Иммуноферментные тест-системы «дс-ифа-hbeAg» и«дс-ифа-анти-hbe. Анализ на ВИЧ-инфекцию

30.06.2020

Цена: по запросу

Вы можете добавить товар в корзину, указав количество

Производитель: Диагностические системы

Страна: Россия

Ед. изм.: набор

Вид упаковки: картонная коробка

Артикул: L-1823

Описание

Тест-система иммуноферментная для выявления антител классов G, M и А к Treponema pallidum (T. pallidum) в сыворотке (плазме) крови и ликворе человека с целью диагностики сифилиса, полный набор реагентов на 96х2 определения, подходит для ручных методик и постановки на автоматических анализаторах. В основе метода лежит принцип "ловушки", заключающийся в том, что специфические антитрепонемные антитела всех классов, присутствующие в образце, связываются одновременно с рекомбинантными антигенами - аналогами иммунодоминантных белков T.pallidum, зафиксированными в лунках планшета, и с теми же антигенами, меченными пероксидазой хрена, при совместной инкубации образцов сыворотки (плазмы) крови или ликворе человека и конъюгата. Изменение цвета субстратно-хромогенной смеси, содержащей ТМБ, при внесении ее в лунки планшета указывает на наличие в исследуемых образцах специфических антител к бледной трепонеме

Функциональное назначение

Выявление антител к Treponema pallidum играет важную роль при диагностике сифилиса, поскольку T.pallidum не может быть выделена из культуры клеток, а пробы для прямого определения возбудителя зачастую недоступны при латентных и поздних стадиях заболевания. В серодиагностике сифилиса используются используются нетрепонемные (РМП, RPR, VDRL) и трепонемные (РПГА, РИФ, ИФА) тесты. Иммуноферментные тесты для определения суммарных антител используются для массового скрининга донорской крови и для постановки диагноза сифилиса как составляющая часть комплекса серологических реакций. После успешно проведенной терапии реактивность трепонемных тестов в большинстве случаев сохраняется

Технические характеристики

Состав набора:
1. Планшет полистироловый 96-луночный разборный - 2 шт.,
2. Конъюгат - прозрачная желтая жидкость,
3. Контроль положительный - прозрачная красная жидкость,
4. Контроль отрицательный - прозрачная зеленая жидкость,
5. Промывочный раствор, концентрат, рН от 6,9 до 7,6,
6. ТМБ - прозрачная бесцветная жидкость,
7. Раствор субстрата - прозрачная бесцветная жидкость, pH ~4,2.
8. Стоп-реагент (0,2М),
9. Инструкция по применению и паспорт качества.
Условия хранения: при температуре +2...8°C, замораживание недопустимо.
Срок годности - 15 месяцев с даты производства, указанной на этикетке набора.
Соответствие требованиям ТУ 9398-182-05941003-2010.
Зарегистрировано в Росздравнадзор.

С.Н. ИГОЛКИНА, В.Ф. ПУЗЫРЕВ, Л.Г. ЗИНИНА, Н.М. ДЕНИСОВА, А.Н. БУРКОВ,

А.П. ОБРЯДИНА, Т.И. УЛАНОВА
ООО «Научно-производственное объединение «Диагностические системы»,

Нижний Новгород
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ «ДС-ИФА-HBeAg» и «ДС-ИФА-анти-HBe» ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ И ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ИСХОДОВ ОСТРОГО И ХРОНИЧЕСКОГО ГЕПАТИТА В
Гепатит В – вирусное инфекционное заболевание, характеризующееся тяжелым

воспалительным поражением печени . Около 1% летальных исходов наблюдается в

острый период болезни, в 4-10 % случаев происходит трансформация в хронический

процесс с возможным формированием в последующем цирроза печени и первичной

гепатокарциномы .

Несмотря на тенденцию к снижению заболеваемости острым гепатитом В, продолжает формироваться опасная в эпидемиологическом плане группа больных, которым впервые поставлен диагноз «хронический вирусный гепатит», а также группа носителей возбудителя заболевания. Сохраняется неблагополучный прогноз, связанный с высокой заболеваемостью гепатитом В среди населения репродуктивного возраста, а также среди подростков .

Поэтому, сейчас особенно актуальны вопросы лечения, профилактики и диагностики гепатита В. В настоящее время для детекции маркеров этой инфекции широко применяются методы иммуноферментного анализа. К числу важнейших серологических маркеров ВГВ относятся е-антиген (HBeAg) и антитела к е-антигену (анти-HBe). HBeAg ассоциируется с высокой инфицированностью крови, свидетельствуя об активной репликации вируса гепатита В (HBV). Установлено, что высокие титры HBeAg соответствуют высокой ДНК-полимеразной активности и всегда сочетаются с обнаружением полных частиц Дейна . При попадании сыворотки, содержащей HBeAg, в кровь здорового человека опасность заражения на много порядков выше, чем после наступления сероконверсии.

При остром гепатите В HBeAg обнаруживается в крови на ранних этапах инфекционного процесса уже при первых клинических проявлениях болезни, отставая на неделю от появления HBsAg. Острый гепатит В (ОГВ) циклического течения характеризуется кратковременной циркуляцией HBeAg. Вскоре, на 2-3 неделе желтушного периода появляются анти-HBe, что позволяет прогнозировать благоприятный исход заболевания .

Анти-HBe циркулируют в крови на протяжении 2-5 лет, реже несколько месяцев.

Наступление сероконверсии HBeAg-антиHBe знаменует резкое снижение активности

инфекционного процесса . Обнаружение HBeAg в крови пациентов после 2-х месяцев заболевания обозначает хронизацию патологического процесса . В этом случае анти-HBe могут образовываться спустя много лет после появления антител к HBcAg или вовсе не выявляться.

Появление анти-HBe может иметь неблагоприятное прогностическое значение в

остром периоде ВГВ при тяжелых формах, что соответствует мутации в pre-core зоне с

образованием HBV «e-» штамма .

Целью данной работы была разработка высокочувствительных и специфичных

иммуноферментных тест-систем для выявления HBeAg и анти-HBe и оценка их основных характеристик.

Материалы и методы.

1. Иммуноферментная тест-система «ДС-ИФА-HВeAg». Действующим началом теста

являются поликлональные антитела козы к рекомбинантному HBeAg, производства НПО «Диагностические системы», Нижний Новгород, сорбированные на твердую фазу, и конъюгат, представляющий собой поликлональные антитела козы к рекомбинантному HBeAg, меченные пероксидазой хрена, производства НПО «Диагностические системы», Нижний Новгород. Схема проведения анализа представляет собой одностадийный «сэндвич».Общая продолжительность реакции 1,5 часа. Образец сыворотки анализируется неразведенным.

2. Иммуноферментная тест-система «ДС-ИФА-анти-HBe». Основу теста составляют

рекомбинантный HBeAg (AHBV 102), производства НПО «Диагностические системы»,

Нижний Новгород, сорбированный на твердой фазе и конъюгат анти-IgG с пероксидазой хрена, производства «Сорбент Сервис», Москва. Реакция проходит в две стадии. К иммобилизованному антигену добавляют исследуемую сыворотку в разведении 1/10 и, после инкубации и удаления не связавшихся компонентов, проводят выявление специфических иммунокомплексов с помощью мышиных моноклональных антител против IgG человека, меченных пероксидазой хрена.

3. Для оценки разработанных тест-систем было использовано 2178 образцов сывороток

крови. Из них 480 образцов сывороток здоровых доноров. 1680 образцов представляют

собой образцы сывороток крови, содержащие различные маркеры вируса гепатита В.

Восемнадцать образцов были получены в динамике от больных с клиническим диагнозом «острый вирусный гепатит В». Предварительно все образцы были проверены на наличие HBsAg, HBeAg, анти-HBe, анти-HBc с помощью тест-систем производства НПО «Диагностические системы», Нижний Новгород: «ИФА-НВsAg/m», «ДС-ИФА-НВеAg», «ДС-ИФА-анти-HBe», «ИФА-анти-НВс».

4. Сравнительную оценку разработанных тест-систем осуществляли с помощью

коммерческого препарата «Monolisa HBe», производства BIO-RAD, Франция;

Результаты и обсуждение. В НПО «Диагностические системы» разработаны 2 новых диагностикума: «ДС-ИФА-HBeAg» и «ДС-ИФА-анти-HBe». Тест-система «ДС-ИФА-HBeAg» предназначена для выявления е-антигена вируса гепатита В в сыворотке (плазме) крови людей методом иммуноферментного анализа и может быть использована для специфической диагностики, определения активности инфекционного процесса, прогнозирования тяжести и исхода гепатита В.

Тест-система «ДС-ИФА-анти-HBe» предназначена для выявления антител класса IgG к е-антигену вируса гепатита В в сыворотке (плазме) крови человека и может быть

использована при прогнозе течения инфекционного процесса и контроле проводимой терапии при гепатите В.

Для изучения специфичности новых тестов была проведена оценка распределения

оптической плотности (ОП) образцов сывороток крови, содержащих и не содержащих

НВeАg или анти-НВе. Были использованы образцы сывороток крови здоровых доноров и образцы сывороток крови, отобранные по различным маркерам вируса гепатита В на

станциях переливания крови. Результаты исследования показали достоверное разделение двух популяций. Значения ОП образцов сывороток, не содержащих НВеАg, колебались в пределах от 0,011 до 0,111, а основной пик образцов сывороток, содержащих НВеАg находился в пределах от 2,186 до 3,186 (рисунок 1а).

Рис.1a. Распределение ОП образцов сывороток, содержащих и не содержащих HBeAg в тест-системе «ДС-ИФА- HBeAg »
Пик, соответствующий группе сывороток с низкой ОП (0,3-0,6), вероятно, составляют образцы сывороток, отобранные на ранних этапах инфекционного процесса.

Уже в инкубационном периоде у больных закономерно регистрируются в крови НВsAg и НВеАg, что подтверждает их потенциальную эпидемиологическую опасность.

Диапазон оптической плотности образцов сывороток, не содержащих анти-НВе

находился в пределах от 0,002 до 0,122, а основной пик ОП образцов сывороток, содержащих анти-НВе, находился в пределах от 2,431 до 3,231(рисунок 1б).

Рис. 1б. Распределение ОП образцов сывороток, содержащих и не содержащих анти-Н Be , в тест-системе «ДС-ИФА-анти- HBeAg »
Были изучены особенности распределения ОП анти-НВе положительных образцов

сывороток, содержащих (n =78) и не содержащих HВsAg (n =56).

Рис. 2а. HBe -положительных образцов сывороток, содержащих HBsAg в тест-системе «ДС-ИФА-анти- HBe ».

Рис.2б. Особенности распределения ОП анти- HBe -положительных образцов сывороток, не содержащих HBsAg в тест-системе «ДС-ИФА-анти- HBe ».
Оптические плотности 87% анти-HBe-позитивных образцов сывороток, не содержащих HВsAg, находились в пределах от 0,41до 0,81 (рисунок 2б). При этом лишь у 14% анти-HBe-положительных образцов сывороток, содержащих HВsAg, ОП была в этом диапазоне (рисунок 2а). Известно, что в фазу поздней реконвалесценции при отрицательной реактивности на НВsAg постепенно происходит снижение титров антител к НBеAg (рисунок 2б). Поэтому, возможно, преимущественная концентрация анти-НВе-положительных образцов соответствовала ОП меньше 0,8.

Полученные данные свидетельствуют о достоверности разделения положительных и

отрицательных образцов сывороток крови независимо от стадии заболевания. Изучение чувствительности и специфичности тест-систем «ДС-ИФА-HBeAg» и «ДС-ИФА-антиHBe» проводили в сравнении с тестом «Monolisa HBe» («BIORAD»,Франция) (таблица 1).

Таблица 1
Сравнительная характеристика чувствительности и специфичности

тест-систем ДС-ИФА-HВeAg и ДС-ИФА-антиHB

Показатель	Определение HВeAg		Определение антиHBe
Показатель	НПО «ДС», ДС-ИФА-HВeAg	«BIO-RAD», «Monolisa HВe»	НПО «ДС», ДС-ИФА-антиHBe	«BIO-RAD»,
Количество исследованных образцов	67	67	32	32
Выявлено положительных образцов	47	47	16	16
Выявлено отрицательных образцов	20	20	16	16

Данные, приведенные в таблице 1, показывают, 100%-ное совпадение результатов.

Известно, что дополнительное прогностическое значение имеет сочетанная индикация НВеАg и анти-НВе, особенно их количественная оценка. Быстрое нарастание титра анти-НВе характеризует активный гуморальный иммунный ответ и практически исключает угрозу хронизации . Нами проанализировано изменение содержания НВеАg/анти-НВе в образцах сывороток крови пациентов с клиническим диагнозом «острый вирусный гепатит В» (таблица 2).

Таблица 2
Динамика сероконверсии НВеАg/анти-НВе у больных ОГВ

Обследуемый больной	День отбора крови*	НВеАg	анти-НВе ОПобр./ОПкр.		Анти-HBc	Анти- HBc IgM
	1	1,4+	2,1+	+	+	+
	12	0,5-	1,0+	+	+	+
	21	0,3-	1,3+	+	+	+
	1	1,2+	1,2+	+	+	+
	5	0,4-	1,0+	+	+	+
	13	0,2-	2,5+	+	+	+
	1	1,2+	0,6-	+	+	+
	21	0,2-	4,6+	+	+	+
	30	0,2-	9,7+	+	+	+
	1	2,1+	0,5-	+	+	+
	8	0,6-	1,1+	+	+	+
	28	0,3-	2,8+	+	+	+
	1	0,7-	2,2+	+	+	+
	8	0,3-	2,2+	+	+	+
	15	0,3-	2,8+	+	+	+
	38	0,2-	3,0+	+	+	+
6	1	1,1+	4,4+	+	+	+
	14	0,5-	3,8+	+	+	+

* от поступления в стационар
Все образцы сывороток были исследованы на наличие серологических маркеров

ОГВ: НВsAg, анти-НВс, анти-НВс IgM. Период наблюдения варьировал от 13 до 38 дней. У больных №1, №2 и №6 анти-НВе обнаружены уже на фоне снижения титра НВеАg. У пациентов №3 и №4 анти-НВе появились после исчезновения из сыворотки крови НВеАg на 21 и 8 день соответственно. Анализ детекции НВеАg в сыворотке крови пациента №5 при поступлении в стационар показал отрицательный результат. При этом была зарегистрирована конверсия на анти-НВе уже в первый день обследования.

У всех обследуемых прослежена тенденция к увеличению титра антител к НВеАg в

сыворотке крови, что позволяет прогнозировать благоприятную динамику клинических

проявлений ОГВ и скорое выздоровление.

Проведенное изучение новых тест-системы показало их высокую диагностическую надежность. Результаты сравнения ДС-ИФА-HBeAg» и «ДС-ИФА-антиHBe» показали 100% совпадение с тестом «Monolisa HBe».

При исследовании образцов сывороток больных гепатитом В в динамике, тесты

подтвердили высокую чувствительность и специфичность.

Короткое время инкубации исследуемых образцов и конъюгата (1 ч) позволяет в минимальные сроки определить правильную тактику проведения лечебных мероприятий. Созданные тест-системы удобны в постановке, экономичны (требуется 50 мкл сыворотки для определения HBeAg и 10 мкл сыворотки для определения анти-HBe). Высокие качественные характеристики тестов позволяют успешно использовать их при прогнозе течения инфекционного процесса и контроле проводимой терапии при гепатите В.
ЛИТЕРАТУРА

1.Майер К.П. Гепатит и последствия гепатита / К.П. Майер.– М., ГЕОТАР, Медицина,1999.- C.720

2.Онищенко Г.Г. Распространение вирусных гепатитов как угроза национальной безопасности / Г.Г. Онищенко, Л.А. Дементьева // Журнал микробиологии. –2003.-№ 4.- С.93-99.

3.Соринсон С.Н. Вирусные гепатиты / С.Н.Соринсон. - Санкт-Петербург, Теза, 1997.- 306 С.

4. Baumeister M. Hepatitis B Virus e Antigen Specific Epitopes and Limitations of Commercial Anti-HВe Immunoassays / M. Baumeister // Journal of Medical Virology.- 2000.-N 60.- Р.256-263.

5.Kane M. Global program for control of hepatitis B infection / M. Kane// Vaccine. – 1995.-N131(Suppl. 1).- Р.47-6. Shunichi Sat о . Hepatitis B Virus Strains with Mutations in the Core Promoter in Patients with Fulminant Hepatitis / Shunichi Sato, Kazuyuki Suzuki // Annals of Internal Medicine. – 1995.- N122.- Р.241-248.

7. Ou J.- Н . Molecular biology of hepatitis B virus e antigen./ J.-Н.Ou // Journal of Gastroenterology and Hepatology. – 1997.- № 12 (Suppl.1)- Р. 178- 187.

8.Tiollais P. The hepatitis B virus. / P.Tiollais, C.Pourcel, A.Dejean // Nature. – 1985. – P.317, 489-495
Опубликовано: Ж. «Клиническая лабораторная диагностика» - 2005.-№6-С.-34-37

Ключевые слова

РАННЯЯ ВИЧ-ИНФЕКЦИЯ / ДЛИТЕЛЬНО ТЕКУЩАЯ ВИЧ-ИНФЕКЦИЯ / ДИФФЕРЕНЦИРОВАНИЕ РАННЕЙ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ / ДАВНОСТЬ ЗАРАЖЕНИЯ ВИЧ / ВИЧ-1 / EARLY HIV INFECTION / LONG-TERM HIV INFECTION / DIFFERENTIATION OF EARLY HIV INECTION / REMOTENESS OF HIV INFECTION / HIV-1 Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы - Загрядская Юлия Евгеньевна, Нешумаев Дмитрий Александрович, Кокотюха Юлия Александровна, Мейрманова Елена Маратовна, Ольховский Игорь Алексеевич

Эпидемиологическая ситуация по ВИЧ-инфекции в Российской Федерации остается крайне напряженной, что требует поиска новых, более эффективных и экономически целесообразных решений, направленных на противодействие эпидемии. Включение лабораторных исследований с использованием тест-системы для определения давности заражения ВИЧ-инфекцией в рутинную практику эпидемиологического надзора позволит определить частоту встречаемости ранних случаев инфицирования среди вновь выявленных ВИЧ-позитивных лиц. Анализ данного критерия на популяционном уровне поможет объективно оценивать эффективность профилактических, противоэпидемических мероприятий, осуществляемых на конкретной территории. Повышение объективности в определении времени, прошедшего с момента заражения ВИЧ-1 , при помощи тест-системы ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК предоставляет возможность использовать полученные результаты при эпидемиологических расследованиях с целью более точного и полного выявления контактных лиц. Определение вероятного срока инфицирования может потребоваться также при решении вопроса о назначении антиретровирусной терапии, в качестве дополнительного исследования при мониторинге лекарственной устойчивости ВИЧ. Цель настоящей работы состояла в определении эффективности новой тест-системы ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК для установления вероятных сроков инфицирования ВИЧ-1 . Были исследованы образцы сывороток (плазмы) крови ВИЧ-инфицированных лиц с эпидемиологически установленным сроком заражения (п = 281) и образцы коммерческих сероконверсионных панелей. Результаты проведенного исследования показали, что вероятность правильного определения давности заражения ВИЧ-1 для образцов от лиц с наиболее вероятным сроком установленного факта инфицирования составила 95%, для образцов коммерческих сероконверсионных панелей 100%. Полученные данные продемонстрировали высокую эффективность тест-системы ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК при определении вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1-го типа, что в сочетании с быстротой и простотой выполнения процедуры позволяет рекомендовать ее к использованию в лабораторной практике.

Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине, автор научной работы - Загрядская Юлия Евгеньевна, Нешумаев Дмитрий Александрович, Кокотюха Юлия Александровна, Мейрманова Елена Маратовна, Ольховский Игорь Алексеевич

Диагностические характеристики иммуноэнзимной тест-системы повышенной чувствительности для выявления ВИЧ-инфекции
2014 / Трохимчук Т. Ю., Сердюк В. Г., Ганова Л. А., Горлов Ю. И., Михалап Ю. И., Спивак Н. Я.
Современные молекулярно-генетические методы исследования в эпидемиологическом надзоре за ВИЧ-инфекцией
2014 / Зайцева Наталья Николаевна, Ефимов Евгений Игоревич, Носов Николай Николаевич, Парфенова Ольга Владимировна, Пекшева Ольга Юрьевна
Современные молекулярно-генетические методы исследования в характеристике изолятов ВИЧ-1 инфицированных пациентов учреждений пенитенциарной системы
2015 / Зайцева Наталья Николаевна, Пекшева Ольга Юрьевна, Парфенова Ольга Владимировна, Бутина Татьяна Юрьевна, Кузнецова Ирина Васильевна
Диагностика ВИЧ-инфекции у детей первых месяцев жизни, рожденных от ВИЧ-инфицированных матерей
2012 / Богословская Елена Владимировна, Шипулин Г. А.
Оценка безопасности донорской крови при реализации мер по профилактике нозокомиальной передачи ВИЧ-инфекции при гемотрансфузиях
2017 / Сандырева Т.П., Подымова А.С., Кукаркина В.А., Попкова Н.Г., Ножкина Н.В.
Вич-инфекция вызов человечеству. Есть ли шансы победить заболевание?
2012 / Урываев Л. В., Бобкова М. Р., Лаповок И. А.
Особенности проявлений ВИЧ-инфекции в полости рта
2017 / Полянская Лариса Николаевна
Вирус иммунодефицита человека и инфекции, передаваемые половым путем, среди уязвимых групп населения в Казахстане
2015 / Трумова Ж.З., Акышбаева Кульбаршин Сабыровна, Джумабаева С.М.
Особенности раннего нейросифилиса у ВИЧ-инфицированных больных
2018 / Шпрах Владимир Викторович, Костина Ульяна Сергеевна
Естественное течение ВИЧ-инфекции у детей с учетом пути заражения
2014 / Денисенко Валентин Борисович, Симованьян Э.Н.

Assessment of a new "DS-EIA-HIV-AB-TERM" assay to determine the probable time of infection with human immunodeficiency virus-1 (HIV-1)

The epidemiological situation for HIV infection in Russia remains to be extremely stringent, which requires a search for new, more efficient and cost-effective solutions aimed at countering the epidemic. The inclusion of laboratory studies with the use of a test system for the determination of the remoteness of HIV infection in routine surveillance practices will permit to determine the frequency of occurrence of early cases of infections among newly diagnosed HIV-positive persons. The analysis of this criterion at the population level will help to objectively evaluate the effectiveness of prevention, control activities carried out in a particular area. The increase of objectivity in the determination of the time elapsed from the moment of infection of HIV-1 with the use of the test system DSEIA-HIV-Ab-TERM provides the opportunity to use the obtained results in the epidemiological investigation for the purpose of more accurate and complete identification of contact persons. The determination of the probable period of infection may also be required in the solving the question on the prescription of antiretroviral therapy as a complementary study in the monitoring of HIV drug resistance. The aim of this work was to determine the effectiveness of the new test system DS-EIAHIV-Ab-TERM for the determination of the likely timing of HIV-1 infection. There were studied serum samples (plasma) of blood of HIV-infected persons with epidemiologically established time of infection (n = 281) and samples of commercial seroconversion panels. Results of the performed study showed that the probability of a correct detection of the remoteness of HIV-1 infection for samples from individuals with the most probable time of the established fact of infection was 95%, for samples of commercial seroconversion panels 100%. The data demonstrated the high efficacy of the test system DS-“EIAHIV-Ab-TERM” in the determination of the most probable timing of infection with human immunodeficiency virus type 1, that in combination with the speed and simplicity of the procedure allows to recommend it for use in the laboratory practice.

Текст научной работы на тему «Оценка новой тест-системы дс-ифа-вич-ат-срок для определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1-го типа (ВИЧ-1)»

УДК 616.98:578.828.6]-092:612.017.1.064]-078

ЗагрядскаяЮ.Е.1, Нешумаев Д.А.2, КокотюхаЮ.А.2, МейрмановаЕ.М.2, ОльховскийИ.А.3, ПузыревВ.Ф.1, Бурков АН.1, Уланова Т.И.1

оценка новой тест-системы дс-ифа-вич-ат-срок для определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1-го типа (вич-1)

1ООО «НПО «Диагностические системы», 603093, г. Нижний Новгород; 2КГБУЗ Красноярский краевой Центр по профилактике и борьбе со СПИД, 660049, г. Красноярск; 3ФГБУ «Гематологический научный центр Минздрава России» (Красноярский филиал), г. Красноярск

Цель настоящей работы состояла в определении эффективности новой тест-системы ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК для установления вероятных сроков инфицирования ВИЧ-1.

Были исследованы образцы сывороток (плазмы) крови ВИЧ-инфицированных лиц с эпидемиологически установленным сроком заражения (n = 281) и образцы коммерческих сероконверсионных панелей. Результаты проведенного исследования показали, что вероятность правильного определения давности заражения ВИЧ-1 для образцов от лиц с наиболее вероятным сроком установленного факта инфицирования составила 95%, для образцов коммерческих сероконверсионных панелей - 100%. Полученные данные продемонстрировали высокую эффективность тест-системы ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК при определении вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1-го типа, что в сочетании с быстротой и простотой выполнения процедуры позволяет рекомендовать ее к использованию в лабораторной практике.

Ключевые слова: ранняя ВИЧ-инфекция; длительно текущая ВИЧ-инфекция; дифференцирование ранней ВИЧ-инфекции; давность заражения ВИЧ; ВИЧ-1.

Для цитирования: Эпидемиология и инфекционные болезни. 2015; 20 (3): 23-27. Zagryadskaya Yu.E.1, Neshumaev D. A2, Kokotyukha Yu.A.2, MeyrmanovaE.M.2, Olkhovskiy I.A.3, Puzyrev V.F.1, Burkov A.N.1, Ulanova T.I."\ ASSESSMENT oF A NEw "DS-EIA-HIV-AB-TERM" ASSAY To DETERMINE THE PRoBABLE TIME oF INFECTIoN wITH HUMAN IMMUNODEFICIENCY VIRUS -1 (HIV-1)

JNPO "Diagnostic Systems", 22, Yablonevaya Str. , Nizhniy Novgorod, Russian Federation, 603093

2Krasnoyarsk Regional Centre of AIDS Prevention, 45, Karla Marksa Str., Krasnoyarsk, Russian Federation, 660049

3Hematological Scientific Centre (Krasnoyarsk branch), 50, Akademgorodok, Krasnoyarsk, Russian Federation, 660036

The epidemiological situation for HIV infection in Russia remains to be extremely stringent, -which requires a search for new, more efficient and cost-effective solutions aimed at countering the epidemic. The inclusion of laboratory studies with the use of a test system for the determination of the remoteness

of HIV infection in routine surveillance practices will permit to determine the frequency of occurrence of early cases of infections among newly diagnosed HIV-positive persons. The analysis of this criterion at the population level will help to objectively evaluate the effectiveness of prevention, control activities carried out in a particular area. The increase of objectivity in the determination of the time elapsed from the moment of infection of HIV-1 with the use of the test system DS-EIA-HIV-Ab-TERMprovides the opportunity to use the obtained results in the epidemiological investigation for the purpose of more accurate and complete identification of contact persons. The determination of the probable period of infection may also be required in the solving the question on the prescription of antiretroviral therapy as a complementary study in the monitoring of HIV drug resistance. The aim of this work was to determine the effectiveness of the new test system DS-EIA-HIV-Ab-TERM for the determination of the likely timing of HIV-1 infection. There were studied serum samples (plasma) of blood of HIV-infected persons with epidemiologically established time of infection (n = 281) and samples of commercial seroconversion panels. Results of the performed study showed that the probability of a correct detection of the remoteness of HIV-1 infection for samples from individuals with the most probable time of the established fact of infection was 95%, for samples of commercial seroconversion panels - 100%. The data demonstrated the high efficacy of the test system DS-"EIA-HIV-Ab-TERM" in the determination of the most probable timing of infection with human immunodeficiency virus type 1, that in combination with the speed and simplicity of the procedure allows to recommend it for use in the laboratory practice.

Key words: early HIV infection; long-term HIV infection; differentiation of early HIV inection; remoteness of HIV infection; HIV-1.

Citation: Epidemiologiya i Infektsionnye Bolezni. 2015; 20(3): 23-27. (In Russ.)

Для корреспонденции: Загрядская Юлия Евгеньевна, e-mail: [email protected]

Распространение инфекции, вызываемой вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), остается актуальной проблемой в современном мире. Система эпидемиологического надзора, включающая лабораторную диагностику, лечебные и профилактические мероприятия с широким охватом населения, является основным средством противодействия ВИЧ-инфекции.

Стандартный алгоритм диагностики ВИЧ-инфекции, принятый в Российской Федерации , и доступные лабораторные технологии не позволяют объективно определить вероятный срок инфицирования ВИЧ. Однако выявление истинных случаев раннего инфицирования ВИЧ могло бы быть полезным критерием, дополняющим основные эпидемиологические параметры, такие как заболеваемость или пораженность. Этот показатель позволит оценить скорость развития эпидемии более точно и оперативно по сравнению с общепринятыми индикаторами. Полученные данные можно рассматривать в качестве критерия для определения эффективности профилактических и противоэпидемических мероприятий, проводимых на конкретной территории. Для оценки динамики инфекционного процесса необходимо знать не столько общее количество инфицированных пациентов (или показатели распространенности инфекции и пораженности населения), сколько количество вновь зараженных лиц за определенный промежуток времени . Из работы J. Eaton и T. Hallett известно, что динамика инцидентов не коррелирует с показателями распространенности ВИЧ-инфекции среди населения.

Кроме того, объективные сведения о вероятном сроке инфицирования, безусловно, могут оказать существенную помощь в эпидемиологическом расследовании путей заражения и своевременном выявлении максимального числа контактных лиц . Показано, что половина всех случаев заражения ВИЧ-инфекцией происходит от лиц, находящихся именно на ранней стадии инфицирования, что поддерживает стратегию раннего применения антире-тровирусной терапии .

Наряду с этим молекулярно-генетический мониторинг в системе эпидемиологического надзора, дополненный исследованием на давность заражения, может позволить перейти от уровня филогенетического анализа над субтипами и резистентными штаммами ВИЧ к уровню филодинамиче-ских исследований .

Лабораторная служба за рубежом на протяжении последних лет имеет возможность оценивать частоту возникновения новых случаев инфекции (incidence) . Разработаны и продолжают совершенствоваться тесты для дифференциации ранней ВИЧ-инфекции . Созданы коллекции образцов биологического материала для оценки подобных тестов, и эти коллекции постоянно пополняются .

В связи с вышеизложенным разработка и использование в работе центров СПИД отечественной тест-

системы, позволяющей дифференцировать раннюю ВИЧ-инфекцию, будут иметь положительный экономический и практический эффекты. Использование в клинической практике разработанного теста может стать полезным источником информации и объективным критерием оценки эффективности реализации государственных и региональных программ в сфере здравоохранения по компоненту профилактики, диагностики и лечения ВИЧ-инфекции.

Целью исследования было оценить эффективность разработанной тест-системы ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК для установления вероятных сроков инфицирования ВИЧ-1.

Материалы и методы

Работа выполнена в ООО НПО «Диагностические системы» (Нижний Новгород). Образцы сыворотки (плазмы) крови ВИЧ-инфицированных лиц с эпидемиологически установленными сроками заражения (n = 281; группа М, субтип А) предоставлены КГБУЗ «Красноярский краевой центр по профилактике и борьбе со СПИД» (Красноярск). Вероятную давность заражения определяли при исследовании образцов сывороток (плазмы) крови у пациентов, проходивших повторное обследование с небольшим интервалом времени (2-4 нед), по динамике лабораторных маркеров ВИЧ-инфекции с учетом эпидемиологического анамнеза и у ВИЧ-инфицированных пациентов, находящихся на диспансерном учете более трех лет.

Параллельно исследовали образцы 33 коммерческих сероконверсионных панелей производства Zeptometrix Corp. и SeraCare Life Sciences (США) (группа М, субтип B). Кроме того, возможность исследования образцов сывороток (плазмы) крови, содержащих антитела к ВИЧ-1 различных субтипов, в том числе ВИЧ-1 группы О, оценивали при тестировании образцов следующих коммерческих панелей: "Референс-панель сывороток крови человека, содержащих и не содержащих антитела к ВИЧ 1-го типа (субтипы А, В, С) и 2-го типа" (МЦ "Авиценна", Россия) (за исключением образца № 24, содержащего антитела к ВИЧ-2); 1-я международная референс-панель анти-ВИЧ (NIBSC Code: 02/210) (субтипы А, В, С, Е) (за исключением образца №5, содержащего антитела к ВИЧ-2); Anti-HIV Mixed Subtype Panel (MSP-HIV-001) (за исключением образцов № 19, 20, содержащих антитела к ВИЧ-2) и образцы сывороток (плазмы) крови, содержащие антитела к ВИЧ-1 группы О (№ 1342, К00175, К00259; BioMex).

Действующим началом разработанной тест-системы являются: рекомбинантные антигены, аналогичные структурным белкам ВИЧ-1 gp160 (env) и gp41 (env) ВИЧ-1 группы О производства ООО "НПО "Диагностические системы", сорбированные на стрипах полистиролового разборного планшета; конъюгаты - рекомбинантные антигены gp41 ВИЧ-1 и gp41 ВИЧ-1 группы О, меченные биотином, и стрептавидин, меченный пероксидазой хрена. При разработке теста выбраны антигены ВИЧ-1, облада-

ющие наибольшей диагностической значимостью: gp160, включающий иммунодоминантный регион gp41, и gp41 ВИЧ-1 группы О. Схема проведения анализа в тест-системе ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК представляет собой двустадийный "сандвич" -вариант иммуноферментного анализа (ИФА) с поэтапным внесением конъюгатов. Разработана система визуальной оценки внесения всех компонентов и образцов. Время постановки реакции занимает менее двух часов. Учет результатов проводится при помощи спектрофотометра.

Была проведена оценка доверительного интервала для правильности определения срока заражения с использованием тест-системы при доверительной вероятности 95% с помощью программы "Калькулятор доверительных интервалов Р. Хер-берта".

Результаты и обсуждение

Стратегия, реализуемая в тест-системе, основана на изменении количественного и качественного состава антител в образце в зависимости от срока инфицирования. При исследовании образцов сыворотки (плазмы) крови методом ИФА определяли оптическую плотность (ОП) нативного и разведенного образцов, отражающую уровень ВИЧ-специфических антител. По изменению ОП образца при разведении по отношению к ОП нативного образца устанавливали либо раннее инфицирование, либо длительно текущую ВИЧ-инфекцию.

Проведенные исследования показали высокую эффективность разработанной тест-системы ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК. Обладая чувствительностью тестов третьего поколения для выявления антител к ВИЧ-1, ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК правильно определила давность заражения ВИЧ-1 для всех образцов коммерческих сероконверсионных панелей (табл. 1, 2).

Вероятность правильного определения давности заражения ВИЧ-1 для образцов с эпидемиологически установленными сроками инфицирования составила 95% (см. табл. 2).

Важно отметить, что иммунный ответ к ВИЧ случайного индивидуума, выбранного из популяции, в отдельных случаях может быть как гипер-, так и ги-

Таблица 1

Результаты тестирования сероконверсионных панелей в ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК

Сероконверсион- Дни с 1-го Количество позитивных образцов в панели/ общее количество образцов панели Результат тестирования в

ная панель забора крови тест для выявления антител к ВИЧ-1/2, СЕ0483 ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК

ВВ1 РЯВ 914 31 5/5 5/5 Ранняя ВИЧ-1 инфекция

ВВ1 РЯВ 916 35 2/6 2/6 То же

ВВ1 РЯВ 925 49 2/6 2/6 "

ВВ1 РЯВ 929 28 3/7 3/7 "

ВВ1 РЯВ 930 10 2/4 2/4 "

ВВ1 РЯВ 931 42 4/9 4/9 "

ВВ1 РЯВ 933 27 2/3 2/3 "

ВВ1 РЯВ 934 11 3/3 3/3 "

ВВ1 РЯВ 940 29 6/8 6/8 "

ВВ1 РЯВ 941 25 3/6 3/6 "

ВВ1 РЯВ 942 14 0/4 0/4 "

ВВ1 РЯВ 944 16 2/6 2/6 "

ВВ1 РЯВ 947 20 3/4 3/4 "

ВВ1 РЯВ 951 19 1/6 1/6 "

ВВ1 РЯВ 952 21 3/6 3/6 "

ВВ1 РЯВ 955 14 2/5 2/5 "

ВВ1 РЯВ 965 21 3/6 3/6 "

ВВ1 РЯВ 966 51 3/10 3/10 "

ВВ1 РЯВ 968 35 4/10 4/10 "

ВВ1 РЯВ 969 77 3/10 3/10 "

ZMС НГУ 6243 33 2/10 2/10 "

ZMС НГУ 6247 30 1/10 1/10 "

ZMC НГУ 9014 31 5/7 5/7 "

ZMC НГУ 9017 35 3/6 3/6 "

ZMC НГУ 9018 33 2/11 2/11 "

ZMC НГУ 9021 57 2/17 2/17 "

ZMC НГУ 9022 29 1/9 1/9 "

ZMC НIV 9030 54 1/16 1/16 "

ZMC НIV 9031 157 3/19 3/19 "

ZMC НIV 9032 55 7/14 7/14 "

ZMC НIV 9077 104 15/29 15/29 "

ZMC НГУ 9079 95 15/25 15/25 "

ZMC НIV 12008 42 4/13 4/13 "

Общее количество позитивных образцов...

пореактивным. Распределение генеральной совокупности иммунных характеристик в популяции всегда содержит варианты, не укладывающиеся в интервал, принятый считать нормой. По этой причине установление вероятного срока инфицирования по динамике лабораторных маркеров ВИЧ-инфекции в некоторых случаях может быть неточным. Показано, что для образцов с наиболее вероятным сроком установленного факта заражения до 3 мес правильность определения периода инфицирования полностью соответствует

Таблица 2

Правильность определения вероятного срока инфицирования ВИЧ-1 при помощи ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК

Число Число верно Правильность определения тестом ДС-ИФА-

Образцы Группа образцов определенных об- ВИЧ-АТ-СРОК вероятного срока инфицирования

в группе разцов в группе ВИЧ-1 (при доверительной вероятности 95%), %*

С эпидемиоло- до 3 мес 81 81 100,00 (95,50-100,00)

гически установ- 3-6 мес 47 42 89,36 (77,41-95,37)

ленными сроками

заражения ВИЧ-1 6-9 мес 22 17 77,27 (56,56-89,88)

до 9 мес 150 140 93,33 (88,16-96,34)

9 мес и более (уровень CD4+ неизвестен) 79 76 96,20 (89,42-98,70)

9 мес и более (низкий уровень CD4+ 52 51 98,08 (89,88-99,66)

(< 200 кл/мл)

9 мес и более 131 127 96,95 (92,41-98,81)

Общий результат... 281 267 95,02 (91,81-97,01)

Сероконверсион- До 157 дней 117 117 100 (96,82-100,00)

ных панелей

Примечание. * - необходимо учитывать вероятностный характер периода инфицирования, установленного при лабораторном исследовании.

данным, полученным для образцов с точно установленным сроком заражения ВИЧ (т. е. для образцов сероконверсионных панелей), и составляет 100%. При исследовании образцов из группы «до 9 мес» совпадение результатов тестирования с результатами предварительно установленных сроков заражения составило 93,33%, для группы «инфицирование более 9 мес» - 96,95%. Одной из основных причин получения неверных результатов для группы «инфицирование до 9 мес» являются индивидуальные особенности иммунного ответа (быстрый ответ). Для группы лиц, инфицированных более 9 мес, причинами могут быть как особенности иммунного ответа (медленный ответ), так и серореверсия (вследствие проводимого лечения или глубокого иммунодефицита на поздних стадиях ВИЧ-инфекции) .

При тестировании коммерческих панелей «Референс-панель сывороток крови человека, содержащих и не содержащих антитела к ВИЧ 1-го типа (субтипы А, В, С) и 2-го типа», NIBSC Code: 02/210, MSP-HIV-001 и образцов №1342, К00175, К00259, предоставленных компанией BioMex, подтверждена возможность исследования в ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК образцов плазмы крови, содержащих антитела к ВИЧ-1 различных субтипов и ВИЧ-1 группы О.

Заключение

Полученные данные свидетельствуют, что разработанная иммуноферментная тест-система позволяет с высокой вероятностью разделять ранний сероконверсионный период ВИЧ-инфекции и более поздний период после заражения. Наличие исследования на давность заражения открывает возможность использования получаемой информации не только на популяционном, но и на индивидуальном уровне. Высокая эффективность тест-системы ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК в сочетании с быстротой и простотой выполнения процедуры позволяет ре-

комендовать ее для применения в эпидемиологической и клинической практике.

3. Бобкова М.Р., Лаповок И.А. Лабораторные методы дифференциальной диагностики острой, ранней и текущей ВИЧ-инфекции (лекция). Клиническая лабораторная диагностика. 2007; 12: 25-32.

4. Нешумаев Д.А., Рузаева Л.А., Шевченко Н.М., Кокотюха Ю.А., Бойко Е.П., Ельчининова Н.А. и др. Опыт использования теста для определения давности заражения в диагностическом алгоритме ВИЧ-инфекции. Инфекция и иммунитет. 2012; 2 (1-2): 420.

6. Нешумаев Д.А., Татьянина Е.А., Малышева М.А., Шевченко Н.М., Кокотюха Ю.А., Мейрманова Е.М. и др. Опыт совместного использования филогенетического анализа и определения давности инфицирования при расследовании внутри-больничного заражения ВИЧ-инфекцией. В кн.: Материалы VIII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Молекулярная диагностика -2014». М.; 2014; т. 1: 64-5.

7. Методические рекомендации МР 3.1.5.0075/1-13 «Эпидемиология. Профилактика инфекционных болезней. ВИЧ-инфекции. Надзор за распространением штаммов ВИЧ, резистентных к антиретровирусным препаратам», утв. Роспотребнадзором 20.08.2013 г. М.; 2013.

8. Лаповок И.А., Казеннова Е.В., Кандрушин Е.В., Баженов А.И., Годков М.А., Ольшанский А.Я. и др. Сравнительный анализ лабораторных методов дифференциальной диагностики ранней ВИЧ-инфекции. Вопросы вирусологии. 2008; 5: 46-9.

11. Murphy G., Parry J.V. Assay for the detection of recent infections with human immunodeficiency virus type 1. Eurosurveillance. 2008; 13 (36-4): 4-10.

Поступила 04.03.15

1. Methodological Guidelines of the Ministry of Health and Social development of the Russian Federation "Epidemiological Investigation of HIV Incidents and Implementation of Anti-epidemic Measures" No. 6963-РХ dated 20.09.2007. Moscow; 2007. (in Russian)

2. Methodological Guidelines of the Ministry of Health and Social Development of the Russian Federation "Methodological Guidelines on HIV Examination" No. 5950-РХ dated 06.08.2007. Moscow; 2007. (in Russian)

3. Bobkova M.R., Lapovok I.A. Laboratory methods of differentiated diagnostics of acute, recent and current HIV (lecture). Klin-icheskaya laboratornaya diagnostika. 2007; 12: 25-32. (in Russian)

4. Neshumaev D.A., Ruzaeva L.A., Shevchenko N.M., Kokotyukha Y.A., Boyko E.P., El"chininova N.A. et al. Experience of use of the assay for determination of infection term in HIV diagnostic algorithm. Infektsiya i immunitet. 2012; 2 (1-2): 490. (in Russian)

5. Eaton J.W., Hallett T.B. Why the proportion of transmission during early-stage HIV infection does not predict the long-term impact of treatment on HIV incidence. Proc. Natl. Acad. Sci. 2014; 111 (45): 16202-7.

6. Neshumaev D.A., Tat"yanina E.A., Malysheva M.A., Shevchenko N.M., Kokotyukha Y.A., Meyrmanova E.M. et al. Experience of simultaneous use of phylogenetic analysis and determination of the infection term in internal clinical investigation of HIV infection. In: Proceedings of the VIII Russian Research/Practical Conference with International Participation "Molecular Diagnostics - 2014: . Moscow; 2014; vol. 1: 64-5. (in Russian)

7. Methodological guidelines MR 3.1.5.0075/1-13 "Epidemiology. Prevention of infection diseases. HIV infections. Control over

distribution of HIV strains, resistant to antiretroviral agents", approved by Federal Service for Supervision of Consumer Rights Protection and Human Welfare, 20.08.2013. Moscow; 2013. (in Russian)

8. Lapovok I.A., Kazennova E.V., Kandrushin E.V., Bazhenov A.I., Godkov M.A., Ol"shanskiy A.Y. et al. Comparative analysis of laboratory methods of differential diagnostics of recent HIV infection. Voprosy virusologii. 2008; 5: 46-9. (in Russian)

9. Hattori J., Shiino T., Gatanaga H., Yoshida S., Watanabe D., Minami R. et al. Trends in transmitted drug-resistant HIV-1 and demographic characteristics of newly diagnosed patients: Nationwide surveillance from 2003 to 2008 in Japan. Antiviral Res. 2010; 88 (1): 72-9.

10. When and how to use assays for recent infection to estimate HIV incidence at a population level. UNAIDS/WHO Working Group on Global HIV/AIDS and STI Surveillance. WHO, 2011. Available at: http://www.who.int/hiv/pub/surveillance/ sti_surveillance/en/

11. Murphy G., Parry J.V Assay for the detection of recent infections with human immunodeficiency virus type 1. Eurosurveillance. 2008; 13 (36-4): 4-10.

12. Kassanjee R., Pilcher C., Keating S., Facente S., McKinney E., Price M. et al. Independent assessment of candidate HIV incidence assays on specimens in the CEPHIA repository. AIDS. 2014; 28 (16): 2439-49.

13. Duong Y.T., Qiu M., De A.K., Jackson K., Dobbs T., Kim A.A. et al. Detection of recent HIV-1 infection using a new limiting-antigen avidity assay: potential for HIV-1 incidence estimates and avidity maturation studies. PLoS One. 2012; 7 (3): e33328.

14. Curtis K.A., Hanson D.L., Kennedy M.S., Owen S.M. Evaluation of a multiplex assay for estimation of HIV-1 incidence. PLoS One. 2013; 8 (5): e64201.

15. Consortium for the Evaluation and Performance of HIV Incidence Assays (CEPHIA). Available at: http://www.incidence-estimation.org/cephiaqueries/cephiaDB/overview

Нешумаев Дмитрий Александрович, канд. мед. наук, врач клинической лабораторной диагностики лаборатории бактериологических и молекулярно-генетических исследований КГБУЗ «Краевой Центр СПИД»; Кокотюха Юлия Александровна, врач клинической лабораторной диагностики лаборатории иммуноферментных исследований КГБУЗ «Краевой Центр СПИД»; Мейрманова Елена Маратовна, врач клинической лабораторной диагностики лаборатории иммуноферментных исследований КГБУЗ «Краевой Центр СПИД»; Ольховский Игорь Алексеевич, канд. мед. наук, директор Красноярского филиала ФГБУ «Гематологический научный центр Минздрава России»; Пузырев Владимир Федорович, канд. биол. наук, нач. отд. производства рекомбинант-ных антигенов и конъюгатов ООО «НПО «Диагностические системы»; Бурков Анатолий Николаевич, доктор мед. наук, проф., генеральный директор ООО «НПО «Диагностические системы»; Уланова Татьяна Ивановна, доктор биол. наук, директор по научной работе ООО «НПО «Диагностические системы»

Похожие статьи: