مكافحة فيروس نقص المناعة البشرية 1 2 ماذا. الطرق الحديثة لتشخيص الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية

أصحاب براءة الاختراع RU 2283497:

يتعلق الاختراع بمجال التكنولوجيا الحيوية والطب. يتضمن نظام اختبار الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم للتعرف على طيف الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية (HIV) من النوع الأول والثاني النوع الأول من المجموعة O وتحديد المستضد لفيروس نقص المناعة البشرية من النوع الأول p24 يتضمن الممتز المناعي على أساس مستضدات فيروس نقص المناعة البشرية التي تمثل gp41 (env فيروس نقص المناعة البشرية-1 وفيروس نقص المناعة البشرية-2 المجموعة O)، gp120 (env)، p24 (gag)، p31 (pol)، gp36 (env فيروس نقص المناعة البشرية-2)، الأجسام المضادة لمستضد فيروس نقص المناعة البشرية 1 p24، وكواشف الكشف، ومستضدات فيروس نقص المناعة البشرية المذكورة أعلاه والأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية الممتصة في آبار مختلفة من الصفائح من أجل مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم، ويتم استخدام صفائح بوليسترين قابلة للطي أو غير قابلة للفصل ذات 96 بئرًا للامتصاص. يوفر الاختراع حساسية متزايدة وتبسيطًا وإزالة الذاتية في تقييم النتائج. 1 الراتب ملفات، 10 جداول، 1 مريض.

يتعلق الاختراع بمجال التكنولوجيا الحيوية والطب. الاستخدام: الكشف المتمايز لجميع فئات الأجسام المضادة المحددة لبروتينات فيروس نقص المناعة البشرية 1 و 2، ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية 1 المجموعة O ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية 1 p24.

الجوهر: الحصول على نظام اختبار الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم لتحديد طيف الأجسام المضادة من جميع الفئات للبروتينات الفردية وفيروس نقص المناعة البشرية 1 و 2 وفيروس نقص المناعة البشرية 1 المجموعة O ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية 1 p24 في مصل الدم (البلازما)، والجلوبيولين المناعي ومنتجات الدم البشرية في من أجل تحديد طيف الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية 1 و2، وفيروس نقص المناعة البشرية 1 المجموعة O، والكشف عن مستضد فيروس نقص المناعة البشرية 1 p24 وتأكيد نتائج الفحص الإيجابية أو المشكوك فيها للأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية 1 و2، ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية 1 المجموعة O، ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية 1 p24.

وصف الاختراع

يعتمد التشخيص المختبري للإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية على ثلاثة مجالات: أ) الإشارة إلى فيروس نقص المناعة البشرية ومكوناته؛ ب) الكشف عن الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية. ج) تحديد التغيرات في جهاز المناعة. من بين طرق التشخيص المختبري الحالية، الأكثر شيوعا هي الطرق المصلية - الكشف عن الأجسام المضادة لمستضدات الفيروس.

للكشف عن الأجسام المضادة في عدوى فيروس نقص المناعة البشرية، يتم استخدام مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) والتطعيم المناعي (IB) بشكل أساسي. يعتمد اختبار ELISA على تثبيت المستضدات الفيروسية على الصفائح التي ترتبط بها الأجسام المضادة للمريض، ويتم اكتشاف مجمع الأجسام المضادة للمستضد باستخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة الفأرية المترافقة مع بيروكسيداز الفجل مع الجلوبيولين المناعي البشري G وM. هذه الطريقة محددة وحساسة للغاية وتسمح باكتشاف الأجسام المضادة الخاصة بالفيروسات لدى 95% من المرضى. تحدث الـ 5% المتبقية من الحالات في المراحل المبكرة من العدوى، عندما لا يزال هناك عدد قليل من الأجسام المضادة في مصل الدم، أو في المراحل النهائية من المرض، عندما لا يعود الجسم قادرًا على تصنيع الأجسام المضادة بسبب الاستنفاد الحاد للأجسام المضادة. الجهاز المناعي. من الممكن أيضًا الحصول على نتائج ELISA إيجابية كاذبة، خاصة في المرضى الذين يعانون من أمراض المناعة الذاتية والأورام، وكذلك في حالات العدوى الناجمة عن فيروس إشبتين-بار. في هذه الحالة، تفاعل الأجسام المضادة مع عامل الروماتويد أو فيروس إبشتاين بار أو محددات المستضدات المشابهة لبروتينات معقد التوافق النسيجي الرئيسي من الدرجة 1 و2 (HLA-4 وDQW3) ولها القدرة على الارتباط بمستضدات فيروس نقص المناعة البشرية. يحدث. النتائج الإيجابية الكاذبة شائعة عند النساء الحوامل وكبار السن. قد يؤدي أيضًا انحلال الدم وشحوم الدم والتلوث الجرثومي للمصل إلى نتائج غير موثوقة.

وفي هذا الصدد، تم اقتراح واستخدام عدد من الطرق لاختبار خصوصية نتائج الكشف عن الأجسام المضادة. ومن بين هذه الطرق، رد الفعل الأكثر استخدامًا هو "النشاف المناعي" في التعديل "Western Blot". جوهر الطريقة هو كما يلي: في المرحلة الأولى، يتم فصل بروتينات فيروس نقص المناعة البشرية بالوزن الجزيئي باستخدام الكهربائي للهلام بولي أكريلاميد. يتم بعد ذلك إجراء النقل الكهربي من هلام البولي أكريلاميد إلى سطح غشاء النيتروسليلوز. يتم الكشف عن المستضدات المنقولة بهذه الطريقة على الغشاء باستخدام التحليل غير المباشر: يتم تحضين الغشاء مع مادة الاختبار؛ ترتبط الأجسام المضادة الموجودة بمستضدات فيروس نقص المناعة البشرية المنقولة إلى غشاء النيتروسليلوز، ثم يتم تحضين شرائح الغشاء مع المترافق؛ عندما يتم تكوين مركب مستضد-جسم مضاد، يرتبط به المترافق؛ بعد الغسيل من المترافق والحضانة مع الركيزة، يحدث تلطيخ في تلك المناطق من النيتروسليلوز حيث حدث تكوين مجمع مستضد-جسم مضاد-مترافق. يُظهر الرسم أمثلة على النتائج الإيجابية والإيجابية الضعيفة والسلبية.

تم الكشف عن الأجسام المضادة للبروتينات التالية (p) والبروتينات السكرية (gp) في مصل الأشخاص المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية -1 وفيروس نقص المناعة البشرية -2: الجدول أ.

يعرض الجدول ب معايير تقييم نتائج التطعيم المناعي الذي أوصت به منظمة الصحة العالمية والمركز الروسي للوقاية من الإيدز ومكافحته.

بناءً على معايير منظمة الصحة العالمية، تعتبر الأمصال التي يتم فيها اكتشاف الأجسام المضادة لأي بروتينين مغلفين لـHIV-1 بواسطة طريقة IB إيجابية. إذا كان هناك تفاعل مع واحد فقط من بروتينات الغلاف (gp160، gp120، gp41) مع أو بدون تفاعل مع بروتينات أخرى، فإن النتيجة تعتبر مشكوك فيها. وفقًا للمركز العلمي والمنهجي الفيدرالي التابع لوزارة الصحة في الاتحاد الروسي للوقاية من مرض الإيدز ومكافحته، من الممكن تفسير الأمصال على أنها إيجابية حتى في وجود أجسام مضادة لبروتين غشائي واحد فقط.

قد يشير اكتشاف الأجسام المضادة للمستضد p24 إلى فترة بداية الانقلاب المصلي، حيث تظهر الأجسام المضادة لهذا البروتين أولاً. التفاعلات الإيجابية مع بروتينات gag وpol دون وجود تفاعل مع بروتينات env قد تعكس مرحلة الانقلاب المصلي المبكر وتشير أيضًا إلى وجود عدوى فيروس العوز المناعي البشري -2 أو تفاعل غير محدد.

إن استخدام رد الفعل المناعي كطريقة متخصصة لتشخيص فيروس نقص المناعة البشرية له عدد من العيوب الهامة:

1. استحالة تأكيد اكتشاف مستضد فيروس نقص المناعة البشرية 1 p24 في حالة استخدام الاختبارات التي تكشف في وقت واحد عن المستضد والأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية، مما يجعل من غير المناسب (لا معنى له) استخدام اختبارات الفحص للكشف المتزامن عن المستضد والأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية ( أمر وزارة الصحة في الاتحاد الروسي رقم 292 بتاريخ 30 يوليو 2001: "لفحص المتبرعين في محطات نقل الدم، من الضروري استخدام أنظمة اختبار تكتشف في نفس الوقت المستضد والأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية").

2. الكشف عن الأجسام المضادة من فئة IgG فقط. من المستحيل التأكد بشكل كامل من النتائج الإيجابية التي تم الحصول عليها باستخدام اختبارات الجيل الثالث والرابع (الكشف عن الأجسام المضادة IgG وIgM).

3. الموضوعية في تفسير تقييم الاختبار، خاصة في حالات النتائج "المشكوك فيها" و"غير المؤكدة" وفي المراحل الأولية للانقلاب المصلي (النطاقات المكتشفة على أغشية النيتروسليلوز في هذه الحالات غير واضحة، بالكاد مرئية بالعين المجردة، وغالبًا ما يكون هناك خلاف عند تقييمه من قبل أشخاص مختلفين).

4. استحالة التقييم الكمي الآلي لنتائج التحليل.

5. حساسية أقل مقارنة بـ ELISA.

6. مدة صلاحية قصيرة (أثناء التخزين، تتلاشى شرائح غشاء النيتروسليلوز ولا يمكن أن تكون تأكيدًا موضوعيًا لاكتشاف أو عدم اكتشاف فيروس نقص المناعة البشرية في الحالات المثيرة للجدل).

7. صعوبة في إعداد التفاعل والتخزين (شرائط غشاء النيتروسليلوز هشة للغاية وغالباً ما تنكسر).

8. ارتفاع تكلفة أدوات أمن المعلومات.

الكاشف المعروف هو مجموعة أدوات لتحديد المستضدات والأجسام المضادة لنفس العامل الممرض في وقت واحد، بما في ذلك فيروس نقص المناعة البشرية (DE 4236189 F1، 28/04/1994). ومع ذلك، لم يتم الكشف عن نظام اختبار يسمح بتشخيص الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية في مراحل مختلفة.

الهدف من الاختراع الحالي هو الحصول على نظام اختبار يمكن من خلاله تأكيد النتائج الإيجابية أو المشكوك فيها لاختبارات فحص الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية 1 و2، ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية 1 المجموعة O ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية 1 p24 عند استخدام اختبارات للكشف المتزامن. من المستضدات والأجسام المضادة.

يتم التوصل إلى الحل التقني المقترح عن طريق نظام اختبار الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم للتعرف على طيف الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية (HIV) من النوع الأول والثاني النوع الأول من المجموعة O وتحديد المستضد p24 لفيروس نقص المناعة البشرية فيروس من النوع الأول p24، يتميز بأنه يشتمل على مادة ماصة مناعية تعتمد على مستضدات فيروس نقص المناعة البشرية، ويمثل gp41 (env HIV-1 وHIV-2 group O)، gp120 (env)، p24 (gag)، p31 (pol) ، gp36 (env فيروس نقص المناعة البشرية-2)، والأجسام المضادة لمستضد فيروس نقص المناعة البشرية 1 p24، وكواشف الكشف، في حين يتم امتصاص مستضدات فيروس نقص المناعة البشرية المذكورة أعلاه والأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية في آبار مختلفة من لوحات مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم.

بالإضافة إلى ذلك، يتم استخدام ألواح البوليسترين القابلة للطي أو غير القابلة للفك ذات 96 بئرًا للمقايسة المناعية الإنزيمية للامتصاص.

النتيجة التقنية التي حققها الاختراع الحالي هي إمكانية تأكيد النتائج الإيجابية للأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية 1 و2، ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية 1 المجموعة O ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية 1 p24، والحساسية العالية، وإمكانية التفسير الآلي للنتائج، مما يلغي الموضوعية للاختراع. التقييم، وسهولة إجراء الاختبار، أقل من تكلفة مجموعات أمن المعلومات الحالية.

يختلف هذا الحل التقني عن الحلول المعروفة:

1. استخدام صفيحة التفاعلات المناعية كحاملة للطور الصلب.

2. الاستخدام المتزامن للأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية ص 24 ومجموعة من مستضدات فيروس نقص المناعة البشرية كمادة ماصة.

يتم توضيح الاختراع من خلال المثال التالي.

المبادئ النشطة لنظام الاختبار المطور "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + AG p24HIV 1" هي:

الممتز المناعي - مستضدات مؤتلفة مشابهة للبروتينات الهيكلية لفيروس نقص المناعة البشرية-1: gp41 (env فيروس نقص المناعة البشرية-1 وفيروس نقص المناعة البشرية 1 المجموعة O)، gp120 (env)، p24 (gag)، p31 (pol)، فيروس نقص المناعة البشرية-2: gp36 (env) والأجسام المضادة للفأر وحيدة النسيلة لمستضد فيروس نقص المناعة البشرية 1 (p24)، ممتزة بشكل منفصل على شرائح من لوحة البوليسترين القابلة للطي.

لإعداد استخدام الممتز المناعي:

1. فيروس نقص المناعة البشرية-1 gp41 هو بروتين تنتجه سلالة الإشريكية القولونية رقم AHIV 103.

2.HIV-1 gp120 هو بروتين تنتجه سلالة E. Coli رقم AHIV 109.

3. فيروس نقص المناعة البشرية-1 p24 هو بروتين تنتجه سلالة الإشريكية القولونية رقم AHIV 105.

4. فيروس نقص المناعة البشرية-1 p31 هو بروتين تنتجه سلالة الإشريكية القولونية رقم AHIV 108.

5. فيروس نقص المناعة البشرية-2 p36 هو بروتين تنتجه سلالة الإشريكية القولونية رقم AHIV 106.

المترافق 1، المجفف بالتجميد أو السائل، هو جسم مضاد أحادي النسيلة للفئران لمستضد فيروس نقص المناعة البشرية 1 p24 المترافق مع البيوتين.

1. المترافق 2، المجفف بالتجميد أو السائل، عبارة عن خليط من المستضدات المؤتلفة المشابهة للبروتينات الهيكلية لفيروس نقص المناعة البشرية-1: gp41 (env HIV-1 وHIV 1 group O)، gp120 (env)، p24 (gag)، p31( po1); فيروس نقص المناعة البشرية-2: gp36 (env)، مترافق مع البيوتين؛

2. الاتحادات 3، 4 - الستربتافيدين المجفف بالتجميد أو السائل، المسمى ببيروكسيداز الفجل الحار؛

خلال الدراسات الأولية، تم اختيار تصميم نظام الاختبار، وتطوير تكنولوجيا تحضير مكوناته، وتحسين ظروف إجراء تفاعل المقايسة المناعية الإنزيمية.

عند إجراء ELISA في نظام الاختبار "DS - ELISA - ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + Ag p24 فيروس نقص المناعة البشرية 1"، تتم إضافة 25 ميكرولتر من الاتحاد -1 إلى آبار اللوحة مع الأجسام المضادة الممتصة إلى p24، و25 ميكرولتر تتم إضافة المرافق -1 إلى الآبار مع المستضدات الممتصة 25 ميكرولتر من المرافق -2. يظهر مخطط التفاعل أدناه. بعد ذلك، تتم إضافة 25 ميكرولتر من عينة الاختبار إلى كل بئر. في الوقت نفسه، يتغير اللون في الآبار ذات المستضدات من البرتقالي إلى الوردي، وفي البئر مع الأجسام المضادة - من الأخضر إلى الرمادي. يتم تحضين الخليط لمدة 45 دقيقة عند 37 درجة مئوية على شاكر (أو ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في منظم الحرارة). بعد ذلك، دون غسل، أضف 50 ميكرولتر من المرافق -3 إلى فتحات اللوحة لتحديد المستضد p24، و50 ميكرولتر من المرافق -4 في فتحات اللوحة لتحديد الأجسام المضادة. بعد الحضانة لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية في شاكر (أو 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية في منظم الحرارة)، يتم غسل اللوحة وتطويرها باستخدام خليط الركيزة. إجمالي وقت التفاعل ساعة و 25 دقيقة (أو ساعة و 50 دقيقة). يرتبط مستضد p24 الموجود في عينة الاختبار بالأجسام المضادة وحيدة النسيلة بـ p24، وتشكل الأجسام المضادة المحددة مركبًا يحتوي على مستضدات مؤتلفة على اللوحة. تم اكتشاف المجمع المناعي الناتج لمضاد p24 مع p24 باستخدام اتحادات البيوتين المضاد لـ p24، ثم باستخدام الستربتافيدين-بيروكسيداز، وتم اكتشاف المجمعات المناعية Ag-HIV مع At-HIV باستخدام اتحاد Ag-البيوتين، ثم باستخدام الستربتافيدين- بيروكسيداز.

مخطط لإعداد رد الفعل.

تم أخذ النتائج في الاعتبار طيفيًا عند طولين موجيين: 450/620-680 نانومتر مع تكوين الجهاز "عن طريق الجو". دعونا نأخذ في الاعتبار النتائج عند طول موجة واحد يبلغ 450 نانومتر.

تؤخذ نتائج التحليل في الاعتبار إذا كان متوسط ​​​​قيم الكثافة الضوئية (OD) في الآبار التي تحتوي على K- لا يزيد عن 0.2، في الآبار التي تحتوي على K+ - لا يقل عن 1.0. الحرجة OP. تحسب بواسطة الصيغة:

الحرجة OP. gp41 = متوسط. معنى أوب ك-(gp41)+0.15

الحرجة OP. gp120 = متوسط. معنى أوب ك-(gp120)+0.15

الحرجة OP. ص24 = متوسط. معنى أوب ك-(ص24)+0.15

الحرجة OP. ص31 = متوسط. معنى أوب ك-(ص31)+0.15

الحرجة OP. gp36 = متوسط. معنى أوب ك-(gp36)+0.15

الحرجة OP. Ag p24 = متوسط. معنى OP k- (Ag p24) +0.04

حيث 0.15 و 0.04 عبارة عن معاملات تم تحديدها عن طريق المعالجة الإحصائية في الشركة المصنعة. أثناء تطوير نظام الاختبار تم استخدام ما يلي:

1. عينات مصل الدم من متبرعين أصحاء (العدد = 610).

2. عينات مصل الدم من المرضى الذين يعانون من أمراض معدية مختلفة غير مرتبطة بفيروس نقص المناعة البشرية (التهابات الجهاز التنفسي الحادة والالتهاب الرئوي والتهاب اللوزتين والعدوى الهربسية والفيروس المضخم للخلايا والزهري والكلاميديا ​​​​والتهاب الكبد الفيروسي A و B و C (العدد = 224)).

3. عينات مصل الدم من المرضى الذين يعانون من أمراض مختلفة غير معدية - الصدمات، أمراض القلب والأوعية الدموية، الأورام (العدد = 35).

4. عينات مصل الدم من النساء الحوامل (العدد=40).

5. عينات مصل الدم إيجابية مصليا في ELISA وتأكدت في طخة مناعية (ن = 428).

6. عينات المصل مع نتيجة إيجابية تم الحصول عليها في أنظمة اختبار المقايسة المناعية الإنزيمية لتحديد متزامن للأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية 1.2 ومستضد p24، ونتيجة غير محددة بواسطة الكتلة المناعية (العدد = 123).

7. لوحة داخلية من الأمصال التي تحتوي على أو لا تحتوي على أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية 1،2، تم اختبارها على أنظمة اختبار المقايسة المناعية الإنزيمية والبقع المناعية المسجلة من قبل وزارة الصحة في الاتحاد الروسي (العدد = 21).

8. معيار "HIV 1 ANTIGEN STANDARD"، "BIO RAD"، فرنسا، قطة. رقم 72217 وهو مستضد تم الحصول عليه من المحللة الفيروسية.

9. المعيار الداخلي للمؤسسة. عينة تحتوي على مستضد p 24 بتركيز 200 بيكوغرام/مل، تم الحصول عليها من المحللة الفيروسية ومعايرتها وفقاً لشركة "HIV 1 ANTIGEN STANDARD" "BIO RAD"، فرنسا، قطة. رقم 72217.

10. لوحة قياسية من الأمصال التي تحتوي على أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية من النوع 1 (HIV 1) - OSO 42-28-212-93-02P، "الاتحاد الطبي والبيولوجي"، نوفوسيبيرسك.

11. لوحة قياسية من الأمصال التي تحتوي على أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية من النوع 2 (HIV 2) - OSO-42-28-216-02P، "الاتحاد الطبي والبيولوجي"، نوفوسيبيرسك.

12. لوحة قياسية من الأمصال التي لا تحتوي على أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية من النوع 1 و 2 (HIV 1، 2) - OSO-42-28-214-94-02P، "الاتحاد الطبي والبيولوجي"، نوفوسيبيرسك.

تم تقييم حساسية نظام الاختبار للكشف عن المستضد p24 باستخدام "HIV I ANTIGEN STANDARD" و"BIO RAD" والمعيار الداخلي للمؤسسة. باستخدام المعيار الداخلي، تم تحضير 4 تخفيفات متسلسلة ثنائية الطية من 40 بيكوغرام/مل إلى 5 بيكوغرام/مل باستخدام بلازما متبرع طبيعية، خالية من الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية 1، 2، كمخفف. تم أخذ أصغر كمية من المستضد القابل للاكتشاف كمعيار للحساسية. يتم عرض البيانات التي تم الحصول عليها في الجدول 1.

لتقييم حساسية نظام الاختبار في اكتشاف أجسام مضادة محددة، تم استخدام لوحات قياسية من العينات التي تحتوي على أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية (HIV 1، 2) (OSO 42-28-212-93-02P ص.012، OSO 42-) 28-216-02P (HIV 2) ص.003).

وترد البيانات التي تم الحصول عليها في الجداول 3، 4.

تمت مقارنة الكفاءة التشخيصية لنظام الاختبار "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24 HIV 1" مع أنظمة الاختبار "Jenskrin-HIV-Ag/At" (Bio-Rad)، "DIA-HIV" 1/2" (Diaprof-Med)، "Vironostika IV Uni-form II Ag/At" (Biomerioux)، "Recombinant-HIV1,2 DSM" (MBS)، "Amercard Anti-HIV-1,2 K" (Amercard ) ، "فيروس نقص المناعة البشرية-1، فيروس نقص المناعة البشرية-2-إليسا-ابن سينا" (ابن سينا). ولهذا الغرض، تم اختبار عينات المصل من اللوحة الداخلية في جميع الاختبارات المحددة. تشير النتائج الواردة في الجدول 5 إلى الكفاءة التشخيصية العالية لـ "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24HIV 1".

كما تم إجراء دراسات الحساسية لنظام الاختبار "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24HIV 1" باستخدام أمصال الدم المأخوذة من مرضى تم تأكيد إصابتهم بفيروس نقص المناعة البشرية عن طريق التطعيم المناعي. تم اختبار ما مجموعه 428 عينة من هذه الأمصال. تم الحصول على عدة خيارات للكشف عن الأجسام المضادة لبروتينات فيروس نقص المناعة البشرية المختلفة ومستضد p24. وترد النتائج في الجدول 6.

عند اختبار العينات الإيجابية لفيروس نقص المناعة البشرية 1، أظهرت 3% من الأمصال تفاعلًا إيجابيًا مع gp36 (HIV 2 env). أوب/أوكريت. في هذه العينات لم يتجاوز 2.0. تتوافق بياناتنا حول التفاعل المتبادل لبروتينات الغلاف الخارجي لفيروس نقص المناعة البشرية 1 (gp41) وفيروس نقص المناعة البشرية 2 (gp36) مع بيانات الأدبيات.

تفسير النتائج

سمح لنا تحليل اختبار الأمصال الإيجابية لفيروس نقص المناعة البشرية وعينات من اللوحات القياسية والداخلية في "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24HIV 1" بوضع معايير لتفسير نتائج هذا الاختبار. وترد المعايير الموصى بها في الجدول 7.

بناءً على هذه المعايير، تم تحديد جميع عينات الأمصال الإيجابية لفيروس نقص المناعة البشرية (العدد = 428) لتكون إيجابية في "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24HIV1". من بين 16 عينة من اللوحة القياسية التي تحتوي على أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية 1، تم تحديد 14 عينة على أنها إيجابية وعينتين غير محددتين. تم تحديد جميع العينات الثمانية من اللوحة القياسية التي تحتوي على أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية 2 لتكون إيجابية. من بين 10 عينات من اللوحة الداخلية التي تحتوي على أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية 1، تم تحديد 7 منها على أنها إيجابية و3 على أنها غير محددة.

كما تم إجراء دراسات الحساسية لنظام الاختبار "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 فيروس نقص المناعة البشرية 1" باستخدام أمصال الدم من المرضى الذين حصلوا على نتيجة إيجابية في أنظمة اختبار الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم والتي تكشف في نفس الوقت عن الأجسام المضادة و مستضد p24، وغير محدد في طخة مناعية. تم اختبار ما مجموعه 123 عينة من هذا القبيل. يتم عرض البيانات في الجدول 8.

عند اختبار الأمصال بنتيجة طخة مناعية غير محددة (العدد = 123) في "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24HIV 1"، أظهرت 72 عينة (58.5%) نتيجة إيجابية. من بين هذه، 26 مصلًا (21.1%) كانت إيجابية فقط لـ p24، 20 (16.3%) - للأجسام المضادة فقط، 16 (13%) - لـ p24 مع أجسام مضادة لأحد البروتينات، 10 (8.1%) - لـ p24 مع الأجسام المضادة لاثنين أو أكثر من البروتينات. وبالتالي، فإن اختبار الأجسام المضادة فقط (دون الكشف عن p24) من شأنه أن يحدد 30 عينة (24.4٪) على أنها إيجابية. سمح اكتشاف المستضد p24 في الاختبار بتحديد 42 عينة إضافية (34.1٪) على أنها إيجابية.

لتقييم خصوصية نظام الاختبار، تم استخدام لوحة قياسية من الأمصال التي لا تحتوي على أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية 1، 2 (ن = 20)؛ عينات مصل الدم من متبرعين أصحاء (العدد = 610)، وعينات مصل الدم من مرضى يعانون من أمراض معدية مختلفة (العدد = 224) غير مرتبطة بفيروس نقص المناعة البشرية؛ عينات مصل الدم من المرضى الذين يعانون من أمراض غير معدية مختلفة - الصدمات، وأمراض القلب والأوعية الدموية، والأورام (العدد = 35)؛ عينات مصل الدم من النساء الحوامل (ن = 40). تم فحص إجمالي 929 عينة. أظهرت عينة واحدة من أمصال الدم لمتبرعين أصحاء نتيجة إيجابية كاذبة - حيث تم اكتشاف الأجسام المضادة لـ gp41 وp24. أظهرت 7 عينات من أمصال الدم من متبرعين أصحاء وعينتين من أمصال الدم من مرضى يعانون من أمراض معدية غير مرتبطة بفيروس نقص المناعة البشرية نتيجة إيجابية كاذبة لـ p24.

لتقييم خصوصية نظام الاختبار، تم استخدام لوحة قياسية من العينات السلبية (OSO 42-28-214-94-02p، ص 009). كانت الخصوصية 100٪.

وبذلك أثبتت الدراسات أن خصوصية نظام الاختبار “DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24HIV 1” تبلغ 99% عند فحص عينات مصل الدم من متبرعين عاديين ومرضى يعانون من أمراض معدية وجسدية مختلفة .

وتظهر البيانات التي تم الحصول عليها الكفاءة التشخيصية العالية لنظام الاختبار المطور "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24HIV 1". يمكن استخدام نظام الاختبار للكشف عن الأجسام المضادة للبروتينات الفردية لأنواع فيروس نقص المناعة البشرية 1 و2 ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية 1 p24 من أجل تأكيد نتيجة فحص إيجابية باستخدام أنظمة اختبار تكتشف الأجسام المضادة، أو أنظمة اختبار تكتشف الأجسام المضادة ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية 1 p24 في نفس الوقت. يمكن استخدام نظام الاختبار كبديل لاختبار اللطخة المناعية لتأكيد النتائج الإيجابية، وكذلك لدراسة ديناميكيات الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية ومستضد p24 في مراحل مختلفة من الإصابة.

مزايا الاختبار

1. اختبار المقايسة المناعية الإنزيمية التأكيدية على شكل أقراص

2. اختبار تأكيدي يجمع بين تحديد طيف الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية 1، 2 ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية 1 p24

3. الكشف عن الأجسام المضادة لجميع فئات Ig

4. حساسية الكشف عن p24 لا تقل عن 5 بيكوغرام/مل

5. يقلل من النتائج غير المحددة مقارنة بالتطعيم المناعي

6. وقت التحليل - ساعة و 25 دقيقة (البقعة المناعية - من 3 إلى 20 ساعة)

7. التقييم البصري لإضافة جميع المكونات والعينات.

1. نظام اختبار الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم للتعرف على طيف الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية (HIV) من النوع الأول والثاني النوع الأول من المجموعة O وتحديد المستضد p24 لفيروس نقص المناعة البشرية من النوع الأول p24، يتميز بأنه يشتمل على ماص مناعي يعتمد على مستضدات فيروس نقص المناعة البشرية، ويمثل gp41 (env فيروس نقص المناعة البشرية-1 وفيروس نقص المناعة البشرية-2 المجموعة O)، gp120 (env)، p24 (gag)، p31 (pol)، gp36 (env فيروس نقص المناعة البشرية) -2)، والأجسام المضادة لمستضد فيروس نقص المناعة البشرية 1 p24، والكشف عن الكواشف، في حين يتم امتصاص مستضدات فيروس نقص المناعة البشرية المذكورة أعلاه والأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية في آبار مختلفة من الصفائح لفحص الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم.

2. نظام اختبار المقايسة المناعية الإنزيمية وفقًا للمطالبة 1، والذي يتميز باستخدام صفائح بوليسترين قابلة للطي أو غير قابلة للفصل مكونة من 96 بئرًا للمقايسة المناعية الإنزيمية للامتصاص.

معلومات عامة عن الدراسة

فيروس نقص المناعة البشرية (فيروس نقص المناعة البشرية) هو فيروس من عائلة الفيروسات القهقرية التي تصيب خلايا الجهاز المناعي البشري (خلايا CD4، الخلايا التائية المساعدة). يسبب مرض الإيدز.

يعد فيروس نقص المناعة البشرية (HIV-1) هو النوع الأكثر شيوعًا من الفيروسات، ويوجد غالبًا في روسيا والولايات المتحدة وأوروبا واليابان وأستراليا (عادةً النوع الفرعي B).

فيروس نقص المناعة البشرية -2 هو نوع نادر، شائع في غرب أفريقيا.

لتشخيص فيروس نقص المناعة البشرية، يتم استخدام نظام اختبار مشترك من الجيل الرابع، وهو قادر على اكتشاف الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية في غضون أسبوعين بعد دخول الفيروس إلى الدم، بينما تقوم أنظمة اختبار الجيل الأول بذلك بعد 6-12 أسبوعًا فقط من الإصابة.

تتمثل ميزة هذا الاختبار المشترك لفيروس نقص المناعة البشرية في اكتشاف مستضد p24 المحدد (بروتين القفيصة الفيروسي)، وذلك بفضل استخدام الأجسام المضادة لـHIV-1 p24 ككواشف، والذي يمكن اكتشافه بواسطة هذا الاختبار في غضون 1-4 أسابيع من تاريخ الإصابة. لحظة الإصابة، أي حتى قبل الانقلاب المصلي، مما يقلل بشكل كبير من "فترة النافذة".

بالإضافة إلى ذلك، يكشف اختبار فيروس نقص المناعة البشرية هذا عن الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية -1 وفيروس نقص المناعة البشرية -2 في الدم (باستخدام تفاعل الجسم المضاد للمستضد)، والتي يتم إنتاجها بكميات كافية ليتم اكتشافها بواسطة نظام الاختبار بعد 2-8 أسابيع من الإصابة.

بعد الانقلاب المصلي، تبدأ الأجسام المضادة في الارتباط بمستضد p24، مما يؤدي إلى نتيجة إيجابية لاختبار الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية واختبار p24 سلبي. ومع ذلك، بعد مرور بعض الوقت، سيتم اكتشاف كل من الأجسام المضادة والمستضد في الدم في نفس الوقت. في المرحلة النهائية، قد يعطي اختبار الإيدز للأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية نتيجة سلبية، حيث يتم تعطيل آلية إنتاج الأجسام المضادة.

مراحل الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية

1. فترة الحضانة، أو “فترة النافذة المصلية” هي الوقت من لحظة الإصابة حتى تطور الأجسام المضادة الواقية للفيروس في الدم، عندما تكون اختبارات الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية سلبية، ولكن يمكن للشخص بالفعل نقل الفيروس لأشخاص آخرين. مدة هذه الفترة من أسبوعين إلى 6 أشهر.
2. تبدأ فترة الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية الحادة في المتوسط ​​من 2 إلى 4 أسابيع من لحظة الإصابة وتستمر حوالي 2-3 أسابيع. في هذه المرحلة، قد يصاب بعض الأشخاص بأعراض غير محددة تشبه أعراض الأنفلونزا بسبب التكاثر النشط للفيروس.
3. المرحلة الكامنة بدون أعراض، ولكن خلالها يحدث انخفاض تدريجي في المناعة وزيادة في كمية الفيروس في الدم.
4. الإيدز (متلازمة نقص المناعة المكتسب) هو المرحلة الأخيرة من تطور الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية، والتي تتميز بالقمع الشديد لجهاز المناعة، وكذلك الأمراض المصاحبة أو اعتلال الدماغ أو السرطان.

على الرغم من أن الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية غير قابلة للشفاء، إلا أن هناك اليوم علاجًا نشطًا للغاية بمضادات الفيروسات القهقرية (ART)، والذي يمكن أن يطيل عمر الشخص المصاب بفيروس نقص المناعة البشرية بشكل كبير ويحسن جودته.

يتمتع هذا الاختبار بقيمة تشخيصية عالية بشكل خاص إذا حدثت الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية قبل وقت قصير من وقت الاختبار (2-4 أسابيع).

ما هو البحث المستخدم ل؟

يُستخدم التحليل للتشخيص المبكر لفيروس نقص المناعة البشرية، مما يسمح بمنع انتقال الفيروس إلى أشخاص آخرين، بالإضافة إلى البدء في الوقت المناسب في العلاج المضاد للفيروسات القهقرية وعلاج الأمراض التي تساهم في تطور الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية.

متى يتم تحديد موعد الدراسة؟

• مع أعراض مستمرة (لمدة 2-3 أسابيع) مجهولة السبب: حمى منخفضة الدرجة، إسهال، تعرق ليلي، فقدان مفاجئ للوزن، تضخم الغدد الليمفاوية.
• لعلاج عدوى الهربس المتكررة، التهاب الكبد الفيروسي، الالتهاب الرئوي، السل، داء المقوسات.
• إذا كانت المريضة تعاني من أمراض تنتقل عن طريق الاتصال الجنسي (الزهري، الكلاميديا، السيلان، الهربس التناسلي، التهاب المهبل الجرثومي).
• إذا كان المريض قد مارس الجنس المهبلي أو الشرجي أو الفموي دون وقاية مع شركاء جنسيين متعددين، أو شريك جديد، أو شريك لم يكن المريض متأكدًا من إصابته بفيروس نقص المناعة البشرية.
• عندما يخضع المريض لعملية نقل دم من متبرع (على الرغم من استبعاد حالات العدوى بهذه الطريقة عمليا، حيث يتم اختبار الدم بعناية للتأكد من وجود جزيئات فيروسية ويخضع لمعالجة حرارية خاصة).
• إذا قام المريض بحقن المخدرات باستخدام أدوات غير معقمة.
• أثناء الحمل/التخطيط للحمل (تناول أزيدوثيميدين أثناء الحمل، والولادة القيصرية لتجنب انتقال الفيروس إلى الطفل أثناء مروره عبر قناة الولادة، وتجنب الرضاعة الطبيعية يقلل من خطر انتقال فيروس نقص المناعة البشرية من الأم إلى الطفل من 30٪ إلى 1٪) ).
• الحقن العرضي بحقنة أو أي شيء آخر (على سبيل المثال، أداة طبية) يحتوي على دم ملوث (في مثل هذه الحالات يكون احتمال الإصابة بالعدوى منخفضًا للغاية).

الفيروس الأكثر انتشارًا في العالم اليوم هو فيروس الإيدز، وهو فيروس من فصيلة الفيروسات القهقرية، وتسمى أيضًا الفيروسات البطيئة أو "البطيئة". في الواقع، يبدأون في إظهار النشاط في جسم الإنسان بعد فترة طويلة نسبيًا، حوالي 10 سنوات.

هناك نقص المناعة من النوع الأول والثاني. لكن يمكننا أن نتحدث بأمان عن انتشار النوع الأول من الفيروس. وبمجرد دخوله إلى الدم وانضمامه إلى الخلية المسؤولة عن المناعة، يبدأ الفيروس في التكاثر بسرعة. وبينما يحدد جزيء CD4، المسؤول عن التعرف عليه، العدو الخبيث، فإنه يتمكن من إصابة الجسم بأكمله بالعدوى. لذلك، كلما تم تشخيص المرض مبكرًا، زادت فرص المريض في تلقي العلاج في الوقت المناسب والعيش لفترة أطول.

إذا كان لدى الشخص سبب لإجراء فحص الإيدز لنفسه، فيجب القيام بذلك على الفور. في أغلب الأحيان، أساس هذا التشخيص هو تحديد الأجسام المضادة لنقص المناعة في الدم - البروتينات التي تنشأ كرد فعل لوجود الفيروس، وتبدأ في التشكل في الفترة من 1.5 إلى 6 أشهر من وقت الإمكان. عدوى. وبناء على ذلك، فمن الأفضل إجراء التشخيص بعد هذه الفترة.

يتم تحديد كمية الأجسام المضادة باستخدام تحليل يسمى مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA). هذه الطريقة موثوقة، وهي دقيقة نسبياً وشديدة الحساسية، وتبلغ هذه النسب أكثر من 99.5%. يقدم سوق الأدوية عددًا من مجموعات الاختبار التشخيصي لـ ELISA: CombiBest HIV، Anti-HIV 1 2، CombiBest anti-HIV، CombiBest anti-HIV 1 2، CombiBest anti-HIV 1 2 d 0172. تنتمي أنظمة الاختبار هذه إلى المجموعة الثالثة جيل. عيب هذه الكواشف هو أنها لا تكتشف المرض مبكرًا دائمًا. الشخص هو بالفعل حامل للفيروس، ومن المحتمل أن يشكل خطرا على الشركاء، ولكن الأجسام المضادة ليست موجودة بعد في الدم.

تم تجهيز الأطقم بشكل أساسي بعدد من الاختبارات لإجراء 12*8 أو 192 اختبارًا لمكافحة فيروس نقص المناعة البشرية. لا ينصح باستخدامها بنفسك. ويشير وصف الأدوية إلى أن غرضها الرئيسي هو اكتشاف كمية الأجسام المضادة لكلا النوعين من مرض الإيدز. وأيضا تحديد الأجسام المضادة لجميع فئات مرض الإيدز. إذا لم تكن هناك أجسام مضادة، فهذا يعني أنه لم يتم تشخيص المرض.

الجيل الرابع من الاختبارات "يرى"، بالإضافة إلى الأجسام المضادة، مستضدات الإيدز، وهي قادرة على اكتشاف العدوى في وقت أبكر من طرق الجيل الثالث. للمقارنة: مستضد فيروس نقص المناعة البشرية موجود في الدم بدءًا من اليوم الخامس، وتظهر الأجسام المضادة الأولى في موعد لا يتجاوز شهرًا. ينتمي CombiBest فيروس نقص المناعة البشرية 1، 2 AG/AT (المجموعة 1) وCombiBest فيروس نقص المناعة البشرية 1، 2 AG/AT (المجموعة 2) إلى اختبارات الجيل الرابع. باستخدام مجموعة من هذه الكواشف، يتم الكشف عن الأجسام المضادة للنوع 1 و 2 و p24 عن طريق فحص مصل الدم البشري أو البلازما. تستخدم العديد من البلدان اختبار ELISA من الجيل الرابع، والذي يُسمى أيضًا المستضد/الجسم المضاد، ويُختصر بـ AGAT.

يتم إجراء الاختبار بشكل مجهول.

يصبح تشخيص الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية في الوقت المناسب إجراءً مهمًا للغاية، نظرًا لأن البدء المبكر في العلاج يمكن أن يحدد إلى حد كبير تطور المرض وإطالة عمر المريض. في السنوات الأخيرة، تم إحراز تقدم كبير في تحديد هذا المرض الرهيب: يتم استبدال أنظمة الاختبار القديمة بأنظمة أكثر تقدما، وأصبحت طرق الفحص أكثر سهولة، وتتزايد دقتها بشكل كبير.

سنتحدث في هذه المقالة عن الطرق الحديثة لتشخيص الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية، والتي تفيد معرفتها في علاج هذه المشكلة في الوقت المناسب والحفاظ على نوعية حياة طبيعية للمريض.

طرق تشخيص فيروس نقص المناعة البشرية

في روسيا، يتم تنفيذ إجراء قياسي لتشخيص الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية، والذي يتضمن مستويين:

• نظام اختبار ELISA (تحليل الفحص)؛
• التطعيم المناعي (IB).

يمكن أيضًا استخدام طرق أخرى للتشخيص:

• اختبارات سريعة.

أنظمة اختبار إليسا

في المرحلة الأولى من التشخيص، يتم استخدام اختبار الفحص (ELISA) للكشف عن الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية، والذي يعتمد على بروتينات فيروس نقص المناعة البشرية التي تم إنشاؤها في المختبرات والتي تلتقط أجسامًا مضادة محددة يتم إنتاجها في الجسم استجابةً للعدوى. وبعد تفاعلها مع الكواشف (الإنزيمات) الخاصة بنظام الاختبار، يتغير لون المؤشر. بعد ذلك، تتم معالجة تغيرات اللون هذه باستخدام معدات خاصة تحدد نتيجة التحليل الذي يتم إجراؤه.

يمكن أن تظهر اختبارات ELISA هذه النتائج في غضون أسابيع قليلة بعد الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية. ولا يحدد هذا الاختبار وجود الفيروس، ولكنه يكشف عن إنتاج الأجسام المضادة له. في بعض الأحيان، يبدأ إنتاج الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية في جسم الإنسان بعد أسبوعين من الإصابة، ولكن يتم إنتاجها عند معظم الأشخاص في وقت لاحق، بعد 3-6 أسابيع.

هناك أربعة أجيال من اختبارات ELISA بحساسيات مختلفة. في السنوات الأخيرة، تم استخدام أنظمة اختبار الجيل الثالث والرابع بشكل متزايد، والتي تعتمد على الببتيدات الاصطناعية أو البروتينات المؤتلفة ولها خصوصية ودقة أكبر. ويمكن استخدامها لتشخيص الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية، ومراقبة انتشار فيروس نقص المناعة البشرية، وضمان السلامة عند اختبار الدم المتبرع به. تبلغ دقة أنظمة اختبار ELISA من الجيل الثالث والرابع 93-99% (الاختبارات المنتجة في أوروبا الغربية أكثر حساسية - 99%).

لإجراء اختبار ELISA، يتم أخذ 5 مل من الدم من وريد المريض. يجب أن تمر 8 ساعات على الأقل بين الوجبة الأخيرة والتحليل (عادة ما يتم إجراؤه في الصباح على معدة فارغة). يوصى بإجراء مثل هذا الاختبار في موعد لا يتجاوز 3 أسابيع بعد الإصابة المشتبه بها (على سبيل المثال، بعد الاتصال الجنسي غير المحمي مع شريك جنسي جديد).

يتم الحصول على نتائج اختبار ELISA خلال 2-10 أيام:

• النتيجة السلبية: تشير إلى عدم الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية ولا تتطلب الاتصال بأخصائي؛
• نتيجة سلبية كاذبة: يمكن ملاحظتها في المراحل المبكرة من العدوى (حتى 3 أسابيع)، في المراحل المتأخرة من مرض الإيدز مع القمع الشديد لجهاز المناعة ومع تحضير الدم بشكل غير صحيح؛
• نتيجة إيجابية كاذبة: يمكن ملاحظتها في بعض الأمراض وفي حالة تحضير الدم بشكل غير صحيح؛
• نتيجة إيجابية: تشير إلى الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية، وتتطلب إجراء فحص البكالوريا الدولية واتصال المريض بأخصائي في مركز الإيدز.

لماذا يمكن أن يعطي اختبار ELISA نتائج إيجابية كاذبة؟

يمكن أن تحدث نتائج اختبار ELISA الإيجابية الكاذبة بسبب معالجة الدم غير السليمة أو في المرضى الذين يعانون من الحالات والأمراض التالية:

• ورم نقيي متعدد؛
• الأمراض المعدية الناجمة عن فيروس ابشتاين بار.
• الدولة بعد؛
• أمراض المناعة الذاتية؛
• على خلفية الحمل.
• الحالة بعد التطعيم.

للأسباب الموصوفة أعلاه، قد تكون هناك أجسام مضادة غير محددة متفاعلة في الدم، ولم يتم إنتاجها عن طريق الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية.

في السنوات الأخيرة، انخفض تواتر النتائج الإيجابية الكاذبة بشكل ملحوظ بسبب استخدام أنظمة اختبار الجيل الثالث والرابع، والتي تحتوي على الببتيد الأكثر حساسية والبروتينات المؤتلفة (يتم تصنيعها باستخدام الهندسة الوراثية في المختبر). بعد إدخال اختبارات ELISA هذه، انخفض تكرار النتائج الإيجابية الكاذبة بشكل ملحوظ ويبلغ حوالي 0.02-0.5٪.

النتيجة الإيجابية الكاذبة لا تعني أن الشخص مصاب بفيروس نقص المناعة البشرية. في مثل هذه الحالات، توصي منظمة الصحة العالمية بإجراء اختبار ELISA آخر (بالضرورة الجيل الرابع).

يتم إرسال دم المريض إلى مختبر مرجعي أو تحكيمي يحمل علامة "تكرار" ويتم اختباره باستخدام نظام اختبار ELISA من الجيل الرابع. إذا كانت نتيجة التحليل الجديد سلبية، فإن النتيجة الأولى تعتبر خاطئة (إيجابية كاذبة) ولا يتم تنفيذ IS. إذا كانت النتيجة إيجابية أو مشكوك فيها خلال الاختبار الثاني، فيجب أن يخضع المريض للـ IB بعد 4-6 أسابيع لتأكيد أو دحض الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية.

النشاف المناعي

لا يمكن إجراء تشخيص نهائي للإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية إلا بعد الحصول على نتيجة إيجابية للتطعيم المناعي (IB). لتنفيذها، يتم استخدام شريط النيتروسليلوز، الذي يتم تطبيق البروتينات الفيروسية عليه.

يتم أخذ عينات الدم لـ IB من الوريد. بعد ذلك، يخضع لعملية معالجة خاصة ويتم فصل البروتينات الموجودة في مصله في هلام خاص وفقًا لشحنتها ووزنها الجزيئي (يتم إجراء المعالجة باستخدام معدات خاصة تحت تأثير المجال الكهربائي). يتم وضع شريط النيتروسليلوز على هلام مصل الدم ويتم إجراء النشاف ("النشاف") في غرفة خاصة. تتم معالجة الشريط وإذا كانت المواد المستخدمة تحتوي على أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية، فإنها ترتبط بالعصابات المستضدية الموجودة على البكالوريا الدولية وتظهر كخطوط.

يعتبر IB إيجابيًا إذا:

• وفقًا لمعايير مراكز مكافحة الأمراض والوقاية منها الأمريكية - يوجد خطين أو ثلاثة خطوط gp41، p24، gp120/gp160 على الشريط؛
• وفقًا لمعايير إدارة الغذاء والدواء الأمريكية، يحتوي الشريط على خطين p24، p31 وخط gp41 أو gp120/gp160.

في 99.9% من الحالات، تشير نتيجة البكالوريا الدولية الإيجابية إلى الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية.

إذا لم تكن هناك خطوط، فإن IB سلبي.

عند تحديد الخطوط مع gr160، gr120 و gr41، فإن البكالوريا الدولية مشكوك فيها. قد تحدث هذه النتيجة عندما:

• أمراض الأورام.
• حمل؛
• عمليات نقل الدم المتكررة.

في مثل هذه الحالات، يوصى بتكرار الدراسة باستخدام مجموعة أدوات من شركة أخرى. إذا ظلت النتيجة مشكوك فيها بعد البكالوريا الدولية الإضافية، فإن المراقبة ضرورية لمدة ستة أشهر (يتم إجراء البكالوريا الدولية كل 3 أشهر).

تفاعل البوليميراز المتسلسل

يمكن لاختبار PCR اكتشاف الحمض النووي الريبوزي (RNA) للفيروس. حساسيته عالية جدًا وتسمح باكتشاف الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية خلال 10 أيام بعد الإصابة. في بعض الحالات، قد يعطي تفاعل البوليميراز المتسلسل نتائج إيجابية كاذبة، نظرًا لأن حساسيته العالية قد تستجيب أيضًا للأجسام المضادة لعدوى أخرى.

هذه التقنية التشخيصية باهظة الثمن وتتطلب معدات خاصة ومتخصصين مؤهلين تأهيلاً عاليًا. هذه الأسباب لا تجعل من الممكن إجراء اختبارات جماعية للسكان.

يستخدم PCR في الحالات التالية:

• للكشف عن فيروس نقص المناعة البشرية عند الأطفال حديثي الولادة المولودين من أمهات مصابات بفيروس نقص المناعة البشرية؛
• للكشف عن فيروس نقص المناعة البشرية في "فترة النافذة" أو في حالة وجود عدوى بكتيرية مشكوك فيها؛
• للسيطرة على تركيز فيروس نقص المناعة البشرية في الدم.
• لدراسة دم المتبرعين.

لا يؤدي اختبار PCR وحده إلى تشخيص الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية، ولكن يتم إجراؤه كوسيلة تشخيصية إضافية لحل المواقف المثيرة للجدل.

طرق صريحة

واحدة من الابتكارات في تشخيص فيروس نقص المناعة البشرية هي الاختبارات السريعة، والتي يمكن تقييم نتائجها في غضون 10-15 دقيقة. يتم الحصول على النتائج الأكثر فعالية ودقة باستخدام الاختبارات المناعية بناءً على مبدأ التدفق الشعري. وهي عبارة عن شرائط خاصة يُوضع عليها الدم أو سوائل الاختبار الأخرى (اللعاب والبول). في حالة وجود أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية، بعد 10-15 دقيقة يظهر شريط ملون وشريط تحكم في الاختبار - نتيجة إيجابية. إذا كانت النتيجة سلبية، يظهر شريط التحكم فقط.

كما هو الحال مع اختبارات ELISA، يجب تأكيد نتائج الاختبارات السريعة عن طريق تحليل IB. فقط بعد ذلك يمكن تشخيص الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية.

تتوفر مجموعات اختبار منزلية سريعة. اختبار OraSure Technologies1 (الولايات المتحدة الأمريكية) معتمد من إدارة الغذاء والدواء الأمريكية (FDA)، وهو متاح بدون وصفة طبية ويمكن استخدامه للكشف عن فيروس نقص المناعة البشرية (HIV). بعد الاختبار، إذا كانت النتيجة إيجابية، ينصح المريض بالخضوع للفحص في مركز متخصص للتأكد من التشخيص.

اختبارات أخرى للاستخدام المنزلي لم تتم الموافقة عليها بعد من قبل إدارة الغذاء والدواء الأمريكية (FDA) وقد تكون نتائجها مشكوك فيها للغاية.

على الرغم من أن الاختبارات السريعة أقل دقة من اختبارات ELISA من الجيل الرابع، إلا أنها تستخدم على نطاق واسع لإجراء اختبارات إضافية للسكان.

يمكنك إجراء اختبارات للكشف عن الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية في أي عيادة أو مستشفى المنطقة المركزي أو مراكز الإيدز المتخصصة. يتم تنفيذها على أراضي روسيا بسرية تامة أو بشكل مجهول. يمكن لكل مريض أن يتوقع الحصول على استشارة طبية أو نفسية قبل الاختبار أو بعده. سيتعين عليك فقط دفع تكاليف اختبارات فيروس نقص المناعة البشرية في المؤسسات الطبية التجارية، بينما يتم إجراؤها مجانًا في العيادات والمستشفيات العامة.

اقرأ عن الطرق التي يمكن أن تصاب بها بفيروس نقص المناعة البشرية وما هي الخرافات الموجودة حول احتمالات الإصابة بالعدوى.

وصف

تحضير

دواعي الإستعمال

تفسير النتائج

وصف

طريقة التحديد مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA).

المواد قيد الدراسةمصل الدم

زيارة منزلية متاحة

الكشف المشترك عن الأجسام المضادة لأنواع فيروس نقص المناعة البشرية 1 و 2 ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية p24، اختبار نوعي.

انتباه. وفي حالة وجود ردود فعل إيجابية ومشكوك فيها، يمكن تمديد فترة إصدار النتائج إلى 10 أيام عمل. ينتمي فيروس نقص المناعة البشرية (فيروس نقص المناعة البشرية)، الذي يسبب مرض الإيدز (متلازمة نقص المناعة المكتسب)، إلى عائلة الفيروسات القهقرية. وينتقل من شخص لآخر عن طريق استخدام الإبر والمحاقن الملوثة لإعطاء المخدرات عن طريق الوريد أو الإجراءات العلاجية، أثناء الاتصال الجنسي، سواء بين الجنسين أو المثليين. يمكن أن يحدث انتقال الفيروس من خلال نقل الدم المصاب ومنتجاته، أو التبرع بالأعضاء أو السائل المنوي، وبين العاملين في المجال الطبي - من خلال الإصابة بالإبر أو الأدوات الملوثة. من الممكن الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية من خلال انتقال العدوى من الأم المصابة إلى الطفل (الطريق العمودي)، على الرغم من أن طرق الوقاية الحديثة باستخدام العلاج المضاد للفيروسات القهقرية، إذا تم اتباع جميع التوصيات، يمكن أن تقلل من هذا الخطر إلى الحد الأدنى.

تشتمل عملية تفاعل الفيروس مع الخلية على عدد من المراحل: ربط الفيروس بالخلية، تحريره من الغلاف، اختراق السيتوبلازم، تخليق الحمض النووي باستخدام الحمض النووي الريبي الفيروسي، دمج الحمض النووي الفيروسي في جينوم الخلية. الخلية المضيفة. بعد ذلك تبدأ المرحلة الكامنة من العدوى. في هذه الحالة، يمكن أن يوجد الحمض النووي الفيروسي لبعض الوقت دون أن يظهر نشاطًا ودون التأثير على حياة الخلية المضيفة. وبينما لا يوجد تعبير عن البروتينات الفيروسية، لا توجد استجابة مناعية للفيروس. تظهر الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية، التي تميز الاستجابة المناعية للجسم، بعد تنشيط الحمض النووي الفيروسي وبدء التكاثر النشط للفيروس. تعتمد مدة الفترة الكامنة على عدد من العوامل، بما في ذلك الخصائص الجينية الفردية للكائن الحي.

قد تظهر الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية ابتداءً من الأسبوع الثاني بعد الإصابة؛ يزداد محتواها خلال 2-4 أسابيع ويبقى لسنوات عديدة. في 90-95٪ من المصابين تظهر في الأشهر الثلاثة الأولى بعد الإصابة، في 5-9٪ - في الفترة من ثلاثة إلى ستة أشهر، في 0.5-1٪ - في وقت لاحق.

في الأسابيع الأولى من الإصابة، حتى قبل ظهور الأجسام المضادة للفيروس (أي قبل الانقلاب المصلي)، يمكن اكتشاف وجود مستضدات فيروس نقص المناعة البشرية، بما في ذلك بروتين القفيصة p24، في عينات المصل أو البلازما. وفي وقت لاحق، بعد التحويل المصلي، عادة ما يصبح غير قابل للاكتشاف.

تعمل أنظمة الاختبار المجمعة من الجيل الرابع، والتي تتضمن اختبار فيروس نقص المناعة البشرية Ag/Ab Combo (مهندس معماري، أبوت)، على اكتشاف الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية من النوعين 1 و2 ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية p24، مما يسمح بالكشف المبكر عن العدوى. تشمل الخصائص الخاصة لاختبار الفحص المستخدم في مختبر INVITRO للكشف عن الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية الخصوصية العالية للدراسة (> 99.5٪)؛ يكون الاختبار حساسًا بنسبة 100% للأجسام المضادة المميزة لفترة الانقلاب المصلي، وتبلغ حساسية الاختبار للمستضد p24 حوالي 18 بيكوغرام/مل.

يتم تنظيم إجراء الفحص المختبري لفيروس نقص المناعة البشرية بشكل صارم بأمر من وزارة الصحة في الاتحاد الروسي ويتضمن مرحلة دراسة الفحص (الاختيار) لوجود الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية باستخدام مقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) الطرق المعتمدة للاستخدام، ومرحلة التحقق (التأكيد) دراسة أكثر تفصيلاً في مختبر مركز الإيدز بالمدينة. تجدر الإشارة إلى أنه حتى أفضل أنظمة فحص ELISA لا تضمن خصوصية بنسبة 100%، أي أن هناك بعض احتمالية الحصول على نتائج غير محددة وإيجابية كاذبة مرتبطة بخصائص مصل دم المريض. لذلك، قد لا يتم تأكيد النتيجة الإيجابية لفحص ELISA في الاختبارات التأكيدية، وبعدها سيتم إعطاء المريض نتيجة سلبية أو غير محددة. إذا كانت نتيجة الدراسة التأكيدية غير مؤكدة، فيجب تكرار الاختبار مع مرور الوقت بعد 2-3 أسابيع.

التشخيص المختبري لعدوى فيروس نقص المناعة البشرية لدى الأطفال المولودين لأمهات مصابات بفيروس نقص المناعة البشرية له خصائصه الخاصة. يمكن أن تنتشر الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية (فئة IgG) في دم الأم لمدة تصل إلى 18 شهرًا من لحظة الولادة. إن غياب الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية عند الأطفال حديثي الولادة لا يعني أن الفيروس لم يخترق حاجز المشيمة. ويخضع أطفال الأمهات المصابات بفيروس نقص المناعة البشرية للفحص التشخيصي المختبري في غضون 36 شهرا بعد الولادة.

تحضير

لا يتطلب إعداد خاص. يوصى بأخذ الدم في موعد لا يتجاوز 4 ساعات بعد الوجبة الأخيرة. ويمكن الاطلاع على توصيات عامة للتحضير للبحث. يُنصح بإجراء اختبار للكشف عن المستضد والأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية في موعد لا يتجاوز أسبوعين بعد الإصابة المحتملة، مع تكرار الاختبار بعد ثلاثة وستة أسابيع في حالة ظهور نتيجة سلبية. يتم ملء طلبات البحث في INVITRO LLC باستخدام جواز السفر أو وثيقة تحل محله (بطاقة الهجرة، التسجيل المؤقت في مكان الإقامة، هوية العسكريين، شهادة من مكتب الجوازات في حالة فقدان جواز السفر، بطاقة التسجيل من الفندق). يجب أن تحتوي الوثيقة المقدمة بالضرورة على معلومات حول التسجيل المؤقت أو الدائم في الاتحاد الروسي وصورة فوتوغرافية. في حالة عدم وجود جواز سفر (وثيقة تحل محله)، يحق للمريض ملء طلب مجهول للتبرع بالمواد الحيوية. أثناء الفحص المجهول، يتم استلام طلب وعينة من المواد الحيوية من العميل، ويتم تخصيص رقم معروف فقط للمريض والطاقم الطبي الذي قدم الطلب. ! لا يمكن تقديم نتائج الدراسات التي يتم إجراؤها بشكل مجهول للعلاج في المستشفى والفحوصات المهنية ولا تخضع للتسجيل في ORUIB.

مؤشرات للاستخدام

• تضخم العقد الليمفاوية في أكثر من منطقتين.
• قلة الكريات البيض مع قلة اللمفاويات.
• تعرق ليلي.
• فقدان الوزن المفاجئ لسبب غير معروف.
• الإسهال لأكثر من ثلاثة أسابيع لسبب غير معروف.
• حمى مجهولة السبب.
• التخطيط للحمل.
• التحضير قبل الجراحة، والاستشفاء.
• الكشف عن الالتهابات التالية أو مجموعاتها: السل، داء المقوسات الظاهر، عدوى فيروس الهربس المتكررة في كثير من الأحيان، داء المبيضات في الأعضاء الداخلية، الألم العصبي النطاقي المتكرر، الالتهاب الرئوي الناجم عن الميكوبلازما، المكورات الرئوية أو الفيلقية.
• ساركوما كابوسي في سن مبكرة.
• اتصالات جنسية عارضة.

تفسير النتائج

يحتوي تفسير نتائج البحث على معلومات للطبيب المعالج وليس تشخيصًا. لا ينبغي استخدام المعلومات الواردة في هذا القسم للتشخيص الذاتي أو العلاج الذاتي. يقوم الطبيب بإجراء تشخيص دقيق باستخدام نتائج هذا الفحص والمعلومات الضرورية من مصادر أخرى: التاريخ الطبي، نتائج الفحوصات الأخرى، إلخ.

وحدات القياس في المختبر المستقل INVITRO: اختبار نوعي. شكل عرض النتائج: في حالة عدم وجود أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية 1 و2 ومستضد p24، تكون الإجابة "سلبية". إذا تم اكتشاف أجسام مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية أو مستضد في اختبار الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم، يتم إرسال عينة مصل للتأكيد عن طريق التطعيم المناعي إلى مركز الإيدز بالمدينة، والذي يتحقق من النتائج الإيجابية وغير المحددة.

نتيجة ايجابية:

1. عدوى فيروس نقص المناعة البشرية؛
2. نتيجة إيجابية كاذبة تتطلب دراسات متكررة أو إضافية *)؛
3. الدراسة ليست مفيدة للأطفال دون سن 18 شهرًا المولودين من أمهات مصابات بفيروس نقص المناعة البشرية.

* خصوصية نظام اختبار الفحص، الأجسام المضادة لفيروس نقص المناعة البشرية 1 و2 ومستضد فيروس نقص المناعة البشرية 1 و2 (HIV Ag/Ab Combo, Abbott)، وفقًا للتقديرات المقدمة من الشركة المصنعة للكاشف، تبلغ حوالي 99.6% في كل من عامة السكان والمجتمع مجموعة المرضى الذين يعانون من تداخلات محتملة (التهابات HBV، HCV، Rubella، HAV، EBV، HNLV-I، HTLV-II، E. coli، Chl. trach.، وما إلى ذلك، أمراض المناعة الذاتية (بما في ذلك التهاب المفاصل الروماتويدي، ووجود الأجسام المضادة للنواة) ، الحمل، ارتفاع مستويات IgG، IgM، الاعتلالات الغامائية وحيدة النسيلة، غسيل الكلى، عمليات نقل الدم المتعددة).