Anti HIV 1 2 ano. Mga modernong pamamaraan para sa pag-diagnose ng impeksyon sa HIV

Mga may-ari ng patent RU 2283497:

Ang imbensyon ay nauugnay sa larangan ng biotechnology at medisina. Ang enzyme-linked immunosorbent test system para sa pagtukoy ng spectrum ng mga antibodies sa human immunodeficiency virus (HIV) ng una at pangalawang uri, ang unang uri ng pangkat O at pagtukoy ng antigen sa human immunodeficiency virus ng unang uri na p24 ay may kasamang isang immunosorbent batay sa mga antigen ng human immunodeficiency virus na kumakatawan sa gp41 (env HIV-1 at HIV-2 group O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV-2), antibodies sa HIV antigen 1 p24, at mga detection reagents, ang mga HIV antigen at HIV antibodies sa itaas na na-sorbed sa iba't ibang balon ng mga plate para sa enzyme-linked immunosorbent assay, at 96-well polystyrene collapsible o non-separable plates ay ginagamit para sa sorption. Ang imbensyon ay nagbibigay ng mas mataas na sensitivity, pagpapasimple, at pag-aalis ng subjectivity sa pagsusuri ng mga resulta. 1 suweldo mga file, 10 talahanayan, 1 may sakit.

Ang imbensyon ay nauugnay sa larangan ng biotechnology at medisina. Paggamit: pagkakaiba-iba ng pagtuklas ng lahat ng klase ng mga tiyak na antibodies sa mga protina ng human immunodeficiency virus 1 at 2, HIV 1 group O at HIV 1 p24 antigen.

Esensya: pagkuha ng enzyme-linked immunosorbent test system para sa pagtukoy ng spectrum ng antibodies ng lahat ng klase sa mga indibidwal na protina at HIV 1 at 2, HIV 1 group O at HIV 1 p24 antigen sa blood serum (plasma), immunoglobulins at mga produkto ng dugo ng tao sa upang matukoy ang spectrum ng mga antibodies sa HIV 1 at 2, HIV 1 group O, pagtuklas ng HIV 1 p24 antigen at pagkumpirma ng positibo o kaduda-dudang mga resulta ng screening para sa mga antibodies sa HIV 1 at 2, HIV 1 group O at HIV 1 p24 antigen.

PAGLALARAWAN NG IMBENTO

Ang pagsusuri sa laboratoryo ng impeksyon sa HIV ay batay sa tatlong lugar: a) indikasyon ng HIV at mga bahagi nito; b) pagtuklas ng mga antibodies sa HIV; c) pagpapasiya ng mga pagbabago sa immune system. Kabilang sa mga umiiral na pamamaraan ng diagnostic ng laboratoryo, ang pinakakaraniwan ay mga serological - pagtuklas ng mga antibodies sa mga antigen ng virus.

Upang makita ang mga antibodies sa impeksyon sa HIV, pangunahing ginagamit ang enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) at immunoblotting (IB). Ang ELISA ay batay sa immobilization ng mga viral antigen sa mga plato kung saan ang mga antibodies ng pasyente ay nagbubuklod, at ang antigen-antibody complex ay nakita gamit ang horseradish peroxidase-conjugated mouse monoclonal antibodies sa human immunoglobulins G at M. Ang pamamaraan ay medyo tiyak at sensitibo at nagbibigay-daan sa pagtuklas ng mga antibodies na partikular sa virus sa 95% ng mga pasyente. Ang natitirang 5% ng mga kaso ay nangyayari sa mga unang yugto ng impeksyon, kapag mayroon pa ring kaunting mga antibodies sa serum ng dugo, o sa mga huling yugto ng sakit, kapag ang katawan ay hindi na makapag-synthesize ng mga antibodies dahil sa isang matalim na pag-ubos ng ang immune system. Posible rin ang mga maling positibong resulta ng ELISA, pangunahin sa mga pasyenteng may mga sakit na autoimmune at oncological, gayundin sa mga kaso ng impeksyon na dulot ng Eshptain-Barr virus. Sa kasong ito, isang cross-reaksyon ng mga antibodies sa rheumatoid factor, Epstein-Barr virus o sa mga antigenic determinant na katulad ng mga protina ng pangunahing histocompatibility complex class 1 at 2 (HLA-4 at DQW3) at may kakayahang magbigkis sa mga antigen ng HIV nangyayari. Ang mga maling positibong resulta ay karaniwan sa mga buntis at matatanda. Ang hemolysis, lipemia, at bacterial contamination ng serum ay maaari ding magdulot ng hindi maaasahang mga resulta.

Kaugnay nito, maraming mga pamamaraan ang iminungkahi at ginamit upang subukan ang pagiging tiyak ng mga resulta ng pagtuklas ng antibody. Sa mga pamamaraang ito, ang pinakakaraniwang ginagamit na reaksyon ay ang "immune blotting" sa pagbabagong "Western Blot". Ang kakanyahan ng pamamaraan ay ang mga sumusunod: sa unang yugto, ang mga protina ng HIV ay pinaghihiwalay ng molekular na timbang gamit ang polyacrylamide gel electrophoresis. Pagkatapos ay isinasagawa ang electrophoretic transfer mula sa polyacrylamide gel hanggang sa ibabaw ng nitrocellulose membrane. Ang mga antigens na inilipat sa ganitong paraan ay nakita sa lamad gamit ang hindi direktang pagsusuri: ang lamad ay natupok sa materyal na pagsubok; ang mga nakapaloob na antibodies ay nagbubuklod sa mga antigen ng HIV na inilipat sa isang lamad ng nitrocellulose, pagkatapos ay ang mga piraso ng lamad ay natupok sa conjugate; Kapag ang isang antigen-antibody complex ay nabuo, ang conjugate ay nakakabit dito; pagkatapos ng paghuhugas mula sa conjugate at pagpapapisa ng itlog sa substrate, ang paglamlam ay nangyayari sa mga lugar na iyon ng nitrocellulose kung saan naganap ang pagbuo ng antigen-antibody-conjugate complex. Ang drawing ay nagpapakita ng mga halimbawa ng positibo, mahinang positibo at negatibong resulta ng immunoblot.

Ang mga antibodies sa mga sumusunod na protina (p) at glycoproteins (gp) ay nakita sa serum ng mga taong nahawaan ng HIV-1 at HIV-2: Talahanayan A.

Ang Table B ay nagpapakita ng pamantayan para sa pagtatasa ng mga resulta ng immunoblotting na inirerekomenda ng WHO at ng Russian Center para sa Pag-iwas at Pagkontrol ng AIDS.

Batay sa pamantayan ng WHO, ang sera kung saan ang mga antibodies sa alinmang dalawang HIV-1 na envelope na protina ay nakita ng paraan ng IB ay itinuturing na positibo. Kung may reaksyon na may isa lamang sa mga envelope protein (gp160, gp120, gp41) kasama ng o walang reaksyon sa iba pang mga protina, ang resulta ay itinuturing na nagdududa. Ayon sa Federal Scientific and Methodological Center ng Ministry of Health ng Russian Federation para sa Pag-iwas at Pagkontrol ng AIDS, posible na bigyang-kahulugan ang sera bilang positibo kahit na sa pagkakaroon ng mga antibodies sa isang protina ng lamad lamang.

Ang pagtuklas ng mga antibodies sa p24 antigen ay maaaring magpahiwatig ng panahon ng pagsisimula ng seroconversion, dahil unang lumitaw ang mga antibodies sa protina na ito. Ang mga positibong reaksyon na may gag at pol na mga protina na walang pagkakaroon ng reaksyon sa mga env protein ay maaaring sumasalamin sa yugto ng maagang seroconversion at nagpapahiwatig din ng pagkakaroon ng impeksyon sa HIV-2 o isang hindi tiyak na reaksyon.

Ang paggamit ng immunoblotting reaction bilang isang dalubhasang paraan para sa pag-diagnose ng HIV ay may ilang makabuluhang disadvantages:

1. Ang imposibilidad ng pagkumpirma ng pagtuklas ng HIV p24 antigen 1 sa kaso ng paggamit ng mga pagsusuri na sabay-sabay na nakakita ng antigen at antibodies sa HIV, na ginagawang hindi naaangkop (walang kahulugan) na gumamit ng mga pagsusuri sa screening para sa sabay-sabay na pagtuklas ng antigen at antibodies sa HIV ( Kautusan ng Ministri ng Kalusugan ng Russian Federation No. 292 ng Hulyo 30. 2001: "upang suriin ang mga donor sa mga istasyon ng pagsasalin ng dugo, kinakailangang gumamit ng mga sistema ng pagsubok na sabay-sabay na nakakakita ng antigen at antibodies sa HIV").

2. Ang pagtuklas ng mga antibodies ng klase ng IgG lamang. Imposibleng ganap na kumpirmahin ang mga positibong resulta na nakuha gamit ang mga pagsubok sa ika-3 at ika-4 na henerasyon (pag-detect ng IgG at IgM antibodies).

3. Subjectivity sa interpretasyon ng pagtatasa ng pagsubok, lalo na sa mga kaso ng "nagdududa" at "hindi tiyak" na mga resulta at sa mga unang yugto ng seroconversion (ang mga nakitang banda sa mga lamad ng nitrocellulose sa mga kasong ito ay hindi malinaw, halos hindi nakikita ng mata, at madalas mayroong hindi pagkakasundo kapag tinasa ng iba't ibang tao).

4. Imposibilidad ng automated quantitative assessment ng mga resulta ng pagsusuri.

5. Mas mababang sensitivity kumpara sa ELISA.

6. Maikli ang buhay ng istante (sa panahon ng pag-iimbak, ang mga piraso ng nitrocellulose membrane ay kumukupas at hindi maaaring maging layuning kumpirmasyon ng pagtuklas o hindi pagtuklas ng HIV sa mga kontrobersyal na kaso).

7. Kahirapan sa pag-set up ng reaksyon at pag-iimbak (ang nitrocellulose membrane strips ay napakarupok at madalas na masira).

8. Mataas na halaga ng mga information security kit.

Ang isang kilalang reagent ay isang kit para sa sabay-sabay na pagtukoy ng mga antigen at antibodies sa parehong pathogen, kabilang ang HIV (DE 4236189 F1, 04/28/1994). Gayunpaman, ang isang sistema ng pagsubok na nagpapahintulot sa pag-diagnose ng impeksyon sa HIV sa iba't ibang yugto ay hindi isiniwalat.

Ang layunin ng kasalukuyang imbensyon ay upang makakuha ng isang sistema ng pagsubok kung saan posible na kumpirmahin ang positibo o kaduda-dudang mga resulta ng mga pagsusuri sa screening para sa mga antibodies sa HIV 1 at 2, HIV 1 group O at HIV 1 p24 antigen kapag gumagamit ng mga pagsusuri para sa sabay-sabay na pagtuklas. ng mga antigen at antibodies.

Ang iminungkahing teknikal na solusyon ay nakakamit ng isang enzyme-linked immunosorbent test system para sa pagtukoy ng spectrum ng mga antibodies sa human immunodeficiency virus (HIV) ng una at pangalawang uri, ang unang uri ng grupo O at pagtukoy ng p24 antigen sa human immunodeficiency virus ng unang uri ng p24, na nailalarawan sa kabilang ang isang immunosorbent batay sa mga antigens na human immunodeficiency virus, na kumakatawan sa gp41 (env HIV-1 at HIV-2 group O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol) , gp36 (env HIV-2), antibodies sa HIV 1 antigen p24, at detection reagents, habang ang mga nabanggit sa itaas na HIV antigens at HIV antibodies ay na-adsorbed sa iba't ibang balon ng enzyme-linked immunosorbent assay plates.

Bilang karagdagan, ang 96-well polystyrene collapsible o non-dismountable plates para sa enzyme immunoassay ay ginagamit para sa sorption.

Ang teknikal na resulta na nakamit ng kasalukuyang imbensyon ay ang posibilidad ng pagkumpirma ng mga positibong resulta para sa mga antibodies sa HIV 1 at 2, HIV 1 group O at HIV 1 p24 antigen, mataas na sensitivity, ang posibilidad ng awtomatikong interpretasyon ng mga resulta, na nag-aalis ng subjectivity ng pagtatasa, kadalian ng pagsasagawa ng pagsubok, mas mababa kaysa sa umiiral na mga set ng seguridad ng impormasyon sa gastos.

Ang teknikal na solusyon na ito ay naiiba sa mga kilala:

1. Paggamit ng isang plato para sa mga immunological na reaksyon bilang isang solid-phase carrier.

2. Sabay-sabay na paggamit ng mga antibodies sa HIV p 24 at isang set ng HIV antigens bilang isang sorbent.

Ang imbensyon ay inilalarawan ng sumusunod na halimbawa.

Ang mga aktibong prinsipyo ng binuong sistema ng pagsubok na "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + AG p24 HIV 1" ay:

Immunosorbent - mga recombinant na antigen na katulad ng mga istrukturang protina ng HIV-1: gp41 (env HIV-1 at HIV 1 group O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), HIV-2: gp36 (env) at monoclonal mouse antibodies sa HIV 1(p24) antigen, naka-adsorbed nang hiwalay sa mga piraso ng polystyrene collapsible plate.

Upang ihanda ang paggamit ng immunosorbent:

1. Ang HIV-1 gp41 ay isang protina na ginawa ng E. Coli strain No. AHIV 103.

2. Ang HIV-1 gp120 ay isang protina na ginawa ng E. Coli strain No. AHIV 109.

3. Ang HIV-1 p24 ay isang protina na ginawa ng E. Coli strain No. AHIV 105.

4. Ang HIV-1 p31 ay isang protina na ginawa ng E. Coli strain No. AHIV 108.

5. Ang HIV-2 p36 ay isang protina na ginawa ng E. Coli strain No. AHIV 106.

Ang Conjugate 1, lyophilized o likido, ay isang mouse monoclonal antibody sa HIV1 p24 antigen na pinagsama sa biotin.

1. Conjugate 2, lyophilized o likido, ay isang pinaghalong recombinant antigens na katulad ng mga istrukturang protina ng HIV-1: gp41 (env HIV-1 at HIV 1 group O), gp120 (env), p24 (gag), p31( po1); HIV-2: gp36 (env), pinagsama sa biotin;

2. Conjugates 3, 4 - lyophilized o likido - streptavidin, na may label na may malunggay peroxidase;

Sa mga paunang pag-aaral, ang disenyo ng sistema ng pagsubok ay napili, ang teknolohiya para sa paghahanda ng mga bahagi nito ay binuo, at ang mga kondisyon para sa pagsasagawa ng enzyme immunoassay reaction ay na-optimize.

Kapag nagsasagawa ng ELISA sa sistema ng pagsubok na "DS - ELISA - ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM + Ag p24 HIV 1", 25 μl ng conjugate-1 ay idinagdag sa mga balon ng plato na may sorbed antibodies sa p24, at 25 μl ng conjugate-1 ay idinagdag sa mga balon na may sorbed antigens. 25 µl ng conjugate-2. Ang scheme ng reaksyon ay ipinapakita sa ibaba. Susunod, 25 μl ng sample ng pagsubok ay idinagdag sa bawat balon. Kasabay nito, sa mga balon na may mga antigen ang kulay ay nagbabago mula sa orange hanggang rosas, at sa balon na may mga antibodies - mula berde hanggang kulay abo. Ang timpla ay inilublob sa loob ng 45 minuto sa 37°C sa isang shaker (o 1 oras sa 37°C sa isang thermostat). Pagkatapos, nang walang paghuhugas, magdagdag ng 50 μl ng conjugate-3 sa mga balon ng plato para sa pagtukoy ng p24 antigen, at 50 μl ng conjugate-4 sa mga balon para sa pagtukoy ng mga antibodies. Pagkatapos ng pagpapapisa ng itlog sa loob ng 20 minuto sa 37°C sa isang shaker (o 30 minuto sa 37°C sa isang termostat), ang plato ay hinuhugasan at binuo gamit ang pinaghalong substrate. Kabuuang oras ng reaksyon 1 oras 25 minuto (o 1 oras 50 minuto). Ang p24 antigen na nasa sample ng pagsubok ay nagbubuklod sa mga monoclonal antibodies sa p24, at ang mga partikular na antibodies ay bumubuo ng isang complex na may mga recombinant na antigen sa plato. Ang nagreresultang immune complex ng anti-p24 na may p24 ay nakita na may anti-p24-biotin conjugates, pagkatapos ay may streptavidin-peroxidase, at ang Ag-HIV immune complex na may At-HIV ay nakita na may Ag-biotin conjugate, pagkatapos ay may streptavidin- peroxidase.

Scheme para sa pag-set up ng reaksyon.

Ang mga resulta ay isinasaalang-alang spectrophotometrically sa dalawang wavelength: 450/620-680 nm kasama ang device na naka-configure "sa pamamagitan ng hangin". Isaalang-alang natin ang mga resulta sa isang wavelength na 450 nm.

Ang mga resulta ng pagsusuri ay isinasaalang-alang kung ang average na mga halaga ng optical density (OD) sa mga balon na may K- ay hindi hihigit sa 0.2, sa mga balon na may K+ - hindi bababa sa 1.0. OP crit. kinakalkula ng formula:

OP crit. gp41 = avg. ibig sabihin OP K-(gp41)+0.15

OP crit. gp120 = avg. ibig sabihin OP K-(gp120)+0.15

OP crit. p24 = avg. ibig sabihin OP K-(р24)+0.15

OP crit. p31 = avg. ibig sabihin OP K-(р31)+0.15

OP crit. gp36 = avg. ibig sabihin OP K-(gp36)+0.15

OP crit. Ag p24 = avg. ibig sabihin OP k- (Ag p24)+0.04

kung saan ang 0.15 at 0.04 ay mga coefficient na itinatag ng pagpoproseso ng istatistika sa tagagawa. Sa panahon ng pagbuo ng sistema ng pagsubok ang mga sumusunod ay ginamit:

1. Mga sample ng serum ng dugo mula sa mga malulusog na donor (n=610).

2. Mga sample ng serum ng dugo mula sa mga pasyente na may iba't ibang mga nakakahawang sakit na walang kaugnayan sa HIV (acute respiratory infections, pneumonia, tonsilitis, herpetic at cytomegalovirus infections, syphilis, chlamydia, viral hepatitis A, B at C (n=224)).

3. Mga sample ng serum ng dugo mula sa mga pasyente na may iba't ibang hindi nakakahawang sakit - trauma, sakit ng cardiovascular system, oncology (n=35).

4. Mga sample ng blood serum mula sa mga buntis na kababaihan (n=40).

5. Ang mga sample ng serum ng dugo ay seropositive sa ELISA at nakumpirma sa immunoblot (n=428).

6. Mga sample ng serum na may positibong resulta na nakuha sa enzyme immunoassay test system para sa sabay-sabay na pagtukoy ng HIV 1.2 antibodies at p24 antigen, at isang hindi tiyak na resulta ng immunoblot (n=123).

7. Panloob na panel ng sera na naglalaman at hindi naglalaman ng mga antibodies sa HIV 1,2, nasubok sa enzyme immunoassay test system at immunoblot na nakarehistro ng Ministry of Health ng Russian Federation (n=21).

8. Pamantayang "HIV 1 ANTIGEN STANDARD", "BIO RAD", France, pusa. No. 72217, na isang antigen na nakuha mula sa viral lysate.

9. Panloob na pamantayan ng negosyo. Isang sample na naglalaman ng p 24 antigen sa konsentrasyon na 200 pg/ml, nakuha mula sa viral lysate at na-titrate ayon sa kumpanyang "HIV 1 ANTIGEN STANDARD" na "BIO RAD", France, cat. No. 72217.

10. Standard panel ng sera na naglalaman ng mga antibodies sa human immunodeficiency virus type 1 (HIV 1) - OSO 42-28-212-93-02P, "Medical and Biological Union", Novosibirsk.

11. Standard panel ng sera na naglalaman ng mga antibodies sa human immunodeficiency virus type 2 (HIV 2) - OSO-42-28-216-02P, "Medical and Biological Union", Novosibirsk.

12. Standard panel ng sera na hindi naglalaman ng mga antibodies sa human immunodeficiency virus type 1 at 2 (HIV 1, 2) - OSO-42-28-214-94-02P, "Medical and Biological Union", Novosibirsk.

Ang sensitivity ng test system para sa pag-detect ng p24 antigen ay tinasa gamit ang "HIV I ANTIGEN STANDARD", "BIO RAD", at Internal Standard ng enterprise. Gamit ang Panloob na Pamantayan, ang 4 na serial 2-fold dilution mula 40 pg/ml hanggang 5 pg/ml ay inihanda gamit ang normal na donor plasma, walang HIV antibodies 1, 2, bilang isang diluent. Ang pinakamaliit na halaga ng nakikitang antigen ay kinuha bilang sensitivity criterion. Ang nakuhang datos ay ipinakita sa Talahanayan 1.

Upang masuri ang pagiging sensitibo ng sistema ng pagsubok sa pag-detect ng mga partikular na antibodies, ginamit ang mga karaniwang panel ng mga sample na naglalaman ng mga antibodies sa human immunodeficiency virus (HIV 1, 2) (OSO 42-28-212-93-02P p.012, OSO 42- 28-216- 02P (HIV 2) p.003).

Ang nakuhang datos ay ipinakita sa talahanayan 3, 4.

Ang kahusayan ng diagnostic ng sistema ng pagsubok na "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24 HIV 1" ay inihambing sa mga sistema ng pagsubok na "Jenskrin-HIV-Ag/At" (Bio-Rad), "DIA-HIV 1/2" (Diaprof-Med), "Vironostika HIV Uni-form II Ag/At" (Biomerioux), "Recombinant-HIV1,2 DSM" (MBS), "Amercard Anti-HIV-1,2 K" (Amercard ), "HIV-1, HIV-2-ELISA-Avicenna" (Avicenna). Para sa layuning ito, ang mga sample ng serum mula sa panloob na panel ay sinubukan sa lahat ng tinukoy na mga pagsubok. Ang mga resulta na ipinakita sa Talahanayan 5 ay nagpapahiwatig ng mataas na diagnostic na kahusayan ng "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1".

Ang mga pag-aaral sa pagiging sensitibo ng sistema ng pagsubok na "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" ay isinagawa din na may sera ng dugo mula sa mga pasyente na nakumpirma ng immunoblotting bilang HIV positive. May kabuuang 428 sample ng naturang sera ang nasubok. Maraming mga pagpipilian ang nakuha para sa pag-detect ng mga antibodies sa iba't ibang mga protina ng HIV at ang p24 antigen. Ang mga resulta ay ipinakita sa Talahanayan 6.

Kapag sinusuri ang mga sample na positibo sa HIV 1, 3% ng sera ang nagpakita ng positibong reaksyon sa gp36 (HIV 2 env). OP/OPcrit. sa mga sample na ito ay hindi lalampas sa 2.0. Ang aming data sa cross-reactivity ng mga panlabas na shell na protina ng HIV 1 (gp41) at HIV 2 (gp36) ay nag-tutugma sa data ng panitikan.

Interpretasyon ng mga resulta

Ang pagsusuri sa pagsusuri ng HIV-positive na sera at mga sample mula sa standard at internal na mga panel sa "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24 HIV 1" ay nagbigay-daan sa amin na bumuo ng pamantayan para sa pagbibigay-kahulugan sa mga resulta ng pagsusulit na ito. Ang mga inirerekomendang pamantayan ay ibinibigay sa Talahanayan 7.

Batay sa mga pamantayang ito, lahat ng sample ng HIV positive sera (n=428) ay natukoy na positibo sa “DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV1”. Sa 16 na sample ng standard panel na naglalaman ng mga antibodies sa HIV 1, 14 ang natukoy na positibo at 2 ang natukoy na hindi tiyak. Lahat ng 8 sample mula sa standard panel na naglalaman ng mga antibodies sa HIV 2 ay natukoy na positibo. Sa 10 mga sample ng panloob na panel na naglalaman ng mga antibodies sa HIV 1, 7 ang natukoy na positibo at 3 ay tinutukoy na hindi tiyak.

Ang mga pag-aaral sa pagiging sensitibo ng sistema ng pagsubok na "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1" ay isinagawa din na may sera ng dugo mula sa mga pasyente na may positibong resulta sa mga sistema ng pagsusuri na may kaugnayan sa enzyme na immunosorbent na sabay-sabay na nakakakita ng mga antibodies at p24 antigen, at hindi tiyak sa immunoblot. Isang kabuuan ng 123 tulad ng mga sample ang nasubok. Ang data ay ipinakita sa Talahanayan 8.

Kapag sinusuri ang sera na may hindi tiyak na resulta ng immunoblot (n=123) sa “DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTRUM+AGr24 HIV 1”, 72 sample (58.5%) ang nagpakita ng positibong resulta. Sa mga ito, 26 sera (21.1%) ay positibo lamang para sa p24, 20 (16.3%) - para lamang sa mga antibodies, 16 (13%) - para sa p24 na may mga antibodies sa isa sa mga protina, 10 (8.1%) - sa p24 na may antibodies sa dalawa o higit pang mga protina. Kaya, ang pagsubok lamang para sa mga antibodies (nang walang nakitang p24) ay makikilala ang 30 sample (24.4%) bilang positibo. Ang pagtuklas ng p24 antigen sa pagsubok ay nagbigay-daan sa karagdagang 42 sample (34.1%) na matukoy bilang positibo.

Upang masuri ang pagtitiyak ng sistema ng pagsubok, ginamit ang isang karaniwang panel ng sera na hindi naglalaman ng mga antibodies sa HIV 1, 2 (n=20); mga sample ng serum ng dugo mula sa mga malulusog na donor (n=610), mga sample ng serum ng dugo mula sa mga pasyenteng may iba't ibang nakakahawang sakit (n=224) na walang kaugnayan sa HIV; mga sample ng serum ng dugo mula sa mga pasyente na may iba't ibang hindi nakakahawang sakit - trauma, sakit ng cardiovascular system, oncology (n=35); mga sample ng serum ng dugo mula sa mga buntis na kababaihan (n=40). Isang kabuuan ng 929 na mga sample ang nasubok. Isang sample mula sa blood sera ng mga malulusog na donor ang nagpakita ng maling positibong resulta - nakita ang mga antibodies sa gp41 at p24. 7 sample ng blood sera mula sa mga malusog na donor at 2 sample ng blood sera mula sa mga pasyenteng may mga nakakahawang sakit na walang kaugnayan sa HIV ay nagpakita ng false positive na resulta para sa p24.

Upang masuri ang pagtitiyak ng sistema ng pagsubok, ginamit ang isang karaniwang panel ng mga negatibong sample (OSO 42-28-214-94-02p, p. 009). Ang pagtitiyak ay 100%.

Kaya, ipinakita ng mga pag-aaral na ang pagtitiyak ng sistema ng pagsubok na "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24 HIV 1" ay 99% kapag sinusuri ang mga sample ng serum ng dugo mula sa mga normal na donor at mga pasyente na may iba't ibang mga nakakahawang sakit at somatic. .

Ang data na nakuha ay nagpapakita ng mataas na diagnostic na kahusayan ng binuo na sistema ng pagsubok na "DS-ELISA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR+AGr24 HIV 1". Ang sistema ng pagsubok ay maaaring gamitin upang tuklasin ang mga antibodies sa mga indibidwal na protina ng HIV na uri 1 at 2 at ang HIV1 p24 antigen upang kumpirmahin ang isang positibong resulta ng screening gamit ang mga sistema ng pagsubok na nagde-detect ng mga antibodies, o mga sistema ng pagsubok na sabay-sabay na nakakakita ng mga antibodies at HIV1 p24 antigen. Ang sistema ng pagsubok ay maaaring gamitin bilang isang alternatibo sa immunoblot test upang kumpirmahin ang mga positibong resulta, gayundin upang pag-aralan ang dynamics ng HIV antibodies at p24 antigen sa iba't ibang yugto ng impeksyon.

MGA BEHEBANG NG PAGSUSULIT

1. Confirmatory enzyme immunoassay test sa tablet format

2. Confirmatory test na pinagsasama ang pagpapasiya ng HIV 1, 2 antibody spectrum at HIV 1 p24 antigen

3. Pagtuklas ng mga antibodies ng lahat ng klase ng Ig

4. Ang pagiging sensitibo para sa pagtukoy ng p24 ay hindi bababa sa 5 pg/ml

5. Binabawasan ang hindi tiyak na mga resulta kumpara sa immunoblotting

6. Oras ng pagsusuri - 1 oras 25 minuto (immunoblot - mula 3 hanggang 20 oras)

7. Visual na pagtatasa ng pagdaragdag ng lahat ng mga bahagi at mga sample.

1. Isang enzyme-linked immunosorbent test system para sa pagtukoy ng spectrum ng antibodies sa human immunodeficiency virus (HIV) ng una at pangalawang uri, ang unang uri ng grupo O at pagtukoy ng p24 antigen sa human immunodeficiency virus ng unang uri p24, na nailalarawan na may kasama itong immunosorbent batay sa immunodeficiency virus antigens ng tao, na kumakatawan sa gp41 (env HIV-1 at HIV-2 group O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV -2), mga antibodies sa HIV 1 antigen p24, at detecting reagents, habang ang mga nabanggit sa itaas na HIV antigens at HIV antibodies ay inilalagay sa iba't ibang balon ng mga plato para sa enzyme-linked immunosorbent assay.

2. Enzyme immunoassay test system ayon sa claim 1, na nailalarawan sa 96-well polystyrene collapsible o non-separable plates para sa enzyme immunoassay ay ginagamit para sa sorption.

Pangkalahatang impormasyon tungkol sa pag-aaral

Ang HIV (human immunodeficiency virus) ay isang virus ng pamilyang retrovirus na nakakahawa sa mga selula ng immune system ng tao (CD4, T helper cells). Nagdudulot ng AIDS.

Ang HIV-1 ay ang pinakakaraniwang uri ng virus, kadalasang matatagpuan sa Russia, USA, Europe, Japan at Australia (karaniwang subtype B).

Ang HIV-2 ay isang bihirang uri, karaniwan sa West Africa.

Upang masuri ang human immunodeficiency virus, ginagamit ang isang ika-apat na henerasyon na pinagsamang sistema ng pagsubok, na may kakayahang makakita ng impeksyon sa HIV sa loob ng 2 linggo pagkatapos makapasok ang virus sa dugo, habang ang mga sistema ng pagsubok sa unang henerasyon ay ginagawa ito 6-12 linggo lamang pagkatapos ng impeksiyon.

Ang bentahe ng pinagsamang pagsusuri sa HIV na ito ay ang pagtuklas, salamat sa paggamit ng mga antibodies sa HIV-1 p24 bilang mga reagents, ng tiyak na p24 antigen (viral capsid protein), na maaaring makita ng pagsusulit na ito sa loob ng 1-4 na linggo mula sa sandali ng impeksyon, i.e. kahit na bago ang seroconversion, na makabuluhang nagpapaikli sa "panahon ng window".

Bilang karagdagan, ang HIV test na ito ay nakakakita ng mga antibodies sa HIV-1 at HIV-2 sa dugo (gamit ang antigen-antibody reaction), na ginawa sa sapat na dami upang matukoy ng sistema ng pagsubok 2-8 linggo pagkatapos ng impeksiyon.

Pagkatapos ng seroconversion, ang mga antibodies ay magsisimulang magbigkis sa p24 antigen, na nagreresulta sa isang positibong pagsusuri sa antibody ng HIV at isang negatibong pagsusuri sa p24. Gayunpaman, pagkaraan ng ilang panahon, ang parehong mga antibodies at antigen ay makikita sa dugo sa parehong oras. Sa yugto ng pagtatapos, ang isang pagsubok sa AIDS para sa mga antibodies sa HIV ay maaaring magbigay ng negatibong resulta, dahil ang mekanismo ng paggawa ng antibody ay nagambala.

Mga yugto ng impeksyon sa HIV

1. Ang panahon ng pagpapapisa ng itlog, o ang "seronegative window period," ay ang oras mula sa sandali ng impeksyon hanggang sa pagbuo ng mga proteksiyon na antibodies sa virus sa dugo, kapag ang mga pagsusuri para sa mga antibodies sa HIV ay negatibo, ngunit ang tao ay maaari nang magpadala ng virus. sa ibang tao. Ang tagal ng panahong ito ay mula 2 linggo hanggang 6 na buwan.
2. Ang panahon ng talamak na impeksyon sa HIV ay nagsisimula sa average na 2-4 na linggo mula sa sandali ng impeksyon at tumatagal ng humigit-kumulang 2-3 linggo. Sa yugtong ito, ang ilang tao ay maaaring magkaroon ng hindi tiyak na mga sintomas na tulad ng trangkaso dahil sa aktibong pagtitiklop ng virus.
3. Ang nakatagong yugto ay asymptomatic, ngunit sa panahon nito ay may unti-unting pagbaba sa kaligtasan sa sakit at pagtaas ng dami ng virus sa dugo.
4. Ang AIDS (acquired immunodeficiency syndrome) ay ang huling yugto ng pag-unlad ng impeksyon sa HIV, na kung saan ay nailalarawan sa pamamagitan ng matinding pagsugpo sa immune system, pati na rin ang mga magkakatulad na sakit, encephalopathy o cancer.

Sa kabila ng katotohanan na ang impeksyon sa HIV ay walang lunas, ngayon ay mayroong mataas na aktibong antiretroviral therapy (ART), na maaaring makabuluhang pahabain ang buhay ng isang taong nahawaan ng HIV at mapabuti ang kalidad nito.

Ang pagsusulit na ito ay may partikular na mataas na halaga ng diagnostic kung ang impeksyon sa HIV ay nangyari ilang sandali bago ang oras ng pagsusuri (2-4 na linggo).

Ano ang ginagamit ng pananaliksik?

Ang pagsusuri ay ginagamit para sa maagang pagsusuri ng HIV, na nagpapahintulot sa pagpigil sa karagdagang paghahatid ng virus sa ibang mga tao, pati na rin ang napapanahong pagsisimula ng antiretroviral therapy at paggamot ng mga sakit na nakakatulong sa pag-unlad ng impeksyon sa HIV.

Kailan nakaiskedyul ang pag-aaral?

• Sa patuloy na mga sintomas (para sa 2-3 linggo) ng hindi kilalang etiology: mababang antas ng lagnat, pagtatae, pagpapawis sa gabi, biglaang pagbaba ng timbang, pinalaki na mga lymph node.
• Para sa paulit-ulit na impeksyon sa herpes, viral hepatitis, pneumonia, tuberculosis, toxoplasmosis.
• Kung ang pasyente ay dumaranas ng mga sakit na nakukuha sa pakikipagtalik (syphilis, chlamydia, gonorrhea, genital herpes, bacterial vaginosis).
• Kung ang pasyente ay nagkaroon ng hindi protektadong vaginal, anal o oral na pakikipagtalik sa maraming kasosyong sekswal, isang bagong kapareha, o isang kapareha na ang katayuan sa HIV ay hindi sigurado ng pasyente.
• Kapag ang pasyente ay sumailalim sa pagsasalin ng dugo ng donor (bagaman ang mga kaso ng impeksyon sa ganitong paraan ay halos hindi kasama, dahil ang dugo ay maingat na nasubok para sa pagkakaroon ng mga partikulo ng viral at sumasailalim sa espesyal na paggamot sa init).
• Kung ang pasyente ay nag-iniksyon ng mga gamot gamit ang mga instrumentong hindi pa sterile.
• Sa panahon ng pagbubuntis/pagpaplano ng pagbubuntis (pag-inom ng azidothymidine sa panahon ng pagbubuntis, caesarean section upang maiwasan ang paghahatid ng virus sa sanggol habang dumadaan sa kanal ng kapanganakan, at ang pag-iwas sa pagpapasuso ay binabawasan ang panganib ng paghahatid ng HIV ng ina-sa-anak mula 30% hanggang 1% ).
• Ang hindi sinasadyang pag-iniksyon gamit ang isang hiringgilya o iba pang bagay (halimbawa, isang medikal na instrumento) na naglalaman ng nahawaang dugo (sa mga ganitong kaso ang posibilidad ng impeksyon ay napakababa).

Ang pinakalaganap na virus sa mundo ngayon ay ang AIDS, isang virus mula sa subfamily ng mga retrovirus; tinatawag din silang mga lentivirus, o "mabagal". Sa katunayan, sa katawan ng tao nagsisimula silang magpakita ng aktibidad pagkatapos ng medyo mahabang panahon, humigit-kumulang 10 taon.

May mga immunodeficiencies ng una at pangalawang uri. Ngunit maaari nating ligtas na pag-usapan ang tungkol sa pagpapalawak ng unang uri ng virus. Sa sandaling nasa dugo at sumali sa cell na responsable para sa kaligtasan sa sakit, ang virus ay nagsisimulang dumami nang mabilis. Habang ang molekula ng CD4, na responsable para sa pagkilala nito, ay kinikilala ang mapanlinlang na kaaway, ito ay namamahala upang mahawahan ang buong katawan. Samakatuwid, kung mas maaga itong masuri, mas malaki ang pagkakataon ng pasyente na makatanggap ng napapanahong paggamot at mabuhay nang mas matagal.

Kung ang isang tao ay may dahilan upang subukan ang kanyang sarili para sa AIDS, dapat itong gawin kaagad. Kadalasan, ang batayan ng naturang diagnosis ay ang pagpapasiya ng mga antibodies sa immunodeficiency sa dugo - mga protina na lumitaw bilang isang reaksyon sa pagkakaroon ng virus, at nagsisimula silang mabuo sa panahon mula 1.5 hanggang 6 na buwan mula sa oras ng posible. impeksyon. Alinsunod dito, mas ipinapayong sumailalim sa mga diagnostic pagkatapos ng panahong ito.

Ang dami ng antibodies ay tinutukoy gamit ang isang pagsusuri na tinatawag na enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Ang pamamaraang ito ay pinagkakatiwalaan, ito ay medyo tumpak at lubos na sensitibo, ang mga bilang na ito ay higit sa 99.5%. Ang pharmaceutical market ay nag-aalok ng ilang diagnostic test kit para sa ELISA: CombiBest HIV, Anti-HIV 1 2, CombiBest anti-HIV, CombiBest anti-HIV 1 2, CombiBest anti-HIV 1 2 d 0172. Ang mga test system na ito ay nabibilang sa pangatlo henerasyon. Ang kawalan ng mga reagents na ito ay hindi nila laging nakikilala ang sakit nang maaga. Ang tao ay isa nang carrier ng virus, siya ay potensyal na mapanganib sa mga kasosyo, ngunit ang mga antibodies ay wala pa sa dugo.

Ang mga kit ay pangunahing nilagyan ng ilang mga pagsusuri upang magsagawa ng 12*8 o 192 na pagsusuri sa anti-HIV. Hindi inirerekomenda na gamitin ang mga ito sa iyong sarili. Ang paglalarawan ng mga gamot ay nagpapahiwatig na ang kanilang pangunahing layunin ay upang makita ang dami ng mga antibodies sa parehong uri ng AIDS. At tukuyin din ang mga antibodies ng lahat ng klase sa AIDS. Kung walang antibodies, kung gayon ang sakit ay hindi pa nasuri.

Ang ika-apat na henerasyon ng mga pagsubok ay "nakikita", bilang karagdagan sa mga antibodies, mga antigen ng AIDS; nagagawa nilang makita ang impeksiyon nang mas maaga kaysa sa mga pamamaraan ng ikatlong henerasyon. Para sa paghahambing: Ang antigen ng HIV ay nasa dugo simula sa ika-5 araw, at ang mga unang antibodies ay lilitaw nang hindi mas maaga kaysa sa isang buwan mamaya. Ang CombiBest HIV 1, 2 AG/AT (set 1) at CombiBest HIV 1, 2 AG/AT (set 2) ay nabibilang sa 4th generation test. Gamit ang isang set ng mga reagents na ito, ang mga antibodies sa type 1, 2 at p24 antigen ay natutukoy sa pamamagitan ng pagsusuri sa serum o plasma ng dugo ng tao. Maraming bansa ang gumagamit ng ELISA testing ng ika-4 na henerasyon, na tinatawag ding Antigen/Antibody, na dinaglat bilang AGAT.

Ang pagsubok ay isinasagawa nang hindi nagpapakilala.

Ang napapanahong pagsusuri ng impeksyon sa HIV ay nagiging isang napakahalagang panukala, dahil ang maagang pagsisimula ng paggamot ay maaaring higit na matukoy ang karagdagang pag-unlad ng sakit at pahabain ang buhay ng pasyente. Sa nakalipas na mga taon, nagkaroon ng makabuluhang pag-unlad sa pagtukoy sa kakila-kilabot na sakit na ito: ang mas lumang mga sistema ng pagsubok ay pinapalitan ng mga mas advanced, ang mga paraan ng pagsusuri ay nagiging mas madaling ma-access, at ang kanilang katumpakan ay tumataas nang malaki.

Sa artikulong ito ay pag-uusapan natin ang tungkol sa mga modernong pamamaraan para sa pag-diagnose ng impeksyon sa HIV, ang kaalaman kung saan ay kapaki-pakinabang para sa napapanahong paggamot ng problemang ito at pagpapanatili ng isang normal na kalidad ng buhay para sa pasyente.

Mga pamamaraan ng diagnostic ng HIV

Sa Russia, ang isang karaniwang pamamaraan ay isinasagawa upang masuri ang impeksyon sa HIV, na kinabibilangan ng dalawang antas:

• ELISA test system (pagsusuri ng screening);
• immunoblotting (IB).

Ang iba pang mga pamamaraan ay maaari ding gamitin para sa diagnosis:

• mabilis na pagsusulit.

Mga sistema ng pagsubok ng ELISA

Sa unang yugto ng diagnosis, isang screening test (ELISA) ang ginagamit upang makita ang impeksyon sa HIV, na batay sa mga protina ng HIV na nilikha sa mga laboratoryo na kumukuha ng mga partikular na antibodies na ginawa sa katawan bilang tugon sa impeksiyon. Matapos ang kanilang pakikipag-ugnayan sa mga reagents (enzymes) ng sistema ng pagsubok, nagbabago ang kulay ng indicator. Susunod, ang mga pagbabago sa kulay na ito ay pinoproseso gamit ang mga espesyal na kagamitan, na tumutukoy sa resulta ng pagsusuri na isinagawa.

Ang ganitong mga pagsusuri sa ELISA ay maaaring magpakita ng mga resulta sa loob ng ilang linggo pagkatapos ng pagpapakilala ng impeksyon sa HIV. Ang pagsubok na ito ay hindi tumutukoy sa pagkakaroon ng virus, ngunit nakikita ang paggawa ng mga antibodies dito. Minsan, sa katawan ng tao, ang produksyon ng mga antibodies sa HIV ay nagsisimula pagkatapos ng 2 linggo pagkatapos ng impeksyon, ngunit sa karamihan ng mga tao ay ginawa sila sa ibang araw, pagkatapos ng 3-6 na linggo.

Mayroong apat na henerasyon ng mga pagsusuri sa ELISA na may iba't ibang sensitibo. Sa mga nagdaang taon, ang mga sistema ng pagsubok sa ikatlo at ikaapat na henerasyon ay lalong ginagamit, na nakabatay sa mga sintetikong peptide o mga recombinant na protina at may higit na pagtitiyak at katumpakan. Magagamit ang mga ito upang masuri ang impeksyon sa HIV, subaybayan ang pagkalat ng HIV, at tiyakin ang kaligtasan kapag sinusuri ang donasyong dugo. Ang katumpakan ng henerasyon III at IV ELISA test system ay 93-99% (mga pagsubok na ginawa sa Kanlurang Europa ay mas sensitibo - 99%).

Upang magsagawa ng ELISA test, 5 ml ng dugo ang kinuha mula sa ugat ng pasyente. Hindi bababa sa 8 oras ang dapat lumipas sa pagitan ng huling pagkain at ang pagsusuri (karaniwan itong ginagawa sa umaga sa walang laman na tiyan). Inirerekomenda na kumuha ng naturang pagsusuri nang hindi mas maaga kaysa sa 3 linggo pagkatapos ng pinaghihinalaang impeksyon (halimbawa, pagkatapos ng hindi protektadong pakikipagtalik sa isang bagong kasosyo sa sekswal).

Ang mga resulta ng pagsusulit sa ELISA ay makukuha sa loob ng 2-10 araw:

• negatibong resulta: nagpapahiwatig ng kawalan ng impeksyon sa HIV at hindi nangangailangan ng pakikipag-ugnayan sa isang espesyalista;
• maling negatibong resulta: maaaring maobserbahan sa mga unang yugto ng impeksyon (hanggang 3 linggo), sa mga huling yugto ng AIDS na may matinding pagsugpo sa immune system at may hindi tamang paghahanda ng dugo;
• maling positibong resulta: maaaring maobserbahan sa ilang mga sakit at sa kaso ng hindi tamang paghahanda ng dugo;
• positibong resulta: nagpapahiwatig ng impeksyon sa HIV, nangangailangan ng pagsasagawa ng IB at ang pasyente ay makipag-ugnayan sa isang espesyalista sa AIDS center.

Bakit maaaring magbigay ng maling positibong resulta ang pagsusuri sa ELISA?

Ang maling positibong resulta ng pagsusuri sa HIV ELISA ay maaaring mangyari dahil sa hindi tamang pagproseso ng dugo o sa mga pasyenteng may mga sumusunod na kondisyon at sakit:

• multiple myeloma;
• mga nakakahawang sakit na dulot ng Epstein-Barr virus;
• estado pagkatapos ;
• mga sakit sa autoimmune;
• laban sa background ng pagbubuntis;
• kondisyon pagkatapos ng pagbabakuna.

Para sa mga kadahilanang inilarawan sa itaas, ang mga nonspecific na cross-reacting antibodies ay maaaring naroroon sa dugo, ang paggawa nito ay hindi na-provoke ng impeksyon sa HIV.

Sa mga nagdaang taon, ang dalas ng mga maling-positibong resulta ay makabuluhang nabawasan dahil sa paggamit ng mga sistema ng pagsubok ng henerasyon III at IV, na naglalaman ng mas sensitibong peptide at mga recombinant na protina (sila ay na-synthesize gamit ang genetic engineering sa vitro). Matapos ang pagpapakilala ng mga naturang pagsusuri sa ELISA, ang dalas ng mga maling positibong resulta ay bumaba nang malaki at humigit-kumulang 0.02-0.5%.

Ang isang maling positibong resulta ay hindi nangangahulugan na ang tao ay nahawaan ng HIV. Sa ganitong mga kaso, inirerekomenda ng WHO ang pagsasagawa ng isa pang ELISA test (kinakailangang IV generation).

Ang dugo ng pasyente ay ipinadala sa isang reference o arbitration laboratory na may markang "repeat" at sinusuri gamit ang IV generation ELISA test system. Kung ang resulta ng bagong pagsusuri ay negatibo, ang unang resulta ay itinuturing na mali (false positive) at ang IS ay hindi isinasagawa. Kung ang resulta ay positibo o kaduda-dudang sa panahon ng ikalawang pagsusuri, ang pasyente ay dapat sumailalim sa IB pagkatapos ng 4-6 na linggo upang kumpirmahin o pabulaanan ang impeksyon sa HIV.

Immune blotting

Ang isang tiyak na diagnosis ng impeksyon sa HIV ay maaari lamang gawin pagkatapos makakuha ng isang positibong resulta ng immunoblotting (IB). Upang maisakatuparan ito, isang nitrocellulose strip ang ginagamit, kung saan inilalapat ang mga viral protein.

Ang blood sampling para sa IB ay isinasagawa mula sa isang ugat. Susunod, sumasailalim ito sa espesyal na pagproseso at ang mga protina na nakapaloob sa suwero nito ay pinaghihiwalay sa isang espesyal na gel ayon sa kanilang singil at molekular na timbang (ang pagmamanipula ay isinasagawa gamit ang mga espesyal na kagamitan sa ilalim ng impluwensya ng isang electric field). Ang isang nitrocellulose strip ay inilalapat sa serum gel ng dugo at ang blotting ("blotting") ay isinasagawa sa isang espesyal na silid. Ang strip ay pinoproseso at kung ang mga materyales na ginamit ay naglalaman ng mga antibodies sa HIV, sila ay nagbubuklod sa mga antigenic na banda sa IB at lumilitaw bilang mga linya.

Ang IB ay itinuturing na positibo kung:

• ayon sa pamantayan ng American CDC - mayroong dalawa o tatlong linya na gp41, p24, gp120/gp160 sa strip;
• ayon sa pamantayan ng American FDA, ang strip ay may dalawang linya na p24, p31 at isang linya na gp41 o gp120/gp160.

Sa 99.9% ng mga kaso, ang isang positibong resulta ng IB ay nagpapahiwatig ng impeksyon sa HIV.

Kung walang mga linya, ang IB ay negatibo.

Kapag tinutukoy ang mga linya na may gr160, gr120 at gr41, nagdududa ang IB. Maaaring mangyari ang resultang ito kapag:

• mga sakit sa oncological;
• pagbubuntis;
• madalas na pagsasalin ng dugo.

Sa ganitong mga kaso, inirerekumenda na ulitin ang pag-aaral gamit ang isang kit mula sa ibang kumpanya. Kung pagkatapos ng karagdagang IB ang resulta ay nananatiling nagdududa, kung gayon ang pagmamasid ay kinakailangan para sa anim na buwan (Isinasagawa ang IB tuwing 3 buwan).

Polymerase chain reaction

Maaaring makita ng PCR test ang RNA ng virus. Ang pagiging sensitibo nito ay medyo mataas at nagbibigay-daan ito sa pagtuklas ng impeksyon sa HIV sa loob ng 10 araw pagkatapos ng impeksyon. Sa ilang mga kaso, ang PCR ay maaaring magbigay ng mga false-positive na resulta, dahil ang mataas na sensitivity nito ay maaari ring tumugon sa mga antibodies sa iba pang mga impeksiyon.

Ang diagnostic technique na ito ay mahal at nangangailangan ng espesyal na kagamitan at mataas na kwalipikadong mga espesyalista. Ang mga kadahilanang ito ay hindi ginagawang posible na magsagawa ng mass testing sa populasyon.

Ginagamit ang PCR sa mga sumusunod na kaso:

• upang makita ang HIV sa mga bagong silang na ipinanganak mula sa mga ina na nahawaan ng HIV;
• upang matukoy ang HIV sa "panahon ng window" o sa kaso ng pagdududa IB;
• upang makontrol ang konsentrasyon ng HIV sa dugo;
• para sa pag-aaral ng donor blood.

Ang PCR test lamang ay hindi gumagawa ng diagnosis ng HIV, ngunit isinasagawa bilang karagdagang diagnostic na paraan upang malutas ang mga kontrobersyal na sitwasyon.

Ipahayag ang mga pamamaraan

Ang isa sa mga inobasyon sa HIV diagnostics ay ang mabilis na pagsusuri, ang mga resulta nito ay maaaring masuri sa loob ng 10-15 minuto. Ang pinaka-epektibo at tumpak na mga resulta ay nakuha gamit ang mga immunochromatographic na pagsusuri batay sa prinsipyo ng daloy ng capillary. Ang mga ito ay mga espesyal na piraso kung saan inilapat ang dugo o iba pang mga likido sa pagsubok (laway, ihi). Kung ang mga antibodies sa HIV ay naroroon, pagkatapos ng 10-15 minuto isang kulay at control strip ang lilitaw sa pagsusuri - isang positibong resulta. Kung negatibo ang resulta, ang control strip lang ang lalabas.

Tulad ng mga pagsusulit sa ELISA, ang mga resulta ng mabilis na pagsusuri ay dapat kumpirmahin ng pagsusuri ng IB. Pagkatapos lamang nito ay maaaring gawin ang diagnosis ng impeksyon sa HIV.

May available na mga rapid home testing kit. Ang pagsubok sa OraSure Technologies1 (USA) ay inaprubahan ng FDA, magagamit sa counter at maaaring magamit upang tuklasin ang HIV. Pagkatapos ng pagsusuri, kung positibo ang resulta, inirerekomenda ang pasyente na sumailalim sa pagsusuri sa isang dalubhasang sentro upang kumpirmahin ang diagnosis.

Ang iba pang mga pagsusuri para sa paggamit sa bahay ay hindi pa naaaprubahan ng FDA at ang kanilang mga resulta ay maaaring napakaduda.

Sa kabila ng katotohanan na ang mga mabilis na pagsusuri ay mas mababa sa katumpakan sa IV generation na mga pagsubok sa ELISA, ang mga ito ay malawakang ginagamit para sa karagdagang pagsusuri ng populasyon.

Ang mga pagsusuri upang makita ang impeksyon sa HIV ay maaaring gawin sa alinmang klinika, central district hospital o mga espesyal na sentro ng AIDS. Sa teritoryo ng Russia ang mga ito ay ganap na kumpidensyal, o hindi nagpapakilala. Ang bawat pasyente ay maaaring asahan na makatanggap ng medikal o sikolohikal na konsultasyon bago o pagkatapos ng pagsusulit. Kakailanganin mo lamang magbayad para sa mga pagsusuri sa HIV sa mga komersyal na institusyong medikal, habang sa mga pampublikong klinika at ospital ay isinasagawa ang mga ito nang walang bayad.

Basahin ang tungkol sa mga paraan kung saan maaari kang mahawaan ng HIV at kung anong mga alamat ang umiiral tungkol sa mga posibilidad na mahawa.

Paglalarawan

Paghahanda

Mga indikasyon

Interpretasyon ng mga resulta

Paglalarawan

Paraan ng pagpapasiya Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).

Materyal na pinag-aaralan Serum ng dugo

Available ang pagbisita sa bahay

Pinagsamang pagtuklas ng mga antibodies sa HIV type 1 at 2 at HIV p24 antigen, qualitative test.

Pansin. Sa kaso ng mga positibo at kaduda-dudang reaksyon, ang panahon para sa pagpapalabas ng mga resulta ay maaaring pahabain sa 10 araw ng trabaho. Ang HIV (human immunodeficiency virus), na nagdudulot ng AIDS (acquired immunodeficiency syndrome), ay kabilang sa pamilya ng mga retrovirus. Naililipat ito mula sa tao patungo sa tao sa pamamagitan ng paggamit ng mga kontaminadong karayom ​​at hiringgilya para sa intravenous na pangangasiwa ng droga o mga pamamaraang panterapeutika, sa panahon ng pakikipagtalik, parehong heterosexual at homosexual. Ang paghahatid ng virus ay maaaring mangyari sa pamamagitan ng pagsasalin ng nahawaang dugo at mga produkto nito, donasyon ng mga organo o seminal fluid, at sa mga manggagawang medikal - sa pamamagitan ng pinsala mula sa kontaminadong mga karayom ​​o instrumento. Ang impeksyon sa HIV ay posible sa pamamagitan ng paghahatid mula sa isang nahawaang ina patungo sa isang bata (vertical na ruta), bagaman ang mga modernong paraan ng pag-iwas gamit ang antiretroviral therapy, kung susundin ang lahat ng mga rekomendasyon, ay maaaring mabawasan ang panganib na ito sa pinakamababa.

Ang proseso ng pakikipag-ugnayan ng isang virus sa isang cell ay may kasamang ilang mga yugto: pagbubuklod ng virus sa cell, paglabas nito mula sa sobre, pagtagos sa cytoplasm, synthesis ng DNA gamit ang viral RNA, pagsasama ng viral DNA sa genome ng ang host cell. Pagkatapos nito, nagsisimula ang nakatagong yugto ng impeksiyon. Sa ganitong estado, ang proviral DNA ay maaaring umiral nang ilang panahon nang hindi nagpapakita ng aktibidad at hindi naaapektuhan ang buhay ng host cell. Habang walang pagpapahayag ng mga viral protein, walang immune response sa virus. Ang mga antibodies sa HIV, na nagpapakilala sa immune response ng katawan, ay lumilitaw pagkatapos ng pag-activate ng viral DNA at ang simula ng aktibong pagpaparami ng virus. Ang tagal ng latent period ay nakasalalay sa isang bilang ng mga kadahilanan, kabilang ang mga indibidwal na genetic na katangian ng organismo.

Ang mga antibodies sa HIV ay maaaring lumitaw simula sa ikalawang linggo pagkatapos ng impeksiyon; tumataas ang kanilang nilalaman sa loob ng 2-4 na linggo at nananatili sa loob ng maraming taon. Sa 90-95% ng mga nahawaang tao ay lumilitaw sila sa unang tatlong buwan pagkatapos ng impeksiyon, sa 5-9% - sa panahon mula tatlo hanggang anim na buwan, sa 0.5-1% - sa ibang araw.

Sa mga unang linggo ng impeksyon, kahit na bago ang paglitaw ng mga antibodies sa virus (ibig sabihin, bago ang seroconversion), ang pagkakaroon ng mga antigen ng HIV, kabilang ang p24 capsid protein nito, ay maaaring makita sa mga sample ng serum o plasma. Nang maglaon, pagkatapos ng seroconversion, kadalasan ay hindi na ito matukoy.

4th generation combined test system, na kinabibilangan ng HIV Ag/Ab Combo test (Architect, Abbott), ay nakatuklas ng parehong antibodies sa HIV type 1 at 2 at HIV p24 antigen, na nagbibigay-daan para sa maagang pagtuklas ng impeksyon. Ang mga espesyal na katangian ng screening test na ginamit sa laboratoryo ng INVITRO upang makita ang impeksyon sa HIV ay kinabibilangan ng mataas na pagtitiyak ng pag-aaral (> 99.5%); Ang assay ay 100% sensitibo sa mga antibodies na katangian ng panahon ng seroconversion, at ang sensitivity ng pagsubok sa p24 antigen ay humigit-kumulang 18 pg/ml.

Ang pamamaraan para sa pagsasagawa ng pagsusuri sa laboratoryo para sa HIV ay mahigpit na kinokontrol ng mga utos ng Ministry of Health ng Russian Federation at kasama ang yugto ng isang screening (pagpili) na pag-aaral ng pagkakaroon ng mga antibodies sa HIV gamit ang enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) mga pamamaraan na naaprubahan para sa paggamit, at ang yugto ng isang pagpapatunay (pagkumpirma) mas detalyadong pag-aaral sa laboratoryo ng sentro ng AIDS ng lungsod. Dapat pansinin na kahit na ang pinakamahusay na screening ELISA system ay hindi ginagarantiyahan ang 100% na pagtitiyak, iyon ay, mayroong ilang posibilidad na makakuha ng hindi tiyak, maling positibong mga resulta na nauugnay sa mga katangian ng serum ng dugo ng pasyente. Samakatuwid, ang isang positibong resulta ng isang screening na pagsusuri sa ELISA ay maaaring hindi makumpirma sa mga confirmatory test, pagkatapos nito ay bibigyan ang pasyente ng negatibo o hindi tiyak na resulta. Kung ang resulta ng confirmatory study ay hindi sigurado, ang pagsusuri ay dapat na ulitin sa paglipas ng panahon pagkatapos ng 2-3 linggo.

Ang pagsusuri sa laboratoryo ng impeksyon sa HIV sa mga batang ipinanganak ng mga ina na nahawaan ng HIV ay may sariling mga katangian. Ang maternal antibodies sa HIV (IgG class) ay maaaring magpalipat-lipat sa kanilang dugo hanggang 18 buwan mula sa sandali ng kapanganakan. Ang kawalan ng antibodies sa HIV sa mga bagong silang ay hindi nangangahulugan na ang virus ay hindi nakapasok sa placental barrier. Ang mga anak ng mga ina na nahawaan ng HIV ay sasailalim sa pagsusuri sa laboratoryo ng diagnostic sa loob ng 36 na buwan pagkatapos ng kapanganakan.

Paghahanda

Walang kinakailangang espesyal na paghahanda. Inirerekomenda na kunin ang dugo nang hindi mas maaga kaysa sa 4 na oras pagkatapos ng huling pagkain. Ang mga pangkalahatang rekomendasyon para sa paghahanda para sa pananaliksik ay matatagpuan. Maipapayo na magsagawa ng pagsusuri upang matukoy ang antigen at antibodies sa HIV nang hindi mas maaga kaysa sa dalawang linggo pagkatapos ng posibleng impeksyon, na may paulit-ulit na pagsusuri pagkatapos ng tatlo at anim na linggo kung sakaling magkaroon ng negatibong resulta. Ang mga aplikasyon para sa pagsasaliksik sa INVITRO LLC ay pinupunan gamit ang isang pasaporte o isang dokumento na pinapalitan ito (migration card, pansamantalang pagpaparehistro sa lugar ng paninirahan, ID ng mga tauhan ng militar, sertipiko mula sa opisina ng pasaporte kung sakaling mawala ang isang pasaporte, registration card mula sa isang hotel). Ang ipinakita na dokumento ay kinakailangang naglalaman ng impormasyon tungkol sa pansamantala o permanenteng pagpaparehistro sa Russian Federation at isang litrato. Sa kawalan ng isang pasaporte (isang dokumento na pinapalitan ito), ang pasyente ay may karapatang punan ang isang hindi kilalang aplikasyon para sa donasyon ng biomaterial. Sa panahon ng isang hindi kilalang pagsusuri, isang aplikasyon at isang sample ng biomaterial na natanggap mula sa kliyente, isang numero ang itinalaga na alam lamang ng pasyente at ng mga medikal na kawani na nag-order. ! Ang mga resulta ng mga pag-aaral na isinagawa nang hindi nagpapakilala ay hindi maaaring isumite para sa ospital, propesyonal na eksaminasyon at hindi napapailalim sa pagpaparehistro sa ORUIB.

Mga pahiwatig para sa paggamit

• Pinalaki ang mga lymph node sa higit sa dalawang lugar.
• Leukopenia na may lymphopenia.
• Mga pawis sa gabi.
• Biglang pagbaba ng timbang na hindi alam ang dahilan.
• Pagtatae ng higit sa tatlong linggo ng hindi alam na dahilan.
• Lagnat na hindi alam ang dahilan.
• Pagpaplano ng pagbubuntis.
• Preoperative paghahanda, ospital.
• Ang pagtuklas ng mga sumusunod na impeksyon o ang kanilang mga kumbinasyon: tuberculosis, manifest toxoplasmosis, madalas na paulit-ulit na impeksyon sa herpesvirus, candidiasis ng mga panloob na organo, paulit-ulit na herpes zoster neuralgia, pneumonia na sanhi ng mycoplasmas, pneumocystis o legionella.
• Kaposi's sarcoma sa murang edad.
• Mga kaswal na pakikipagtalik.

Interpretasyon ng mga resulta

Ang interpretasyon ng mga resulta ng pananaliksik ay naglalaman ng impormasyon para sa dumadating na manggagamot at hindi isang diagnosis. Ang impormasyon sa seksyong ito ay hindi dapat gamitin para sa self-diagnosis o self-treatment. Ang doktor ay gumagawa ng isang tumpak na diagnosis gamit ang parehong mga resulta ng pagsusuring ito at ang kinakailangang impormasyon mula sa iba pang mga mapagkukunan: kasaysayan ng medikal, mga resulta ng iba pang mga pagsusuri, atbp.

Mga yunit ng pagsukat sa Independent Laboratory INVITRO: qualitative test. Form ng pagtatanghal ng mga resulta: sa kawalan ng mga antibodies sa HIV 1 at 2 at p24 antigen, ang sagot ay "negatibo". Kung ang mga antibodies sa HIV o isang antigen ay nakita sa isang screening enzyme-linked immunosorbent test, isang serum sample ang ipapadala para sa kumpirmasyon sa pamamagitan ng immunoblotting sa city AIDS center, na nagbe-verify ng mga positibo at hindi tiyak na resulta.

Positibong resulta:

1. impeksyon sa HIV;
2. maling positibong resulta na nangangailangan ng paulit-ulit o karagdagang pag-aaral *);
3. ang pag-aaral ay hindi nagbibigay kaalaman sa mga batang wala pang 18 buwang ipinanganak mula sa mga ina na nahawaan ng HIV.

*Ang pagiging tiyak ng screening test system Antibodies to HIV 1 at 2 at HIV antigen 1 at 2 (HIV Ag/Ab Combo, Abbott), ayon sa mga pagtatantya na ibinigay ng tagagawa ng reagent, ay humigit-kumulang 99.6% sa pangkalahatang populasyon at sa pangkat ng mga pasyente na may mga potensyal na interferences (infections HBV, HCV, Rubella, HAV, EBV, HNLV-I, HTLV-II, E. coli, Chl. trach., atbp., autoimmune pathologies (kabilang ang rheumatoid arthritis, ang pagkakaroon ng antinuclear antibodies) , pagbubuntis, mataas na antas ng IgG, IgM, monoclonal gammopathies, hemodialysis, maraming pagsasalin ng dugo).