza.

A "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24 HIV 1" tesztrendszer diagnosztikai hatékonyságát összehasonlították a "Jenskrin-HIV-Ag/At" (Bio-Rad), "DIA-HIV" tesztrendszerekkel. 1 /2" (Diaprof-Med), "Vironostika HIV Uni-form II Ag/At" (Biomerioux), "Recombinant-HIV1,2 DSM" (MBS), "Amercard Anti-HIV-1,2 K" (Amercard) ), "HIV-1, HIV-2-ELISA-Avicenna" (Avicenna). Ebből a célból a belső panelről vett szérummintákat minden meghatározott tesztben tesztelték. Az 5. táblázatban bemutatott eredmények a „DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1” magas diagnosztikai hatékonyságát jelzik.

A "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" tesztrendszer érzékenységi vizsgálatait is elvégezték olyan betegek vérszérumával, akik immunblottal HIV-pozitívnak bizonyultak. Összesen 428 ilyen szérummintát vizsgáltak meg. Számos lehetőség született a különböző HIV-fehérjék és a p24 antigén elleni antitestek kimutatására. Az eredményeket a 6. táblázat tartalmazza.

A HIV 1 pozitív minták tesztelésekor a szérumok 3%-a mutatott pozitív reakciót a gp36-tal (HIV 2 env). OP/OPcrit. ezekben a mintákban nem haladta meg a 2,0-t. A HIV 1 (gp41) és HIV 2 (gp36) külső héj fehérjéinek keresztreaktivitására vonatkozó adataink egybeesnek az irodalmi adatokkal.

Az eredmények értelmezése

A "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24 HIV 1" standard és belső panelekből származó HIV-pozitív szérumok és minták vizsgálatának elemzése lehetővé tette számunkra, hogy kritériumokat dolgozzunk ki a teszt eredményeinek értelmezésére. A javasolt kritériumokat a 7. táblázat tartalmazza.

Ezen kritériumok alapján az összes HIV-pozitív szérumminta (n=428) pozitívnak bizonyult a „DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV1” vizsgálatban. A HIV 1 elleni antitesteket tartalmazó standard panel 16 mintájából 14 pozitív, 2 pedig határozatlan. A HIV 2 elleni antitesteket tartalmazó standard panel mind a 8 mintája pozitívnak bizonyult. A HIV-ellenes antitesteket tartalmazó belső panel 10 mintájából 7 pozitívnak, 3 pedig határozatlannak bizonyult.

A "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" tesztrendszer érzékenységi vizsgálatait olyan betegek vérszérumával is elvégezték, akik pozitív eredményt adtak az enzimhez kötött immunszorbens tesztrendszerekben, amelyek egyidejűleg detektálják az antitesteket és p24 antigén, és meghatározatlan az immunblotban. Összesen 123 ilyen mintát vizsgáltak meg. Az adatokat a 8. táblázat tartalmazza.

A „DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1” vizsgálatban meghatározatlan immunoblot eredménnyel (n=123) végzett szérumok tesztelésekor 72 minta (58,5%) mutatott pozitív eredményt. Ebből 26 szérum (21,1%) csak p24-re volt pozitív, 20 (16,3%) - csak antitestekre, 16 (13%) - p24-re, valamelyik fehérje ellen antitesttel, 10 (8,1%) - p24-re. két vagy több fehérje elleni antitestek. Így csak az antitestek tesztelése (a p24 kimutatása nélkül) 30 mintát (24,4%) azonosítana pozitívnak. A p24 antigén kimutatása a tesztben lehetővé tette további 42 minta (34,1%) pozitív azonosítását.

A tesztrendszer specifitásának értékelésére egy standard szérum panelt használtunk, amely nem tartalmazott HIV 1, 2 elleni antitesteket (n=20); egészséges donorok vérszérummintái (n=610), különböző, HIV-vel nem összefüggő fertőző betegségben szenvedő betegek vérszérummintái (n=224); különböző nem fertőző betegségekben - trauma, szív- és érrendszeri betegségek, onkológia - szenvedő betegek vérszérummintái (n=35); terhes nők vérszérummintái (n=40). Összesen 929 mintát vizsgáltak meg. Az egészséges donorok vérszérumából vett egy minta hamis pozitív eredményt mutatott - gp41 és p24 elleni antitesteket mutattak ki. Egészséges donoroktól származó 7 vérszérumminta és 2 HIV-vel nem összefüggő fertőző betegségben szenvedő betegek vérszérummintája hamis pozitív eredményt mutatott a p24-re.

A vizsgálati rendszer specifitásának értékelésére negatív mintákból álló standard panelt használtunk (OSO 42-28-214-94-02p, 009. o.). A fajlagosság 100% volt.

Így a vizsgálatok kimutatták, hogy a „DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24 HIV 1” tesztrendszer specificitása 99%-os normál donorok és különféle fertőző és szomatikus betegségekben szenvedő betegek vérszérummintáinak vizsgálatakor. .

A kapott adatok a kifejlesztett "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24 HIV 1" tesztrendszer magas diagnosztikai hatékonyságát mutatják. A tesztrendszer felhasználható a HIV 1-es és 2-es típusú egyedi fehérjéi és a HIV1 p24 antigén elleni antitestek kimutatására, hogy megerősítsék a pozitív szűrési eredményt antitesteket detektáló tesztrendszerekkel, vagy olyan tesztrendszerekkel, amelyek egyidejűleg detektálják az antitesteket és a HIV1 p24 antigént. A tesztrendszer az immunblot teszt alternatívájaként használható a pozitív eredmények megerősítésére, valamint a HIV antitestek és a p24 antigén dinamikájának tanulmányozására a fertőzés különböző szakaszaiban.

A TESZT ELŐNYEI

1. Megerősítő enzim immunoassay teszt tabletta formátumban

2. Megerősítő teszt a HIV 1, 2 antitest spektrum és a HIV 1 p24 antigén meghatározásával

3. Az összes Ig osztályú antitestek kimutatása

4. A p24 kimutatásának érzékenysége legalább 5 pg/ml

5. Csökkenti a határozatlan eredményeket az immunblothoz képest

6. Elemzési idő - 1 óra 25 perc (immunblot - 3-20 óra)

7. Az összes komponens és minta hozzáadásának vizuális értékelése.

1. Enzimhez kötött immunszorbens tesztrendszer az első és második típusú humán immundeficiencia vírus (HIV) elleni antitestek spektrumának azonosítására, az O csoport első típusára, valamint az első típusú humán immundeficiencia vírussal szembeni p24 antigén azonosítására p24, azzal jellemezve, hogy a gp41 (env HIV-1 és HIV-2 O csoport), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV) képviselő immunhiányos vírus antigénjein alapuló immunszorbenst tartalmaz. -2), a HIV 1 p24 antigén elleni antitestek és a detektáló reagensek, míg a fent említett HIV antigéneket és HIV antitesteket a lemezek különböző üregeiben szorbeálják az enzimkapcsolt immunszorbens vizsgálathoz.

2. Az 1. igénypont szerinti enzimes immunoassay tesztrendszer, azzal jellemezve, hogy a szorpcióhoz 96-lyukú polisztirol összenyomható vagy nem szétválasztható lemezeket használunk az enzim immunoassay-hez.

Általános információk a tanulmányról

A HIV (humán immundeficiencia vírus) a retrovírusok családjába tartozó vírus, amely megfertőzi az emberi immunrendszer sejtjeit (CD4, T helper sejtek). AIDS-et okoz.

A HIV-1 a vírus leggyakoribb típusa, leggyakrabban Oroszországban, az USA-ban, Európában, Japánban és Ausztráliában fordul elő (általában B altípus).

A HIV-2 ritka típus, Nyugat-Afrikában gyakori.

A humán immunhiány vírus diagnosztizálására egy negyedik generációs kombinált tesztrendszert alkalmaznak, amely a vírus vérbe jutását követő 2 héten belül képes kimutatni a HIV-fertőzést, míg az első generációs tesztrendszerek ezt csak a fertőzés után 6-12 héttel.

Ennek a kombinált HIV-tesztnek az az előnye, hogy a HIV-1 p24 elleni antitestek reagensként történő felhasználásának köszönhetően kimutatható a specifikus p24 antigén (vírus kapszid fehérje), amely ezzel a teszttel kimutatható a vizsgálattól számított 1-4 héten belül. fertőzés pillanatában, vagyis még a szerokonverzió előtt, ami jelentősen lerövidíti az „ablakperiódus”-ot.

Ezenkívül ez a HIV-teszt kimutatja a HIV-1 és HIV-2 elleni antitesteket a vérben (az antigén-antitest reakció segítségével), amelyek elegendő mennyiségben termelődnek ahhoz, hogy a fertőzés után 2-8 héttel a tesztrendszer kimutathassa.

A szerokonverziót követően az antitestek elkezdenek kötődni a p24 antigénhez, ami pozitív HIV antitest tesztet és negatív p24 tesztet eredményez. Egy idő után azonban mind az antitestek, mind az antigén egyidejűleg kimutatható a vérben. A végső szakaszban a HIV-ellenes antitestek AIDS-tesztje negatív eredményt adhat, mivel az antitest-termelés mechanizmusa megszakad.

A HIV-fertőzés szakaszai

1. Az inkubációs periódus, vagy a „szeronegatív ablak periódusa” a fertőzés pillanatától a vírus elleni védekező antitestek vérben történő kifejlődéséig tartó idő, amikor is a HIV elleni antitestek kimutatása negatív, de a személy már továbbadhatja a vírust. más embereknek. Ez az időszak 2 héttől 6 hónapig tart.
2. Az akut HIV-fertőzés időszaka átlagosan 2-4 héttel kezdődik a fertőzés pillanatától számítva, és körülbelül 2-3 hétig tart. Ebben a szakaszban néhány embernél nem specifikus influenzaszerű tünetek alakulhatnak ki a vírus aktív replikációja miatt.
3. A látens szakasz tünetmentes, de közben fokozatosan csökken az immunitás és megnő a vírus mennyisége a vérben.
4. Az AIDS (szerzett immunhiányos szindróma) a HIV-fertőzés kialakulásának végső szakasza, amelyet az immunrendszer súlyos elnyomása, valamint a kísérő betegségek, az encephalopathia vagy a rák jellemez.

Annak ellenére, hogy a HIV-fertőzés gyógyíthatatlan, ma már létezik rendkívül aktív antiretrovirális terápia (ART), amely jelentősen meghosszabbíthatja a HIV-fertőzöttek életét és javíthatja annak minőségét.

Ennek a tesztnek különösen magas a diagnosztikus értéke, ha a HIV-fertőzés röviddel a vizsgálat időpontja előtt (2-4 hét) történt.

Mire használják a kutatást?

Az elemzést a HIV korai diagnosztizálására használják, amely lehetővé teszi a vírus további átvitelének megakadályozását más emberekre, valamint az antiretrovirális terápia időben történő megkezdését és a HIV-fertőzés progressziójához hozzájáruló betegségek kezelését.

Mikorra tervezik a vizsgálatot?

• Tartós (2-3 hétig tartó) ismeretlen eredetű tünetekkel: alacsony láz, hasmenés, éjszakai izzadás, hirtelen fogyás, megnagyobbodott nyirokcsomók.
• Ismétlődő herpeszfertőzés, vírusos hepatitis, tüdőgyulladás, tuberkulózis, toxoplazmózis esetén.
• Ha a beteg szexuális úton terjedő betegségekben szenved (szifilisz, chlamydia, gonorrhoea, genitális herpesz, bakteriális vaginosis).
• Ha a beteg védekezés nélküli vaginális, anális vagy orális szexet folytatott több szexuális partnerrel, új partnerrel, vagy olyan partnerrel, akinek HIV-státuszában a beteg nem biztos.
• Amikor a beteg donor vérátömlesztésen esett át (bár az ilyen fertőzéses esetek gyakorlatilag kizártak, mivel a vért gondosan megvizsgálják a vírusrészecskék jelenlétére, és speciális hőkezelésnek vetik alá).
• Ha a beteg nem steril eszközökkel injektált gyógyszereket.
• Terhesség/terhesség tervezése alatt (azidotimidin szedése terhesség alatt, császármetszés a vírus csecsemőre való átjutásának elkerülése érdekében a szülőcsatornán való áthaladás során, valamint a szoptatás elkerülése 30%-ról 1%-ra csökkenti a HIV anyáról gyermekre történő átvitelének kockázatát ).
• Véletlen injekció fertőzött vért tartalmazó fecskendővel vagy más tárggyal (például orvosi műszerrel) (ilyen esetekben a fertőzés valószínűsége rendkívül alacsony).

A világon manapság a legelterjedtebb vírus az AIDS, a retrovírusok alcsaládjába tartozó vírus, amelyet lentivírusnak vagy „lassúnak” is neveznek. Valójában az emberi testben viszonylag hosszú idő, körülbelül 10 év után kezdenek aktivitást mutatni.

Az első és a második típusú immunhiányok vannak. De nyugodtan beszélhetünk az első típusú vírus terjedéséről. A vérbe kerülve és az immunitásért felelős sejthez csatlakozva a vírus gyorsan szaporodni kezd. Míg a felismeréséért felelős CD4 molekula azonosítja az alattomos ellenséget, sikerül megfertőznie az egész szervezetet. Ezért minél korábban diagnosztizálják, annál nagyobb a beteg esélye az időben történő kezelésre és hosszabb életre.

Ha valakinek oka van arra, hogy tesztelje magát AIDS-re, ezt azonnal meg kell tenni. Leggyakrabban az ilyen diagnózis alapja az immunhiány elleni antitestek meghatározása a vérben - olyan fehérjék, amelyek a vírus jelenlétére adott reakcióként keletkeznek, és a lehetséges időponttól számított 1,5-6 hónapos időszakban kezdenek kialakulni. fertőzés. Ennek megfelelően ezen időszak után célszerűbb diagnosztikát végezni.

Az antitestek mennyiségét az úgynevezett enzim-linked immunosorbent assay (ELISA) elemzéssel határozzák meg. Ez a módszer megbízható, viszonylag pontos és nagyon érzékeny, ezek a számok 99,5% felettiek. A gyógyszerpiac számos ELISA-diagnosztikai tesztkészletet kínál: CombiBest HIV, Anti-HIV 1 2, CombiBest anti-HIV, CombiBest anti-HIV 1 2, CombiBest anti-HIV 1 2 d 0172. Ezek a tesztrendszerek a harmadik csoportba tartoznak. generáció. Ezeknek a reagenseknek az a hátránya, hogy nem mindig észlelik korán a betegséget. A személy már vírushordozó, potenciálisan veszélyes a partnerekre, de az antitestek még nincsenek jelen a vérben.

A készletek főként számos teszttel vannak felszerelve 12*8 vagy 192 HIV-ellenes teszt elvégzésére. Önállóan nem ajánlott használni őket. A gyógyszerek leírásából kiderül, hogy fő céljuk az AIDS mindkét típusával szembeni antitestek mennyiségének kimutatása. És meghatározza az AIDS elleni összes osztály antitesteit. Ha nincsenek antitestek, akkor a betegséget nem diagnosztizálták.

A tesztek negyedik generációja az antitesteken kívül AIDS-antigéneket is „lát”, hamarabb képesek kimutatni a fertőzést, mint a harmadik generációs módszerek. Összehasonlításképpen: a HIV-antigén az 5. naptól kezdve a vérben van, és az első antitestek legkorábban egy hónappal később jelennek meg. A CombiBest HIV 1, 2 AG/AT (1. készlet) és a CombiBest HIV 1, 2 AG/AT (2. készlet) a 4. generációs tesztek közé tartoznak. Ezen reagensek sorozatának felhasználásával az 1-es, 2-es és p24 típusú antigén elleni antitestek kimutathatók humán vérszérum vagy plazma vizsgálatával. Sok országban alkalmazzák a 4. generációs ELISA-tesztet, amelyet Antigén/Antitestnek is neveznek, rövidítve AGAT.

A tesztelés névtelenül történik.

A HIV-fertőzés időben történő diagnosztizálása rendkívül fontos intézkedéssé válik, mivel a kezelés korai megkezdése nagymértékben meghatározhatja a betegség további fejlődését és meghosszabbíthatja a beteg életét. Az elmúlt években jelentős előrelépés történt e szörnyű betegség azonosításában: a régebbi tesztrendszereket felváltják a fejlettebbek, a vizsgálati módszerek egyre hozzáférhetőbbé válnak, pontosságuk pedig jelentősen nő.

Ebben a cikkben a HIV-fertőzés diagnosztizálásának modern módszereiről fogunk beszélni, amelyek ismerete hasznos a probléma időben történő kezeléséhez és a beteg normális életminőségének fenntartásához.

HIV diagnosztikai módszerek

Oroszországban standard eljárást végeznek a HIV-fertőzés diagnosztizálására, amely két szintből áll:

• ELISA tesztrendszer (szűrőelemzés);
• immunoblot (IB).

A diagnózishoz más módszerek is használhatók:

• gyorstesztek.

ELISA tesztrendszerek

A diagnózis első szakaszában a HIV-fertőzés kimutatására szűrőtesztet (ELISA) alkalmaznak, amely laboratóriumokban létrehozott HIV-fehérjéken alapul, amelyek megfogják a fertőzésre válaszul a szervezetben termelődő specifikus antitesteket. A tesztrendszer reagenseivel (enzimeivel) való kölcsönhatás után az indikátor színe megváltozik. Ezután ezeket a színváltozásokat speciális berendezéssel dolgozzák fel, amely meghatározza az elvégzett elemzés eredményét.

Az ilyen ELISA-tesztek a HIV-fertőzés bejutását követő néhány héten belül mutathatnak eredményt. Ez a teszt nem állapítja meg a vírus jelenlétét, hanem kimutatja a vele szembeni antitestek termelését. Előfordul, hogy az emberi szervezetben a HIV-ellenes antitestek termelése a fertőzés után 2 héttel kezdődik, de a legtöbb embernél később, 3-6 hét elteltével termelődnek.

Az ELISA-teszteknek négy generációja létezik, változó érzékenységgel. Az utóbbi években egyre gyakrabban alkalmazzák a harmadik és negyedik generációs tesztrendszereket, amelyek szintetikus peptideken vagy rekombináns fehérjéken alapulnak, és nagyobb specificitással és pontossággal rendelkeznek. Használhatók a HIV-fertőzés diagnosztizálására, a HIV-prevalencia nyomon követésére és a biztonság garantálására az adományozott vér tesztelésekor. A III és IV generációs ELISA tesztrendszerek pontossága 93-99% (a Nyugat-Európában gyártott tesztek érzékenyebbek - 99%).

Az ELISA teszt elvégzéséhez 5 ml vért vesznek a páciens vénájából. Az utolsó étkezés és az elemzés között legalább 8 órának kell eltelnie (általában reggel, éhgyomorra). Javasoljuk, hogy egy ilyen tesztet legkorábban 3 héttel a fertőzés gyanúja után végezzen (például új szexuális partnerrel való védekezés nélküli szexuális kapcsolat után).

Az ELISA teszt eredményei 2-10 napon belül érhetők el:

• negatív eredmény: HIV-fertőzés hiányát jelzi, és nem szükséges szakemberhez fordulni;
• hamis negatív eredmény: megfigyelhető a fertőzés korai szakaszában (legfeljebb 3 hétig), az AIDS későbbi szakaszában az immunrendszer súlyos szuppressziójával és nem megfelelő vér-előkészítéssel;
• hamis pozitív eredmény: egyes betegségeknél és nem megfelelő vérkészítés esetén is megfigyelhető;
• pozitív eredmény: HIV-fertőzést jelez, IB-t kell végezni, és a betegnek kapcsolatba kell lépnie az AIDS-központ szakemberével.

Miért adhat hamis pozitív eredményt az ELISA teszt?

Hamis pozitív HIV ELISA teszteredmények fordulhatnak elő helytelen vérfeldolgozás miatt, vagy a következő állapotokban és betegségekben szenvedő betegeknél:

• myeloma multiplex;
• az Epstein-Barr vírus által okozott fertőző betegségek;
• állapot után ;
• autoimmun betegség;
• a terhesség hátterében;
• vakcinázás utáni állapot.

A fent leírt okok miatt a vérben olyan nem specifikus, keresztreagáló antitestek lehetnek jelen, amelyek termelődését nem HIV-fertőzés váltotta ki.

Az elmúlt években jelentősen csökkent az álpozitív eredmények gyakorisága a III. és IV. generációs tesztrendszerek alkalmazása miatt, amelyek érzékenyebb peptid- és rekombináns fehérjéket tartalmaznak (in vitro génsebészettel szintetizálják). Az ilyen ELISA tesztek bevezetése után a hamis pozitív eredmények gyakorisága jelentősen csökkent, és körülbelül 0,02-0,5%.

A hamis pozitív eredmény nem jelenti azt, hogy a személy HIV-fertőzött. Ilyen esetekben a WHO újabb ELISA-teszt elvégzését javasolja (szükségszerűen IV generációs).

A páciens vérét referencia- vagy választott laboratóriumba küldik „ismétlés” jelzéssel, és IV generációs ELISA tesztrendszerrel tesztelik. Ha az új elemzés eredménye negatív, akkor az első eredményt hibásnak (hamis pozitívnak) kell tekinteni, és az IS nem kerül végrehajtásra. Ha az eredmény pozitív vagy megkérdőjelezhető a második teszt során, a betegnek 4-6 hét után IB-n kell átesnie a HIV-fertőzés megerősítésére vagy cáfolatára.

Immunblotozás

A HIV-fertőzés végleges diagnózisát csak pozitív immunblot (IB) eredmény megszerzése után lehet felállítani. Ennek végrehajtásához nitrocellulóz csíkot használnak, amelyre vírusfehérjéket visznek fel.

Az IB vérmintavétele vénából történik. Ezt követően speciális feldolgozáson esik át, és a szérumában lévő fehérjéket töltésük és molekulatömegük szerint speciális gélben választják el (a manipulációt speciális berendezéssel, elektromos mező hatására végzik). A vérszérum gélre nitrocellulóz csíkot helyeznek, és egy speciális kamrában blottolást („blotolást”) végeznek. A csíkot feldolgozzák, és ha a felhasznált anyagok HIV-ellenes antitesteket tartalmaznak, akkor azok az IB antigén sávjaihoz kötődnek, és vonalként jelennek meg.

Az IB pozitívnak tekinthető, ha:

• az amerikai CDC-kritériumok szerint - két vagy három sor van a gp41, p24, gp120/gp160 csíkon;
• az amerikai FDA kritériumok szerint a csík két p24, p31 és egy gp41 vagy gp120/gp160 vonalat tartalmaz.

Az esetek 99,9%-ában a pozitív IB eredmény HIV-fertőzést jelez.

Ha nincsenek vonalak, az IB negatív.

A gr160, gr120 és gr41 vonalak azonosításakor az IB kétséges. Ez az eredmény akkor fordulhat elő, ha:

• onkológiai betegségek;
• terhesség;
• gyakori vérátömlesztés.

Ilyen esetekben ajánlatos megismételni a vizsgálatot egy másik cég készletével. Ha további IB után az eredmény kétséges marad, akkor hat hónapig kell megfigyelni (az IB-t 3 havonta kell elvégezni).

Polimeráz láncreakció

A PCR teszt képes kimutatni a vírus RNS-ét. Érzékenysége meglehetősen magas, és lehetővé teszi a HIV-fertőzés kimutatását a fertőzést követő 10 napon belül. Egyes esetekben a PCR álpozitív eredményt adhat, mivel nagy érzékenysége más fertőzések elleni antitestekre is reagálhat.

Ez a diagnosztikai technika drága, speciális felszerelést és magasan képzett szakembereket igényel. Ezek az okok nem teszik lehetővé a populáció tömeges tesztelését.

A PCR-t a következő esetekben alkalmazzák:

• HIV-fertőzött anyáktól született újszülötteknél a HIV kimutatása;
• HIV kimutatására az „ablakidőszakban” vagy kétes IB esetén;
• a HIV koncentrációjának szabályozása a vérben;
• donorvér vizsgálatához.

A PCR-teszt önmagában nem állítja fel a HIV diagnózisát, hanem kiegészítő diagnosztikai módszerként végzik el a vitás helyzetek megoldására.

Expressz módszerek

A HIV-diagnosztika egyik újítása a gyorstesztek, amelyek eredménye 10-15 percen belül értékelhető. A leghatékonyabb és legpontosabb eredményeket a kapilláris áramlás elvén alapuló immunkromatográfiás tesztek adják. Ezek speciális csíkok, amelyekre vért vagy más vizsgálati folyadékot (nyál, vizelet) visznek fel. Ha HIV-ellenes antitestek vannak jelen, 10-15 perc elteltével színes és kontrollcsík jelenik meg a teszten - pozitív eredmény. Ha az eredmény negatív, csak a kontrollcsík jelenik meg.

Az ELISA tesztekhez hasonlóan a gyorstesztek eredményeit IB-analízissel kell megerősíteni. Csak ezt követően lehet diagnosztizálni a HIV-fertőzést.

Vannak gyors otthoni tesztelő készletek. Az OraSure Technologies1 teszt (USA) az FDA által jóváhagyott, vény nélkül kapható, és HIV kimutatására használható. A vizsgálat után, ha az eredmény pozitív, a betegnek ajánlatos vizsgálatot végezni egy speciális központban a diagnózis megerősítésére.

Más otthoni használatra szánt teszteket még nem hagyott jóvá az FDA, és eredményeik nagyon megkérdőjelezhetőek lehetnek.

Annak ellenére, hogy a gyorstesztek gyengébbek, mint az IV generációs ELISA-tesztek, széles körben használják őket a populáció további tesztelésére.

A HIV-fertőzés kimutatására szolgáló teszteket bármelyik klinikán, központi körzeti kórházban vagy speciális AIDS-központban elvégezheti. Oroszország területén abszolút bizalmasan vagy névtelenül hajtják végre. Minden páciens orvosi vagy pszichológiai konzultációra számíthat a vizsgálat előtt vagy után. A HIV-tesztekért csak a kereskedelmi egészségügyi intézményekben kell fizetni, míg az állami klinikákon és kórházakban ingyenesen elvégzik.

Olvassa el, hogyan fertőződhet meg HIV-vel, és milyen mítoszok léteznek a fertőzés lehetőségeivel kapcsolatban.

Leírás

Készítmény

Javallatok

Az eredmények értelmezése

Leírás

Meghatározási módszer Enzimhez kötött immunszorbens vizsgálat (ELISA).

Vizsgált anyag Vérszérum

Házi látogatás lehetséges

HIV 1. és 2. típusú antitestek és HIV p24 antigén kombinált kimutatása, kvalitatív teszt.

Figyelem. Pozitív és megkérdőjelezhető reakciók esetén az eredménykiadás határideje 10 munkanapra meghosszabbítható. A HIV (humán immundeficiencia vírus), amely AIDS-et (szerzett immunhiányos szindrómát) okoz, a retrovírusok családjába tartozik. Emberről emberre fertőzött tűk és fecskendők segítségével terjed intravénás gyógyszeradagoláshoz vagy terápiás eljárásokhoz, szexuális érintkezés során, heteroszexuális és homoszexuális egyaránt. A vírus átvitele történhet fertőzött vér és termékeinek transzfúziójával, szerv- vagy magfolyadék adományozásával, valamint egészségügyi dolgozók között - szennyezett tűk vagy műszerek által okozott sérülések révén. A HIV-fertőzés a fertőzött anyáról gyermekre való átterjedéssel lehetséges (függőleges úton), bár az antiretrovirális terápiát alkalmazó modern megelőzési módszerek, ha minden ajánlást betartanak, minimálisra csökkenthetik ezt a kockázatot.

A vírus és a sejt kölcsönhatásának folyamata számos szakaszból áll: a vírus kötődése a sejthez, felszabadítása a burokból, behatolás a citoplazmába, DNS szintézise vírus RNS segítségével, vírus DNS integrációja a sejt genomjába. a gazdasejt. Ezt követően kezdődik a fertőzés látens szakasza. Ebben az állapotban a provirális DNS egy ideig létezhet anélkül, hogy aktivitást mutatna, és anélkül, hogy befolyásolná a gazdasejt életét. Bár a vírusfehérjék nem expresszálódnak, nincs immunválasz a vírusra. A HIV elleni antitestek, amelyek a szervezet immunválaszát jellemzik, a vírus DNS aktiválása és a vírus aktív reprodukciójának kezdete után jelennek meg. A látens időszak időtartama számos tényezőtől függ, beleértve a szervezet egyedi genetikai jellemzőit.

A HIV-ellenes antitestek a fertőzést követő második héttől kezdődően jelenhetnek meg; tartalmuk 2-4 héten belül megnövekszik és sok évig megmarad. A fertőzöttek 90-95%-ánál a fertőzést követő első három hónapban, 5-9%-ánál - három-hat hónapos időszakban, 0,5-1%-ánál - később jelentkeznek.

A fertőzés első heteiben, még a vírus elleni antitestek megjelenése előtt (azaz a szerokonverzió előtt) szérum- vagy plazmamintákban kimutatható a HIV antigének jelenléte, beleértve annak p24 kapszid fehérjét is. Később, a szerokonverzió után általában kimutathatatlanná válik.

A 4. generációs kombinált tesztrendszerek, amelyek magukban foglalják a HIV Ag/Ab Combo tesztet (Architect, Abbott), kimutatják mind a HIV 1. és 2. típusú antitesteket, mind a HIV p24 antigént, ami lehetővé teszi a fertőzés korai felismerését. Az INVITRO laboratóriumban a HIV-fertőzés kimutatására használt szűrővizsgálat speciális jellemzői közé tartozik a vizsgálat magas specificitása (> 99,5%); A teszt 100%-ban érzékeny a szerokonverzió időszakára jellemző antitestekre, és a teszt érzékenysége a p24 antigénre körülbelül 18 pg/ml.

A HIV laboratóriumi vizsgálatának eljárását szigorúan az Orosz Föderáció Egészségügyi Minisztériumának rendeletei szabályozzák, és magában foglalja a HIV-ellenes antitestek jelenlétének szűrési (szelekciós) vizsgálatának szakaszát enzimhez kötött immunszorbens vizsgálattal (ELISA). felhasználásra jóváhagyott módszereket, valamint egy verifikációs (megerősítő) részletesebb vizsgálatot a városi AIDS központ laboratóriumában. Meg kell jegyezni, hogy még a legjobb szűrő ELISA rendszerek sem garantálják a 100% -os specificitást, vagyis van némi valószínűsége a nem specifikus, hamis pozitív eredmények elérésének a páciens vérszérumának jellemzőivel kapcsolatban. Ezért előfordulhat, hogy a szűrő ELISA vizsgálat pozitív eredménye nem erősíthető meg a megerősítő tesztekkel, ami után a beteg negatív vagy határozatlan eredményt kap. Ha a megerősítő vizsgálat eredménye bizonytalan, a vizsgálatot idővel 2-3 hét elteltével meg kell ismételni.

A HIV-fertőzött anyáktól született gyermekek HIV-fertőzésének laboratóriumi diagnózisának megvannak a maga sajátosságai. A HIV elleni anyai antitestek (IgG osztály) a születéstől számított 18 hónapig keringhetnek a vérükben. A HIV elleni antitestek hiánya újszülötteknél nem jelenti azt, hogy a vírus nem hatol át a placenta gáton. A HIV-fertőzött anyák gyermekeit a születést követő 36 hónapon belül laboratóriumi diagnosztikai vizsgálatnak vetik alá.

Készítmény

Különleges előkészítés nem szükséges. A vérvétel az utolsó étkezés után legkorábban 4 órával javasolt. A kutatásra való felkészüléshez általános ajánlások találhatók. A HIV antigén és antitestek kimutatására szolgáló tesztet célszerű legkorábban az esetleges fertőzés után két héttel elvégezni, negatív eredmény esetén három és hat hét elteltével ismételni. Az INVITRO LLC-nél végzett kutatási kérelmeket útlevéllel vagy azt helyettesítő okmánnyal (migrációs kártya, ideiglenes tartózkodási hely szerinti regisztráció, katonai személyi igazolvány, útlevél-hivatal igazolása útlevél elvesztése esetén, regisztrációs kártya egy szálloda). A bemutatott dokumentumnak feltétlenül tartalmaznia kell az Orosz Föderációban történő ideiglenes vagy állandó regisztrációra vonatkozó információkat és egy fényképet. Útlevél (az azt helyettesítő dokumentum) hiányában a betegnek joga van anonim kérvényt kitölteni bioanyag adományozására. Az anonim vizsgálat, az ügyféltől kapott kérelem és bioanyagminta során olyan számot rendelnek hozzá, amelyet csak a beteg és a rendelést feladó egészségügyi személyzet ismer. ! Az anonim módon végzett vizsgálatok eredményeit nem lehet kórházi kezelésre, szakmai vizsgálatra benyújtani, és az ORUIB-ba nem kell bejegyezni.

Használati javallatok

• Megnagyobbodott nyirokcsomók több mint két területen.
• Leukopénia limfopéniával.
• Éjjeli izzadás.
• Hirtelen fogyás ismeretlen okból.
• Több mint három hétig tartó hasmenés ismeretlen okból.
• Ismeretlen okú láz.
• Terhesség tervezése.
• Preoperatív felkészítés, kórházi kezelés.
• A következő fertőzések vagy ezek kombinációinak kimutatása: tuberkulózis, manifeszt toxoplazmózis, gyakran visszatérő herpeszvírus fertőzés, belső szervek candidiasisa, ismételt herpes zoster neuralgia, mycoplasma, pneumocystis vagy legionella okozta tüdőgyulladás.
• Kaposi-szarkóma fiatalon.
• Alkalmi szexuális kapcsolatok.

Az eredmények értelmezése

A kutatási eredmények értelmezése információkat tartalmaz a kezelőorvos számára, és nem minősül diagnózisnak. Az ebben a részben található információkat nem szabad öndiagnózisra vagy önkezelésre használni. Az orvos pontos diagnózist készít mind a vizsgálat eredményei, mind a szükséges információk más forrásokból: kórtörténet, egyéb vizsgálatok eredményei stb.

Mértékegységek a Független Laboratóriumban INVITRO: kvalitatív teszt. Az eredmények bemutatásának formája: HIV 1 és 2 és p24 antigén elleni antitestek hiányában a válasz „negatív”. Ha a szűrőenzimhez kötött immunszorbens tesztben HIV-ellenes antitesteket vagy antigént mutatnak ki, a szérummintát immunoblottal történő megerősítésre küldik a városi AIDS-központba, amely igazolja a pozitív és határozatlan eredményeket.

Pozitív eredmény:

1. HIV fertőzés;
2. hamis pozitív eredmény ismételt vagy további vizsgálatokat igényel *);
3. a vizsgálat nem tájékoztató jellegű a HIV-fertőzött anyáktól született 18 hónaposnál fiatalabb gyermekek esetében.

*A HIV 1 és 2 antitestek és HIV antigén 1 és 2 (HIV Ag/Ab Combo, Abbott) szűrővizsgálati rendszer specificitása a reagens gyártója által közölt becslések szerint körülbelül 99,6% mind az általános populációban, mind a potenciális interferenciával rendelkező betegek csoportja (HBV, HCV, Rubeola, HAV, EBV, HNLV-I, HTLV-II, E. coli, Chl. trach. stb. fertőzések, autoimmun patológiák (beleértve a rheumatoid arthritist, antinukleáris antitestek jelenlétét) , terhesség, emelkedett IgG, IgM szint, monoklonális gammopathiák, hemodialízis, többszöri vérátömlesztés).