אנטי HIV 1 2 מה. שיטות מודרניות לאבחון זיהום ב-HIV

בעלי פטנט RU 2283497:

ההמצאה מתייחסת לתחום הביוטכנולוגיה והרפואה. מערכת בדיקת הסובבים החיסוניים המקושרים לאנזים לזיהוי ספקטרום הנוגדנים לנגיף הכשל החיסוני האנושי (HIV) מהסוג הראשון והשני, הסוג הראשון של קבוצה O וזיהוי האנטיגן לנגיף הכשל החיסוני האנושי מהסוג הראשון p24 כולל חומר חיסוני המבוסס על אנטיגנים של וירוס כשל חיסוני אנושי המייצגים gp41 (env HIV-1 ו-HIV-2 group O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV-2), נוגדנים לאנטיגן HIV 1 p24, וריאגנטים לזיהוי, האנטיגנים לעיל ל-HIV ונוגדני HIV הנספגים בבארות שונות של צלחות לבדיקת אימונוסורבנט מקושר אנזים, וצלחות מתקפלות או לא ניתנות להפרדה של פוליסטירן עם 96 בארות משמשות לספיחה. ההמצאה מספקת רגישות מוגברת, פישוט וביטול סובייקטיביות בהערכת תוצאות. 1 משכורת קבצים, 10 טבלאות, 1 ill.

ההמצאה מתייחסת לתחום הביוטכנולוגיה והרפואה. שימוש: זיהוי מובחן של כל סוגי הנוגדנים הספציפיים לחלבוני נגיף הכשל החיסוני האנושי 1 ו-2, HIV 1 קבוצת O ו-HIV 1 p24 אנטיגן.

מהות: השגת מערכת בדיקת אימונוסורבנט המקושרת לאנזים לזיהוי ספקטרום הנוגדנים מכל הקבוצות לחלבונים בודדים ול-HIV 1 ו-2, אנטיגן HIV 1 קבוצת O ו-HIV 1 p24 בסרום הדם (פלזמה), אימונוגלובולינים ומוצרי דם אנושיים ב על מנת לזהות את ספקטרום הנוגדנים ל-HIV 1 ו-2, קבוצת HIV 1, זיהוי של אנטיגן HIV 1 p24 ואישור של תוצאות סקר חיוביות או מפוקפקות עבור נוגדנים ל-HIV 1 ו-2, אנטיגן HIV 1 מקבוצת O ו-HIV 1 p24.

תיאור ההמצאה

אבחון מעבדה של זיהום ב-HIV מבוסס על שלושה תחומים: א) אינדיקציה ל-HIV ומרכיביו; ב) איתור נוגדנים ל-HIV; ג) קביעת שינויים במערכת החיסון. בין שיטות האבחון המעבדתיות הקיימות, הנפוצות ביותר הן סרולוגיות - זיהוי נוגדנים לאנטיגנים של וירוסים.

כדי לזהות נוגדנים בהידבקות ב-HIV, נעשה שימוש בעיקר בבדיקת אימונוסורבנט מקושרת אנזים (ELISA) ואימונובלוטינג (IB). ELISA מבוססת על אימוביליזציה של אנטיגנים נגיפיים על צלחות שאליהן נקשרים הנוגדנים של המטופל, והתסביך של אנטיגן-נוגדנים מתגלה באמצעות נוגדנים חד שבטיים של עכבר מצומדים חזרת פרוקסידאז לאימונוגלובולינים אנושיים G ו-M. השיטה די ספציפית ורגישה ומאפשרת זיהוי של נוגדנים ספציפיים לנגיף ב-95% מהחולים. 5% הנותרים מהמקרים מתרחשים בשלבים המוקדמים של ההדבקה, כאשר עדיין יש מעט נוגדנים בסרום הדם, או בשלבים הסופניים של המחלה, כאשר הגוף אינו מסוגל יותר לסנתז נוגדנים עקב דלדול חד של מערכת החיסון. אפשריות גם תוצאות ELISA חיוביות כוזבות, בעיקר בחולים עם מחלות אוטואימוניות ואונקולוגיות, וכן במקרים של זיהום שנגרם על ידי נגיף אשפטין-בר. במקרה זה, תגובה צולבת של נוגדנים לגורם שגרוני, לנגיף אפשטיין-בר או לקובעים אנטיגנים הדומים לחלבונים של תסביך ההיסטו-תאימות העיקריים מסוג 1 ו-2 (HLA-4 ו-DQW3) ובעלי יכולת להיקשר לאנטיגנים של HIV מתרחשת. תוצאות חיוביות כוזבות שכיחות בנשים בהריון ובקשישים. המוליזה, ליפמיה וזיהום חיידקי בסרום עלולים גם הם לגרום לתוצאות לא מהימנות.

בהקשר זה, הוצעו והשתמשו במספר שיטות לבדיקת הספציפיות של תוצאות גילוי נוגדנים. מבין השיטות הללו, התגובה הנפוצה ביותר היא "סיכה חיסונית" בשינוי "כתם מערבי". מהות השיטה היא כדלקמן: בשלב הראשון, חלבוני HIV מופרדים לפי משקל מולקולרי באמצעות אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד. לאחר מכן מתבצעת העברה אלקטרופורטית מג'ל הפוליאקרילאמיד אל פני השטח של קרום הניטרוצלולוזה. אנטיגנים המועברים בדרך זו מזוהים על הממברנה באמצעות ניתוח עקיף: הממברנה מודגרת עם חומר הבדיקה; הנוגדנים הכלולים נקשרים לאנטיגנים של HIV המועברים לממברנת ניטרוצלולוזה, ואז מודגרות רצועות הממברנה עם המצומד; כאשר נוצר קומפלקס אנטיגן-נוגדנים, הצמוד נצמד אליו, לאחר שטיפה מהמצומד והדגירה עם המצע מתרחשת צביעה באותם אזורים של ניטרוצלולוזה בהם התרחשה היווצרות קומפלקס אנטיגן-נוגדן-מצומד. הציור מציג דוגמאות לתוצאות חיוביות, חלשות חיוביות ושליליות של אימונובלוט.

נוגדנים לחלבונים הבאים (p) ולגליקופרוטאינים (gp) מתגלים בסרום של אנשים שנדבקו ב-HIV-1 וב-HIV-2: טבלה א'.

טבלה ב' מציגה את הקריטריונים להערכת התוצאות של אימונובלוטינג שהומלץ על ידי WHO והמרכז הרוסי למניעה ובקרה של איידס.

בהתבסס על קריטריונים של WHO, סמים שבהם מתגלים נוגדנים לכל שני חלבוני מעטפת HIV-1 בשיטת IB נחשבים חיוביים. אם יש תגובה רק עם אחד מחלבוני המעטפת (gp160, gp120, gp41) בשילוב עם או בלי תגובה עם חלבונים אחרים, התוצאה נחשבת בספק. על פי המרכז המדעי והמתודולוגי הפדרלי של משרד הבריאות של הפדרציה הרוסית למניעה ובקרה של איידס, ניתן לפרש סרה כחיובית גם בנוכחות נוגדנים לחלבון ממברנה אחד בלבד.

גילוי נוגדנים לאנטיגן p24 עשוי להעיד על תקופת תחילת המרת סרוק, שכן נוגדנים לחלבון זה מופיעים ראשונים. תגובות חיוביות עם חלבוני gag ו-pol ללא נוכחות של תגובה עם חלבוני env עשויות לשקף את השלב של המרה סרוקית מוקדמת וגם להצביע על נוכחות של זיהום HIV-2 או תגובה לא ספציפית.

לשימוש בתגובת אימונובלוטינג כשיטה מומחית לאבחון HIV יש מספר חסרונות משמעותיים:

1. חוסר האפשרות לאשר את זיהוי ה-HIV p24 אנטיגן 1 במקרה של שימוש בבדיקות המאתרות בו-זמנית אנטיגן ונוגדנים ל-HIV, מה שהופך את זה לבלתי מתאים (ללא משמעות) להשתמש בבדיקות סקר לגילוי בו-זמנית של אנטיגן ונוגדנים ל-HIV ( צו של משרד הבריאות של הפדרציה הרוסית מס' 292 מיום 30 ביולי 2001: "כדי לבדוק תורמים בתחנות עירוי דם, יש צורך להשתמש במערכות בדיקה המאתרות בו זמנית אנטיגן ונוגדנים ל-HIV").

2. איתור נוגדנים מקבוצת IgG בלבד. אי אפשר לאשר באופן מלא את התוצאות החיוביות שהתקבלו באמצעות בדיקות דור 3 ו-4 (זיהוי נוגדני IgG ו-IgM).

3. סובייקטיביות בפרשנות הערכת הבדיקה, במיוחד במקרים של תוצאות "מוטלות בספק" ו"לא ודאות" ובשלבים ראשוניים של המרה סרוקית (הרצועות שזוהו על ממברנות ניטרוצלולוזה במקרים אלו אינן ברורות, בקושי נראות לעין בלתי מזוינת, ולעיתים קרובות יש מחלוקת כאשר מוערכים על ידי אנשים שונים).

4. חוסר אפשרות להערכה כמותית אוטומטית של תוצאות הניתוח.

5. רגישות נמוכה יותר בהשוואה ל-ELISA.

6. חיי מדף קצרים (במהלך האחסון, רצועות של קרום ניטרוצלולוזה דוהות ואינן יכולות להוות אישור אובייקטיבי לגילוי או אי גילוי של HIV במקרים שנויים במחלוקת).

7. קושי בהגדרת התגובה ובאחסון (רצועות קרום ניטרוצלולוזה שבריריות מאוד ולעיתים נשברות).

8. עלות גבוהה של ערכות אבטחת מידע.

מגיב ידוע הוא ערכה לקביעה בו-זמנית של אנטיגנים ונוגדנים לאותו פתוגן, כולל HIV (DE 4236189 F1, 04/28/1994). עם זאת, מערכת בדיקות המאפשרת לאבחן זיהום ב-HIV בשלבים שונים אינה נחשפת.

מטרת ההמצאה הנוכחית היא להשיג מערכת בדיקה שבאמצעותה ניתן לאשר תוצאות חיוביות או מפוקפקות של בדיקות סקר לאיתור נוגדנים ל-HIV 1 ו-2, HIV 1 group O ו-HIV 1 p24 אנטיגן בעת ​​שימוש בבדיקות לגילוי בו-זמנית של אנטיגנים ונוגדנים.

הפתרון הטכני המוצע מושג על ידי מערכת בדיקת אימונוסורבנט מקושרת אנזים לזיהוי ספקטרום הנוגדנים לנגיף הכשל החיסוני האנושי (HIV) מהסוג הראשון והשני, הסוג הראשון של קבוצה O וזיהוי האנטיגן p24 לחסר החיסוני האנושי. וירוס מהסוג הראשון p24, המאופיין בכך שהוא כולל חומר חיסוני המבוסס על אנטיגנים וירוס כשל חיסוני אנושי, המייצג gp41 (env HIV-1 ו-HIV-2 group O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol) , gp36 (env HIV-2), נוגדנים לאנטיגן HIV 1 p24, וריאגנטים לזיהוי, בעוד שאנטיגנים של HIV ונוגדני HIV הנזכרים לעיל נספגים בארות שונות של לוחות בדיקה אימונוסורבנטיים המקושרים לאנזים.

בנוסף, צלחות מתקפלות או בלתי ניתנות לפירוק של פוליסטירן עם 96 בארים לבדיקת אנזים חיסונית משמשות לספיחה.

התוצאה הטכנית שהושגה על ידי ההמצאה הנוכחית היא האפשרות לאשר תוצאות חיוביות לנוגדנים ל-HIV 1 ו-2, אנטיגן HIV 1 קבוצת O ו-HIV 1 p24, רגישות גבוהה, אפשרות לפירוש אוטומטי של התוצאות, מה שמבטל את הסובייקטיביות של הערכה, קלות ביצוע הבדיקה, פחות מאשר עם ערכות אבטחת מידע קיימות בעלות.

פתרון טכני זה שונה מהידועים:

1. שימוש בצלחת לתגובות אימונולוגיות כנשא מוצק.

2. שימוש בו-זמני בנוגדנים ל-HIV p 24 ובסט של אנטיגנים ל-HIV כחומר ספיגה.

ההמצאה מומחשת על ידי הדוגמה הבאה.

העקרונות הפעילים של מערכת הבדיקה שפותחה "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + AG p24 HIV 1" הם:

אימונוסורבנט - אנטיגנים רקומביננטיים הדומים לחלבונים המבניים של HIV-1: gp41 (env HIV-1 ו-HIV 1 group O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), HIV-2: gp36 (env) ונוגדנים חד שבטיים של עכברים לאנטיגן HIV 1(p24), הנספגים בנפרד על רצועות של צלחת מתקפלת מפוליסטירן.

כדי להכין שימוש בחומר חיסוני:

1. HIV-1 gp41 הוא חלבון המיוצר על ידי זן E. Coli מס' AHIV 103.

2. HIV-1 gp120 הוא חלבון המיוצר על ידי זן E. Coli מס' AHIV 109.

3. HIV-1 p24 הוא חלבון המיוצר על ידי זן E. Coli מס' AHIV 105.

4. HIV-1 p31 הוא חלבון המיוצר על ידי זן E. Coli מס' AHIV 108.

5. HIV-2 p36 הוא חלבון המיוצר על ידי זן E. Coli מס' AHIV 106.

Conjugate 1, ליאופיל או נוזלי, הוא נוגדן חד שבטי של עכבר לאנטיגן HIV1 p24 המצומד עם ביוטין.

1. Conjugate 2, lyophilized או נוזלי, הוא תערובת של אנטיגנים רקומביננטיים הדומים לחלבונים המבניים של HIV-1: gp41 (env HIV-1 ו-HIV 1 group O), gp120 (env), p24 (gag), p31( po1); HIV-2: gp36 (env), מצומד לביוטין;

2. מצומדים 3, 4 - lyophilized או נוזלי - streptavidin, שכותרתו עם פרוקסידאז חזרת;

במהלך מחקרים ראשוניים, נבחר תכנון מערכת הבדיקה, פותחה הטכנולוגיה להכנת מרכיביה ואופטימיזציה של התנאים לביצוע תגובת האנזים האימונואסאי.

בעת ביצוע ELISA במערכת הבדיקה "DS - ELISA - ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + Ag p24 HIV 1", מתווספים 25 μl של conjugate-1 לבארות הצלחת עם נוגדנים נספגים ל-p24, ו-25 μl של conjugate-1 מתווסף לבארות עם אנטיגנים נספגים. 25 µl של conjugate-2. ערכת התגובה מוצגת להלן. לאחר מכן, 25 μl של דגימת הבדיקה מתווספים לכל באר. במקביל, בבארות עם אנטיגנים הצבע משתנה מכתום לורוד, ובבאר עם נוגדנים - מירוק לאפור. התערובת מודגרת במשך 45 דקות ב-37 מעלות צלזיוס על שייקר (או שעה אחת ב-37 מעלות צלזיוס בתרמוסטט). לאחר מכן, מבלי לשטוף, הוסף 50 μl של conjugate-3 לתוך בארות הצלחת לקביעת אנטיגן p24, ו-50 μl של conjugate-4 לתוך בארות לקביעת נוגדנים. לאחר דגירה של 20 דקות ב-37 מעלות צלזיוס על שייקר (או 30 דקות ב-37 מעלות בתרמוסטט), הצלחת נשטפת ומפותחת עם תערובת מצע. זמן תגובה כולל שעה 25 דקות (או שעה 50 דקות). האנטיגן p24 הקיים בדגימת הבדיקה נקשר לנוגדנים חד שבטיים ל-p24, ונוגדנים ספציפיים יוצרים קומפלקס עם אנטיגנים רקומביננטיים על הצלחת. הקומפלקס החיסוני המתקבל של אנטי-p24 עם p24 מזוהה עם מצומדים אנטי-p24-ביוטין, לאחר מכן עם סטרפטאבידין-פרוקסידאז, והקומפלקסים החיסוניים של Ag-HIV עם At-HIV מתגלים עם מצומדים של Ag-biotin, ולאחר מכן עם סטרפטאבידין- פרוקסידאז.

תכנית להגדרת התגובה.

התוצאות נלקחות בחשבון מבחינה ספקטרופוטומטרית בשני אורכי גל: 450/620-680 ננומטר כשהמכשיר מוגדר "באוויר". הבה ניקח בחשבון את התוצאות באורך גל אחד של 450 ננומטר.

תוצאות הניתוח נלקחות בחשבון אם הערכים הממוצעים של צפיפות אופטית (OD) בבארות עם K- הם לא יותר מ-0.2, בבארות עם K+ - לא פחות מ-1.0. ביקורת OP. מחושב לפי הנוסחה:

ביקורת OP. gp41 = ממוצע מַשְׁמָעוּת OP K-(gp41)+0.15

ביקורת OP. gp120 = ממוצע מַשְׁמָעוּת OP K-(gp120)+0.15

ביקורת OP. p24 = ממוצע מַשְׁמָעוּת OP K-(р24)+0.15

ביקורת OP. p31 = ממוצע מַשְׁמָעוּת OP K-(р31)+0.15

ביקורת OP. gp36 = ממוצע מַשְׁמָעוּת OP K-(gp36)+0.15

ביקורת OP. Ag p24 = ממוצע מַשְׁמָעוּת OP k- (Ag p24)+0.04

כאשר 0.15 ו-0.04 הם מקדמים שנקבעו על ידי עיבוד סטטיסטי אצל היצרן. במהלך הפיתוח של מערכת הבדיקה נעשה שימוש בשיטות הבאות:

1. דגימות סרום דם מתורמים בריאים (n=610).

2. דגימות סרום דם מחולים עם מחלות זיהומיות שונות שאינן קשורות ל-HIV (זיהומים חריפים בדרכי הנשימה, דלקת ריאות, דלקת שקדים, זיהומים הרפטיים וציטומגלווירוסים, עגבת, כלמידיה, צהבת נגיפית A, B ו-C (n=224)).

3. דגימות סרום דם מחולים במחלות שונות שאינן זיהומיות - טראומה, מחלות של מערכת הלב וכלי הדם, אונקולוגיה (n=35).

4. דגימות סרום דם מנשים בהריון (n=40).

5. דגימות סרום דם סרו-חיוביות ב-ELISA ואושרו באימונובלוט (n=428).

6. דגימות נסיוב עם תוצאה חיובית שהתקבלה במערכות בדיקת אנזימים חימוניים לקביעה בו-זמנית של נוגדני HIV 1.2 ואנטיגן p24, ותוצאה בלתי מוגדרת על ידי אימונובלוט (n=123).

7. פאנל פנימי של סרה המכילים ולא מכילים נוגדנים ל-HIV 1,2, נבדק על מערכות בדיקת אנזימים ואימונובלוט רשום על ידי משרד הבריאות של הפדרציה הרוסית (n=21).

8. תקן "HIV 1 ANTIGEN STANDARD", "BIO RAD", צרפת, חתול. מס' 72217, שהוא אנטיגן המתקבל מ-lysate ויראלי.

9. תקן פנימי של המיזם. דגימה המכילה אנטיגן p 24 בריכוז של 200 pg/ml, המתקבלת מהליזאט הנגיפי ומטופחת לפי חברת "HIV 1 ANTIGEN STANDARD" "BIO RAD", צרפת, קט. מס' 72217.

10. פאנל סטנדרטי של סרה המכילים נוגדנים לנגיף כשל חיסוני אנושי מסוג 1 (HIV 1) - OSO 42-28-212-93-02P, "איגוד רפואי וביולוגי", נובוסיבירסק.

11. פאנל סטנדרטי של סרה המכילים נוגדנים לנגיף כשל חיסוני אנושי מסוג 2 (HIV 2) - OSO-42-28-216-02P, "איגוד רפואי וביולוגי", נובוסיבירסק.

12. פאנל סרמים סטנדרטי שאינם מכילים נוגדנים לנגיף כשל חיסוני אנושי מסוג 1 ו-2 (HIV 1, 2) - OSO-42-28-214-94-02P, "איגוד רפואי וביולוגי", נובוסיבירסק.

הרגישות של מערכת הבדיקה לאיתור האנטיגן p24 הוערכה באמצעות "HIV I ANTIGEN STANDARD", "BIO RAD", והתקן הפנימי של הארגון. באמצעות התקן הפנימי, הוכנו 4 דילולים סדרתיים פי 2 מ-40 pg/ml ל-5 pg/ml עם פלזמה רגילה של תורם, ללא נוגדני HIV 1, 2, כמדלל. הכמות הקטנה ביותר של אנטיגן ניתן לזיהוי נלקחה כקריטריון הרגישות. הנתונים שהתקבלו מוצגים בטבלה 1.

כדי להעריך את הרגישות של מערכת הבדיקה באיתור נוגדנים ספציפיים, נעשה שימוש בפאנלים סטנדרטיים של דגימות המכילות נוגדנים לנגיף הכשל החיסוני האנושי (HIV 1, 2) (OSO 42-28-212-93-02P p.012, OSO 42- 28-216- 02P (HIV 2) p.003).

הנתונים שהתקבלו מוצגים בטבלאות 3, 4.

יעילות האבחון של מערכת הבדיקה "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24 HIV 1" הושווה למערכות הבדיקה "Jenskrin-HIV-Ag/At" (Bio-Rad), "DIA-HIV 1/2" (Diaprof-Med), "Vironostika HIV Uni-form II Ag/At" (Biomerioux), "Recombinant-HIV1,2 DSM" (MBS), "Amercard Anti-HIV-1,2 K" (Amercard ), "HIV-1, HIV-2-ELISA-Avicenna" (Avicenna). לצורך כך נבדקו דגימות סרום מהפאנל הפנימי בכל הבדיקות שצוינו. התוצאות המוצגות בטבלה 5 מצביעות על יעילות האבחון הגבוהה של "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1".

מחקרי רגישות של מערכת הבדיקה "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" בוצעו גם עם סרחי דם מחולים שאושרו על ידי אימונובלוטינג כחיוביים ל-HIV. בסך הכל נבדקו 428 דגימות של סמים כאלה. הושגו מספר אפשרויות לאיתור נוגדנים לחלבוני HIV שונים ולאנטיגן p24. התוצאות מוצגות בטבלה 6.

בעת בדיקת דגימות חיוביות ל-HIV 1, 3% מהסרום הראו תגובה חיובית עם gp36 (HIV 2 env). OP/OPcrit. בדגימות אלו לא עלה על 2.0. הנתונים שלנו על תגובתיות צולבת של חלבוני הקליפה החיצונית של HIV 1 (gp41) ו-HIV 2 (gp36) עולים בקנה אחד עם נתוני הספרות.

פרשנות של תוצאות

ניתוח בדיקת סרמים חיוביים ל-HIV ודגימות מפאנלים סטנדרטיים ופנימיים ב-"DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24 HIV 1" אפשרו לנו לפתח קריטריונים לפירוש תוצאות בדיקה זו. קריטריונים מומלצים מופיעים בטבלה 7.

בהתבסס על קריטריונים אלה, כל הדגימות של סרום חיובי ל-HIV (n=428) נקבעו כחיוביות ב-"DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV1". מתוך 16 הדגימות של הפאנל הסטנדרטי המכילות נוגדנים ל-HIV 1, 14 נקבעו כחיוביות ו-2 נקבעו כבלתי מוגדרות. כל 8 הדגימות מהפאנל הסטנדרטי המכילות נוגדנים ל-HIV 2 נקבעו כחיוביות. מתוך 10 הדגימות של הפאנל הפנימי המכילה נוגדנים ל-HIV 1, 7 נקבעו כחיוביות ו-3 נקבעו כבלתי מוגדרות.

כמו כן, בוצעו מחקרי רגישות של מערכת הבדיקה "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" עם סרחי דם של חולים שקיבלו תוצאה חיובית במערכות בדיקת ספיגה חיסונית מקושרת אנזימים המזהות בו זמנית נוגדנים ו אנטיגן p24, ובלתי מוגדר באימונובלוט. בסך הכל נבדקו 123 דגימות כאלה. הנתונים מוצגים בטבלה 8.

בעת בדיקת סמים עם תוצאת אימונובלוט בלתי מוגדרת (n=123) ב-"DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1", 72 דגימות (58.5%) הראו תוצאה חיובית. מתוכם, 26 סמים (21.1%) היו חיוביים רק ל-p24, 20 (16.3%) - רק לנוגדנים, 16 (13%) - ל-p24 עם נוגדנים לאחד החלבונים, 10 (8.1%) - ב-p24 עם נוגדנים לשניים או יותר מהחלבונים. לפיכך, בדיקה של נוגדנים בלבד (ללא זיהוי p24) תזהה 30 דגימות (24.4%) כחיוביות. הגילוי של אנטיגן p24 בבדיקה איפשר לזהות 42 דגימות נוספות (34.1%) כחיוביות.

כדי להעריך את הספציפיות של מערכת הבדיקה, נעשה שימוש בפאנל סטנדרטי של סרום שלא הכיל נוגדנים ל-HIV 1,2 (n=20); דגימות סרום דם מתורמים בריאים (n=610), דגימות סרום דם מחולים עם מחלות זיהומיות שונות (n=224) שאינן קשורות ל-HIV; דגימות סרום דם מחולים עם מחלות שונות שאינן זיהומיות - טראומה, מחלות של מערכת הלב וכלי הדם, אונקולוגיה (n=35); דגימות סרום דם מנשים בהריון (n=40). בסך הכל נבדקו 929 דגימות. דגימה אחת מסרת הדם של תורמים בריאים הראתה תוצאה חיובית שגויה - זוהו נוגדנים ל-gp41 ו-p24. 7 דגימות של סרחי דם מתורמים בריאים ו-2 דגימות של סרחי דם מחולים עם מחלות זיהומיות שאינן קשורות ל-HIV הראו תוצאה חיובית כוזבת עבור p24.

כדי להעריך את הספציפיות של מערכת הבדיקה, נעשה שימוש בפאנל סטנדרטי של דגימות שליליות (OSO 42-28-214-94-02p, p. 009). הספציפיות הייתה 100%.

לפיכך, המחקרים הראו כי הספציפיות של מערכת הבדיקה "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24 HIV 1" היא 99% ​​כאשר בוחנים דגימות סרום דם של תורמים נורמליים וחולים עם מחלות זיהומיות וסומאטיות שונות. .

הנתונים שהתקבלו מראים את יעילות האבחון הגבוהה של מערכת הבדיקות שפותחה "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24 HIV 1". מערכת הבדיקה יכולה לשמש לאיתור נוגדנים לחלבונים בודדים מסוג HIV מסוג 1 ו-2 והאנטיגן HIV1 p24 על מנת לאשר תוצאת בדיקה חיובית עם מערכות בדיקה המאתרות נוגדנים, או מערכות בדיקה שמגלות בו זמנית נוגדנים ואנטיגן HIV1 p24. מערכת הבדיקה יכולה לשמש כחלופה לבדיקת immunoblot כדי לאשר תוצאות חיוביות, כמו גם לחקור את הדינמיקה של נוגדני HIV ואנטיגן p24 בשלבים שונים של זיהום.

יתרונות המבחן

1. בדיקת אנזים אימונומאשמת בפורמט טבליות

2. בדיקה מאששת המשלבת קביעה של ספקטרום נוגדני HIV 1, 2 ואנטיגן HIV 1 p24

3. איתור נוגדנים מכל מחלקות ה-Ig

4. הרגישות לזיהוי p24 היא לפחות 5 pg/ml

5. מפחית תוצאות בלתי מוגדרות בהשוואה לאימונובלוטינג

6. זמן ניתוח - שעה 25 דקות (אימונובלוט - מ-3 עד 20 שעות)

7. הערכה ויזואלית של הוספת כל הרכיבים והדגימות.

1. מערכת בדיקת אימונוסורבנט מקושרת אנזים לזיהוי ספקטרום הנוגדנים לנגיף הכשל החיסוני האנושי (HIV) מהסוג הראשון והשני, הסוג הראשון של קבוצה O וזיהוי האנטיגן p24 לנגיף הכשל החיסוני האנושי מהסוג הראשון p24, מאופיין בכך שהוא כולל חומר אימונוסורבנט המבוסס על אנטיגנים אנושיים של וירוס כשל חיסוני, המייצג gp41 (env HIV-1 ו-HIV-2 group O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV -2), נוגדנים לאנטיגן HIV 1 p24, וגילוי ריאגנטים, בעוד שאנטיגנים של HIV ונוגדני HIV הנזכרים לעיל נספגים בבארות שונות של צלחות לבדיקת אימונוסורבנט מקושר אנזים.

2. מערכת בדיקת אנזימים חיסוניים לפי תביעה 1, המאופיינת בכך שצלחות מתקפלות או בלתי ניתנות להפרדה מפוליסטירן עם 96 בארים לבדיקת אנזים חיסונית משמשות לספיחה.

מידע כללי על המחקר

HIV (נגיף הכשל החיסוני האנושי) הוא וירוס ממשפחת הרטרו-וירוסים שמדביק תאי מערכת החיסון האנושית (CD4, תאי עוזר T). גורם לאיידס.

HIV-1 הוא הסוג הנפוץ ביותר של וירוס, שנמצא לרוב ברוסיה, ארה"ב, אירופה, יפן ואוסטרליה (בדרך כלל תת סוג B).

HIV-2 הוא סוג נדיר, הנפוץ במערב אפריקה.

כדי לאבחן את נגיף הכשל החיסוני האנושי, נעשה שימוש במערכת בדיקות משולבת דור רביעי, המסוגלת לזהות זיהום ב-HIV תוך שבועיים לאחר שהנגיף חודר לדם, בעוד שמערכות בדיקות מהדור הראשון עושות זאת רק 6-12 שבועות לאחר ההדבקה.

היתרון של בדיקת HIV משולבת זו הוא זיהוי, הודות לשימוש בנוגדנים ל-HIV-1 p24 כריאגנטים, של אנטיגן p24 הספציפי (חלבון קפסיד ויראלי), אותו ניתן לזהות בבדיקה זו תוך 1-4 שבועות מהיום. רגע ההדבקה, כלומר עוד לפני המרת סרוק, מה שמקצר משמעותית את "תקופת החלון".

בנוסף, בדיקת HIV זו מאתרת בדם נוגדנים ל-HIV-1 ול-HIV-2 (באמצעות תגובת אנטיגן-נוגדנים), המיוצרים בכמות מספקת לזיהוי על ידי מערכת הבדיקה 2-8 שבועות לאחר ההדבקה.

לאחר המרה סרוקית, נוגדנים מתחילים להיקשר לאנטיגן p24, וכתוצאה מכך מתקבלת בדיקת נוגדן HIV חיובית ובדיקת p24 שלילית. עם זאת, לאחר זמן מה, גם נוגדנים וגם אנטיגן יתגלו בדם בו-זמנית. בשלב הסופני, בדיקת איידס לאיתור נוגדנים ל-HIV עשויה לתת תוצאה שלילית, שכן מנגנון ייצור הנוגדנים מופרע.

שלבים של זיהום ב-HIV

1. תקופת הדגירה, או "תקופת החלון הסרונגטיבי", היא הזמן מרגע ההדבקה ועד להתפתחות נוגדנים מגנים לנגיף בדם, כאשר הבדיקות לאיתור נוגדנים ל-HIV שליליות, אך האדם כבר יכול להעביר את הנגיף לאנשים אחרים. משך תקופה זו הוא משבועיים עד 6 חודשים.
2. תקופת ההדבקה החריפה ב-HIV מתחילה בממוצע 2-4 שבועות מרגע ההדבקה ונמשכת כ-2-3 שבועות. בשלב זה, אנשים מסוימים עלולים לפתח תסמינים לא ספציפיים דמויי שפעת עקב שכפול אקטיבי של הנגיף.
3. השלב הסמוי הוא אסימפטומטי, אך במהלכו חלה ירידה הדרגתית בחסינות ועלייה בכמות הנגיף בדם.
4. איידס (תסמונת כשל חיסוני נרכש) הוא השלב האחרון בהתפתחות של זיהום ב-HIV, המאופיין בדיכוי חמור של מערכת החיסון, כמו גם מחלות נלוות, אנצפלופתיה או סרטן.

למרות העובדה שהדבקה ב-HIV היא חשוכת מרפא, כיום קיים טיפול אנטי-רטרו-ויראלי פעיל ביותר (ART), שיכול להאריך משמעותית את חייו של נגוע ב-HIV ולשפר את איכותו.

לבדיקה זו ערך אבחוני גבוה במיוחד אם הדבקה ב-HIV אירעה זמן קצר לפני מועד הבדיקה (2-4 שבועות).

למה משמש המחקר?

הניתוח משמש לאבחון מוקדם של HIV, המאפשר מניעת העברה נוספת של הנגיף לאנשים אחרים, כמו גם התחלת טיפול אנטי-רטרו-ויראלי בזמן וטיפול במחלות התורמות להתקדמות של זיהום ב-HIV.

מתי מתוכנן הלימודים?

• עם תסמינים מתמשכים (למשך 2-3 שבועות) של אטיולוגיה לא ידועה: חום נמוך, שלשולים, הזעות לילה, ירידה פתאומית במשקל, בלוטות לימפה מוגדלות.
• לזיהום הרפס חוזר, דלקת כבד נגיפית, דלקת ריאות, שחפת, טוקסופלזמה.
• אם החולה סובל ממחלות המועברות במגע מיני (עגבת, כלמידיה, זיבה, הרפס גניטלי, וגינוזיס חיידקי).
• אם המטופל קיים יחסי מין נרתיקיים, אנאליים או אוראליים לא מוגנים עם מספר פרטנרים מיניים, בן זוג חדש או בן זוג שהמטופל אינו בטוח לגבי מצב ה-HIV שלו.
• כאשר המטופל עבר עירוי דם תורם (אם כי מקרים של זיהום בדרך זו אינם נכללים למעשה, מכיוון שהדם נבדק בקפידה לנוכחות חלקיקים ויראליים ונתון לטיפול בחום מיוחד).
• אם החולה הזריק תרופות באמצעות מכשירים לא סטריליים.
• במהלך הריון/תכנון הריון (נטילת אזידותימידין בהריון, ניתוח קיסרי כדי למנוע העברת הנגיף לתינוק במהלך המעבר בתעלת הלידה, והימנעות מהנקה מפחיתה את הסיכון להעברת HIV מ-30% ל-1%. ).
• הזרקה מקרית עם מזרק או חפץ אחר (לדוגמה, מכשיר רפואי) המכיל דם נגוע (במקרים כאלה הסבירות לזיהום נמוכה ביותר).

הנגיף הנפוץ ביותר בעולם כיום הוא איידס, וירוס מתת-משפחת הרטרו-וירוסים; הם נקראים גם lentiviruses, או "איטיים". ואכן, בגוף האדם הם מתחילים להראות פעילות לאחר זמן רב יחסית, כ-10 שנים.

ישנם ליקויים חיסוניים מהסוג הראשון והשני. אבל אנחנו יכולים לדבר בבטחה על התרחבות הסוג הראשון של הנגיף. ברגע שהוא נכנס לדם ומצטרף לתא שאחראי על חסינות, הנגיף מתחיל להתרבות במהירות. בעוד שמולקולת CD4, האחראית לזיהוי שלה, מזהה את האויב הערמומי, היא מצליחה להדביק את הגוף כולו. לכן, ככל שהיא מאובחנת מוקדם יותר, כך גדלים סיכוייו של המטופל לקבל טיפול בזמן ולחיות זמן רב יותר.

אם לאדם יש סיבה לבדוק את עצמו לאיידס, יש לעשות זאת מיד. לרוב, הבסיס לאבחון כזה הוא קביעת נוגדנים למחסור חיסוני בדם - חלבונים המתעוררים כתגובה לנוכחות הנגיף, והם מתחילים להיווצר בתקופה שבין 1.5 ל-6 חודשים ממועד אפשרי הַדבָּקָה. בהתאם, כדאי יותר לעבור אבחון לאחר תקופה זו.

כמות הנוגדנים נקבעת באמצעות אנליזה הנקראת אנזים-linked immunosorbent assay (ELISA). שיטה זו מהימנה, היא מדויקת יחסית ורגישה מאוד, הנתונים הללו הם מעל 99.5%. שוק התרופות מציע מספר ערכות בדיקות אבחון עבור ELISA: CombiBest HIV, Anti-HIV 1 2, CombiBest anti-HIV, CombiBest anti-HIV 1 2, CombiBest anti-HIV 1 2 d 0172. מערכות בדיקה אלו שייכות ל-3. דוֹר. החיסרון של ריאגנטים אלו הוא שהם לא תמיד מזהים את המחלה מוקדם. האדם כבר נשא וירוס, הוא עלול להיות מסוכן לשותפים, אך עדיין אין נוגדנים בדם.

הערכות מצוידות בעיקר במספר בדיקות לביצוע 12*8 או 192 בדיקות נגד HIV. לא מומלץ להשתמש בהם לבד. מתיאור התרופות עולה כי מטרתן העיקרית היא לאתר את כמות הנוגדנים לשני סוגי האיידס. וגם לקבוע נוגדנים מכל המעמדות לאיידס. אם אין נוגדנים, אז המחלה לא אובחנה.

הדור הרביעי של הבדיקות "רואה", בנוסף לנוגדנים, אנטיגנים לאיידס; הם מסוגלים לזהות זיהום מוקדם יותר משיטות הדור השלישי. לשם השוואה: אנטיגן HIV נמצא בדם החל מהיום החמישי, והנוגדנים הראשונים מופיעים לא לפני חודש לאחר מכן. CombiBest HIV 1, 2 AG/AT (סט 1) ו-CombiBest HIV 1, 2 AG/AT (סט 2) שייכים לבדיקות הדור הרביעי. באמצעות סט של ריאגנטים אלה, נוגדנים לאנטיגן מסוג 1, 2 ו-p24 מזוהים על ידי בדיקת סרום או פלזמה של דם אנושי. מדינות רבות משתמשות בבדיקת ELISA מהדור הרביעי, הנקראת גם Antigen/Antibody, בקיצור AGAT.

הבדיקה מתבצעת בעילום שם.

אבחון בזמן של זיהום ב-HIV הופך למדד חשוב ביותר, שכן התחלת טיפול מוקדמת יכולה לקבוע במידה רבה את המשך התפתחות המחלה ולהאריך את חיי המטופל. בשנים האחרונות חלה התקדמות משמעותית בזיהוי המחלה הנוראה הזו: מערכות בדיקה ישנות מוחלפות במתקדמות יותר, שיטות הבדיקה נעשות נגישות יותר והדיוק שלהן עולה משמעותית.

במאמר זה נדבר על שיטות מודרניות לאבחון זיהום ב-HIV, שהידע עליהן שימושי לטיפול בזמן בבעיה זו ולשמירה על איכות חיים תקינה למטופל.

שיטות אבחון HIV

ברוסיה מתבצע הליך סטנדרטי לאבחון זיהום ב-HIV, הכולל שתי רמות:

• מערכת בדיקת ELISA (ניתוח סקר);
• אימונובלוטינג (IB).

ניתן להשתמש גם בשיטות אחרות לאבחון:

• בדיקות מהירות.

מערכות בדיקת ELISA

בשלב הראשון של האבחון, בדיקת סקר (ELISA) משמשת לאיתור זיהום ב-HIV, המבוססת על חלבוני HIV שנוצרים במעבדות הלוכדות נוגדנים ספציפיים המיוצרים בגוף בתגובה לזיהום. לאחר האינטראקציה שלהם עם הריאגנטים (אנזימים) של מערכת הבדיקה, צבע המחוון משתנה. לאחר מכן, שינויי צבע אלה מעובדים באמצעות ציוד מיוחד, הקובע את תוצאת הניתוח שבוצע.

בדיקות ELISA כאלה יכולות להראות תוצאות תוך מספר שבועות לאחר כניסת זיהום HIV. בדיקה זו אינה קובעת את נוכחות הנגיף, אלא מזהה ייצור של נוגדנים אליו. לעיתים, בגוף האדם, ייצור הנוגדנים ל-HIV מתחיל לאחר שבועיים לאחר ההדבקה, אך אצל רוב האנשים הם מיוצרים במועד מאוחר יותר, לאחר 3-6 שבועות.

ישנם ארבעה דורות של בדיקות ELISA עם רגישויות שונות. בשנים האחרונות נעשה יותר ויותר שימוש במערכות בדיקה מהדור השלישי והרביעי, המבוססות על פפטידים סינתטיים או חלבונים רקומביננטיים ובעלות ספציפיות ודיוק גבוהים יותר. ניתן להשתמש בהם כדי לאבחן זיהום ב-HIV, לנטר את שכיחות ה-HIV ולהבטיח בטיחות בעת בדיקת דם שנתרם. הדיוק של מערכות בדיקת ELISA דור III ו-IV הוא 93-99% (בדיקות המיוצרות במערב אירופה רגישות יותר - 99%).

לביצוע בדיקת ELISA, 5 מ"ל דם נלקח מהווריד של המטופל. צריכות לעבור לפחות 8 שעות בין הארוחה האחרונה לאנליזה (בדרך כלל היא מתבצעת בבוקר על קיבה ריקה). מומלץ לבצע בדיקה כזו לא לפני 3 שבועות לאחר החשד לזיהום (למשל לאחר קיום יחסי מין לא מוגנים עם בן זוג חדש).

תוצאות בדיקת ELISA מתקבלות תוך 2-10 ימים:

• תוצאה שלילית: מעידה על היעדר זיהום ב-HIV ואינה מצריכה פנייה למומחה;
• תוצאה שלילית שגויה: ניתן להבחין בשלבים המוקדמים של זיהום (עד 3 שבועות), בשלבים מאוחרים יותר של איידס עם דיכוי חמור של מערכת החיסון ועם הכנת דם לא נכונה;
• תוצאה חיובית שגויה: ניתן להבחין במחלות מסוימות ובמקרה של הכנת דם לא נכונה;
• תוצאה חיובית: מעידה על הידבקות ב-HIV, מחייבת ביצוע IB ופנייה למטופל למומחה במרכז לאיידס.

מדוע בדיקת ELISA יכולה לתת תוצאות חיוביות שגויות?

תוצאות בדיקת HIV ELISA חיוביות כוזבות יכולות להתרחש עקב עיבוד דם לא תקין או בחולים עם המצבים והמחלות הבאים:

• מיאלומה נפוצה;
• מחלות זיהומיות הנגרמות על ידי נגיף אפשטיין-בר;
• מדינה אחרי;
• מחלות אוטואימוניות;
• על רקע הריון;
• מצב לאחר חיסון.

מהסיבות שתוארו לעיל, נוגדנים לא ספציפיים בעלי תגובה צולבת עשויים להיות נוכחים בדם, שייצורם לא עורר על ידי זיהום HIV.

בשנים האחרונות ירדה באופן משמעותי תדירות התוצאות החיוביות-שגויות עקב שימוש במערכות בדיקות דור III ו-IV, המכילות פפטיד רגיש יותר וחלבונים רקומביננטיים (הם מסונתזים באמצעות הנדסה גנטית במבחנה). לאחר כניסתן של בדיקות ELISA כאלה, שכיחות התוצאות החיוביות השגויות ירדה משמעותית והיא כ-0.02-0.5%.

תוצאה חיובית כוזבת אינה אומרת שהאדם נגוע ב-HIV. במקרים כאלה, ארגון הבריאות העולמי ממליץ לבצע בדיקת ELISA נוספת (בהכרח דור IV).

הדם של המטופל נשלח למעבדת התייחסות או בוררות עם הסימן "חזרה" ונבדק באמצעות מערכת בדיקת ELISA דור IV. אם התוצאה של הניתוח החדש שלילית, אז התוצאה הראשונה נחשבת לשגויה (חיובי שגוי) ו-IS לא מתבצע. אם התוצאה חיובית או מפוקפקת במהלך הבדיקה השנייה, על המטופל לעבור IB לאחר 4-6 שבועות כדי לאשר או להפריך זיהום ב-HIV.

סיכה חיסונית

אבחנה סופית של זיהום ב-HIV יכולה להתבצע רק לאחר קבלת תוצאה חיובית של אימונובלוטינג (IB). כדי לבצע את זה, משתמשים ברצועת ניטרוצלולוזה, שעליה מורחים חלבונים ויראליים.

דגימת דם ל-IB מתבצעת מוריד. לאחר מכן, הוא עובר עיבוד מיוחד והחלבונים הכלולים בסרום שלו מופרדים בג'ל מיוחד לפי מטען ומשקלם המולקולרי (מניפולציה מתבצעת באמצעות מכשור מיוחד בהשפעת שדה חשמלי). רצועת ניטרוצלולוזה מונחת על הג'ל בסרום הדם והספיגה ("ספיגה") מתבצעת בתא מיוחד. הרצועה מעובדת ואם החומרים המשמשים מכילים נוגדנים ל-HIV, הם נקשרים לרצועות האנטיגניות על ה-IB ומופיעים כקווים.

IB נחשב חיובי אם:

• לפי קריטריונים של CDC אמריקאי - יש שניים או שלושה קווים gp41, p24, gp120/gp160 על הרצועה;
• לפי הקריטריונים של ה-FDA האמריקאי, לרצועה יש שני קווים p24, p31 וקו gp41 או gp120/gp160.

ב-99.9% מהמקרים, תוצאה חיובית של IB מצביעה על זיהום ב-HIV.

אם אין קווים, ה-IB שלילי.

כאשר מזהים קווים עם gr160, gr120 ו-gr41, IB מוטל בספק. תוצאה זו עשויה להתרחש כאשר:

• מחלות אונקולוגיות;
• הֵרָיוֹן;
• עירויי דם תכופים.

במקרים כאלה, מומלץ לחזור על המחקר באמצעות ערכה של חברה אחרת. אם לאחר IB נוסף התוצאה נותרת בספק, אזי יש צורך בתצפית למשך שישה חודשים (IB מתבצע כל 3 חודשים).

תגובת שרשרת פולימראז

בדיקת PCR יכולה לזהות את ה-RNA של הנגיף. הרגישות שלו די גבוהה והיא מאפשרת לזהות זיהום ב-HIV תוך 10 ימים לאחר ההדבקה. במקרים מסוימים, PCR עשוי לתת תוצאות חיוביות שגויות, שכן הרגישות הגבוהה שלו עשויה להגיב גם לנוגדנים לזיהומים אחרים.

טכניקת אבחון זו יקרה ודורשת ציוד מיוחד ומומחים מוסמכים ביותר. סיבות אלו אינן מאפשרות לבצע בדיקות המוניות לאוכלוסייה.

PCR משמש במקרים הבאים:

• לגלות HIV בילודים שנולדו מאמהות נגועות ב-HIV;
• לגלות HIV ב"תקופת החלון" או במקרה של ספק IB;
• לשלוט בריכוז HIV בדם;
• לחקר דם תורם.

בדיקת ה-PCR לבדה אינה מבצעת אבחנה של HIV, אלא מבוצעת כשיטת אבחון נוספת לפתרון מצבים שנויים במחלוקת.

שיטות אקספרס

אחד החידושים באבחון HIV הוא בדיקות מהירות, שאת תוצאותיהן ניתן להעריך תוך 10-15 דקות. התוצאות היעילות והמדויקות ביותר מתקבלות באמצעות בדיקות אימונוכרומטוגרפיות המבוססות על עקרון הזרימה הנמית. הם רצועות מיוחדות שעליהן מורחים דם או נוזלי בדיקה אחרים (רוק, שתן). אם קיימים נוגדנים ל-HIV, לאחר 10-15 דקות מופיע פס צבעוני ובקרה בבדיקה - תוצאה חיובית. אם התוצאה שלילית, רק רצועת הבקרה מופיעה.

כמו בבדיקות ELISA, יש לאשר את התוצאות של בדיקות מהירות על ידי ניתוח IB. רק לאחר מכן ניתן לאבחן זיהום ב-HIV.

קיימות ערכות בדיקות ביתיות מהירות. בדיקת OraSure Technologies1 (ארה"ב) מאושרת על ידי ה-FDA, זמינה ללא מרשם וניתן להשתמש בה כדי לזהות HIV. לאחר הבדיקה, אם התוצאה חיובית, מומלץ למטופל לעבור בדיקה במרכז מומחה לאישור האבחנה.

בדיקות אחרות לשימוש ביתי עדיין לא אושרו על ידי ה-FDA ותוצאותיהן עשויות להיות מפוקפקות מאוד.

למרות העובדה שבדיקות מהירות נחותות בדייקנות מבדיקות ELISA דור IV, הן נמצאות בשימוש נרחב לבדיקות נוספות של האוכלוסייה.

אתה יכול לעבור בדיקות לאיתור זיהום ב-HIV בכל מרפאה, בית חולים מחוז מרכז או מרכזי איידס מיוחדים. בשטח רוסיה הם מתבצעים באופן סודי לחלוטין, או בעילום שם. כל מטופל יכול לצפות לקבל ייעוץ רפואי או פסיכולוגי לפני או אחרי הבדיקה. עבור בדיקות HIV תצטרכו לשלם רק במוסדות רפואיים מסחריים, בעוד שבמרפאות ציבוריות ובבתי חולים הן מתבצעות ללא תשלום.

קרא על הדרכים שבהן אתה יכול להידבק ב-HIV ואיזה מיתוסים קיימים לגבי האפשרויות להידבק.

תיאור

הכנה

אינדיקציות

פרשנות של תוצאות

תיאור

שיטת קביעה בדיקת אימונוסורבנטית מקושרת אנזים (ELISA).

חומר במחקרסרום דם

ביקור בית זמין

זיהוי משולב של נוגדנים ל-HIV סוגים 1 ו-2 ולאנטיגן HIV p24, בדיקה איכותית.

תשומת הלב. במקרה של תגובות חיוביות ומפוקפקות, ניתן להאריך את תקופת הוצאת התוצאות ל-10 ימי עבודה. HIV (נגיף הכשל החיסוני האנושי), הגורם לאיידס (תסמונת הכשל החיסוני הנרכש), שייך למשפחת הרטרו-וירוסים. זה מועבר מאדם לאדם באמצעות שימוש במחטים מזוהמות ומזרקים למתן תרופות תוך ורידי או הליכים טיפוליים, במהלך מגע מיני, הן הטרוסקסואלים והן הומוסקסואלים. העברת הנגיף יכולה להתרחש באמצעות עירוי של דם נגוע ומוצריו, תרומת איברים או נוזל זרע, ובקרב עובדים רפואיים - באמצעות פגיעה ממחטים או מכשירים מזוהמים. הידבקות ב-HIV אפשרית באמצעות העברה מאם נגועה לילד (בדרך אנכית), אם כי שיטות מניעה מודרניות באמצעות טיפול אנטי-רטרו-ויראלי, אם כל ההמלצות מתקיימות, יכולות להפחית את הסיכון הזה למינימום.

תהליך האינטראקציה של נגיף עם תא כולל מספר שלבים: קשירת הנגיף לתא, שחרורו מהמעטפת, חדירה לציטופלזמה, סינתזה של DNA באמצעות RNA ויראלי, שילוב DNA ויראלי בגנום של התא המארח. לאחר מכן, השלב הסמוי של ההדבקה מתחיל. במצב זה, DNA פרווויראלי יכול להתקיים במשך זמן מה מבלי להראות פעילות ומבלי להשפיע על חיי התא המארח. אמנם אין ביטוי של חלבונים ויראליים, אך אין תגובה חיסונית לנגיף. נוגדנים ל-HIV, המאפיינים את התגובה החיסונית של הגוף, מופיעים לאחר הפעלת DNA ויראלי ותחילת רבייה פעילה של הנגיף. משך התקופה הסמויה תלוי במספר גורמים, כולל המאפיינים הגנטיים האישיים של האורגניזם.

נוגדנים ל-HIV עשויים להופיע החל מהשבוע השני לאחר ההדבקה; התוכן שלהם גדל תוך 2-4 שבועות ונשאר לשנים רבות. ב-90-95% מהנדבקים הם מופיעים בשלושת החודשים הראשונים לאחר ההדבקה, ב-5-9% - בתקופה שבין שלושה לשישה חודשים, ב-0.5-1% - במועד מאוחר יותר.

בשבועות הראשונים של ההדבקה, עוד לפני הופעת נוגדנים לנגיף (כלומר, לפני המרה סרוקית), ניתן לזהות נוכחות של אנטיגנים ל-HIV, כולל חלבון קפסיד p24 שלו, בדגימות סרום או פלזמה. מאוחר יותר, לאחר המרת סרוק, זה בדרך כלל לא ניתן לזיהוי.

מערכות בדיקות משולבות דור 4, הכוללות את מבחן ה-HIV Ag/Ab Combo (Architect, Abbott), מזהות שני נוגדנים ל-HIV מסוג 1 ו-2 ולאנטיגן HIV p24, המאפשר זיהוי מוקדם של זיהום. המאפיינים המיוחדים של בדיקת הסקר המשמשת במעבדת INVITRO לאיתור זיהום ב-HIV כוללים את הספציפיות הגבוהה של המחקר (> 99.5%); הבדיקה רגישה ב-100% לנוגדנים האופייניים לתקופת הסירו-המרה, ורגישות הבדיקה לאנטיגן p24 היא כ-18 pg/ml.

ההליך לביצוע בדיקת מעבדה ל-HIV מוסדר בקפדנות על פי פקודות משרד הבריאות של הפדרציה הרוסית וכולל את השלב של מחקר סקר (סלקציה) של נוכחות נוגדנים ל-HIV באמצעות מבחן אימונוסורבנט מקושר אנזים (ELISA) שיטות שאושרו לשימוש, ושלב של אימות (אישור) מחקר מפורט יותר במעבדה של מרכז האיידס בעיר. יש לציין שאפילו מערכות ה-ELISA ההקרנה הטובות ביותר אינן מבטיחות 100% סגוליות, כלומר, קיימת סבירות מסוימת לקבלת תוצאות לא ספציפיות, חיוביות שגויות הקשורות למאפיינים של סרום הדם של המטופל. לכן, תוצאה חיובית של בדיקת ELISA לא תאושר בבדיקות אישור, ולאחר מכן תינתן למטופל תוצאה שלילית או בלתי מוגדרת. אם התוצאה של המחקר המאשש אינה ודאית, יש לחזור על הבדיקה לאורך זמן לאחר 2-3 שבועות.

לאבחון מעבדתי של זיהום ב-HIV בילדים שנולדו לאמהות נגועות ב-HIV יש מאפיינים משלו. נוגדנים אימהיים ל-HIV (מחלקת IgG) יכולים להסתובב בדמם עד 18 חודשים מרגע הלידה. היעדר נוגדנים ל-HIV ביילודים לא אומר שהנגיף לא חדר למחסום השליה. ילדים לאמהות נגועות ב-HIV כפופים לבדיקת אבחון מעבדה בתוך 36 חודשים לאחר הלידה.

הכנה

אין צורך בהכנה מיוחדת. מומלץ ליטול דם לא לפני 4 שעות לאחר הארוחה האחרונה. ניתן למצוא המלצות כלליות להכנה למחקר. רצוי לבצע בדיקה לאיתור אנטיגן ונוגדנים ל-HIV לא לפני שבועיים לאחר הדבקה אפשרית, עם בדיקה חוזרת לאחר שלושה ושישה שבועות במקרה של תוצאה שלילית. בקשות למחקר ב-INVITRO LLC ממולאות באמצעות דרכון או מסמך המחליף אותו (כרטיס הגירה, רישום זמני במקום המגורים, תעודת איש צבא, אישור ממשרד הדרכונים במקרה של אובדן דרכון, כרטיס רישום מאת מלון). המסמך המוצג חייב בהכרח להכיל מידע על רישום זמני או קבוע בפדרציה הרוסית ותצלום. בהיעדר דרכון (מסמך המחליף אותו), למטופל יש זכות למלא בקשה אנונימית לתרומת חומר ביולוגי. במהלך בדיקה אנונימית, פנייה ודגימת חומר ביולוגי המתקבל מהלקוח, מוקצה מספר המוכר רק למטופל ולצוות הרפואי שביצע את ההזמנה. ! תוצאות מחקרים שבוצעו בעילום שם לא ניתנות להגשה לאשפוז, בדיקות מקצועיות ואינן כפופות לרישום ב-ORUIB.

אינדיקציות לשימוש

• בלוטות לימפה מוגדלות ביותר משני אזורים.
• לויקופניה עם לימפוניה.
• זיעת לילה.
• ירידה פתאומית במשקל מסיבה לא ידועה.
• שלשול במשך יותר משלושה שבועות של סיבה לא ידועה.
• חום שגורם לא ידוע.
• תכנון הריון.
• הכנה לפני ניתוח, אשפוז.
• איתור הזיהומים הבאים או שילובים שלהם: שחפת, טוקסופלזמה גלויה, זיהום חוזר בנגיף הרפס, קנדידה של איברים פנימיים, הרפס זוסטר נוירלגיה חוזרת, דלקת ריאות הנגרמת על ידי mycoplasmas, pneumocystis או legionella.
• סרקומה של קפוסי בגיל צעיר.
• מגע מיני מזדמן.

פרשנות של תוצאות

פרשנות תוצאות המחקר מכילה מידע עבור הרופא המטפל ואינה מהווה אבחנה. אין להשתמש במידע בסעיף זה לצורך אבחון עצמי או טיפול עצמי. הרופא מבצע אבחון מדויק הן באמצעות תוצאות בדיקה זו והן במידע הדרוש ממקורות אחרים: היסטוריה רפואית, תוצאות בדיקות אחרות וכו'.

יחידות מדידה במעבדה העצמאית INVITRO: מבחן איכותני. צורת הצגת התוצאות: בהיעדר נוגדנים לאנטיגן HIV 1 ו-2 ו-p24, התשובה היא "שלילית". אם מתגלים נוגדנים ל-HIV או לאנטיגן בבדיקת אימונוסורבנט הקשור לאנזים, דגימת סרום נשלחת לאישור באמצעות אימונובלוטינג למרכז האיידס בעיר, המאמת תוצאות חיוביות ובלתי מוגדרות.

תוצאה חיובית:

1. זיהום HIV;
2. תוצאה חיובית שגויה הדורשת מחקרים חוזרים או נוספים *);
3. המחקר אינו אינפורמטיבי בילדים מתחת לגיל 18 חודשים שנולדו מאמהות נגועות ב-HIV.

*הספציפיות של מערכת בדיקות הסקר נוגדנים ל-HIV 1 ו-2 ולאנטיגן HIV 1 ו-2 (HIV Ag/Ab Combo, Abbott), לפי הערכות שסיפק יצרן הריאגנטים, היא כ-99.6% הן באוכלוסייה הכללית והן קבוצת חולים עם הפרעות פוטנציאליות (זיהומים HBV, HCV, Rubella, HAV, EBV, HNLV-I, HTLV-II, E. coli, Chl. trach. וכו', פתולוגיות אוטואימוניות (כולל דלקת מפרקים שגרונית, נוכחות של נוגדנים אנטי-גרעיניים) , הריון, רמות גבוהות של IgG, IgM, גמופתיות חד שבטיות, המודיאליזה, עירויי דם מרובים).